Из 158,6 миллиона женщин, населяющих Соединенные Штаты, примерно 58,7 миллиона имеют наращенные волосы. Но не все расширения одинаковы. Существуют версии с зажимом, удлинители с микрошариками и с лентой, а также многие другие виды. В сегодняшнем посте мы обсудим кератиновые расширения, а также их преимущества и то, что вам следует знать, прежде чем приобретать их самостоятельно.

Что такое кератиновые расширения?

Подобно другим типам наращивания волос знаменитостей, наращивание на кератиновой связке состоит из небольших прядей необработанных (также известных как девственные) человеческих волос. В отличие от удлинителей с зажимом или лентой, они прикрепляются к волосам пользователя с помощью нагретого кератинового протеина. Это создает более естественный вид и более надежную укладку, что делает его традиционным фаворитом как для парикмахеров, так и для клиентов.

Каковы преимущества получения кератиновых расширений?

Как упоминалось выше, эти расширения обеспечивают гораздо более естественный вид, чем многие другие типы расширений.Они также просты в установке и, как и другие виды высококачественного наращивания, мгновенно придают вашим волосам объем и / или длину.

Еще одно явное преимущество кератиновой связи — ее продолжительность. При правильной установке и уходе эти пристройки могут прослужить до шести месяцев. Это означает, что клиентам нужно меньше посещать сервисные центры, что экономит время и деньги. Поскольку они сделаны из человеческих волос и имеют более естественный вид, владельцы могут красить свои наращенные волосы и укладывать их с помощью тепла, а также укладывать волосы вверх, не раскрывая секрет роскошных прядей.

Как ухаживать за кератиновыми наростами?

Хотя удлинение кератиновой связи может длиться долго, это не означает, что они неразрушимы. Это не повреждающие наращивания, но вам нужно будет правильно ухаживать за ними, чтобы защитить и их, и свои натуральные волосы. Вам следует избегать использования продуктов на масляной основе и воздерживаться от продуктов, содержащих сульфаты, чтобы не повредить сами связки. При необходимости используйте только мягкий шампунь и легкий кондиционер. Вам также следует ограничить количество укладок, которые вы делаете, и мыть волосы только через день, чтобы свести к минимуму повреждение от воды или тепла.После того, как вам наложили наращивание, вы должны подождать два дня, чтобы вымыть волосы. Прохладная вода — ваш друг, а грубые инструменты — ваш враг; используйте только кисть, рекомендованную вашим стилистом, чтобы защитить связь. Когда вы спите, вам следует заплести волосы или собрать их в хвост, чтобы не завязать узел. Вы не должны плавать с нарощенными волосами и должны сушить волосы сразу после душа, чтобы не повредить кератиновые связи.

Имейте в виду, что расширения не требуют особого обслуживания.Если вы решите получить их, убедитесь, что вы готовы принять на себя обязательства. Те, кто предпочитает сушить волосы на воздухе или ищет способ сократить потребность в укладке, могут рассмотреть другие варианты. Однако, если вы хотите мгновенно добавить объем и длину естественным образом, это может быть отличным вариантом.

Чтобы узнать больше о наших предложениях по расширению, свяжитесь с нами сегодня! Мы будем рады помочь вам повысить уверенность в себе в новом году.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с вашим системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Trind Keratin Treatment & Caring Color — EauMG

Trind — это голландская линия по уходу за ногтями, которая теперь доступна в Северной Америке.Обзор длинный, но у него есть предыстория.

У меня самые слабые, худшие ногти. Без преувеличения. Они тонкие, как бумага, и чистятся, как бананы. Для этого есть медицинская причина, на самом деле несколько. Когда у вас плохие ногти, вас так тошнит от «кончиков ногтей» и от того, что делать, даже если вы знаете, что у людей самые лучшие намерения и они ведут себя доброжелательно. Это все еще очень раздражает. Я хочу, чтобы люди понимали, что плохие ногти могут быть связаны с заболеваниями щитовидной железы, аутоиммунными расстройствами, анемией и даже ОКР и СДВГ (проблемы с контролем импульсов и грызть ногти).И люди с такими заболеваниями не всегда хотят добровольно предоставлять эту личную информацию … Это также раздражает, потому что я буквально попробовал каждый совет. Все они. И они не помогли моим ногтям. Я понимаю, что, учитывая другие симптомы моего заболевания, меня действительно меньше всего беспокоит.

В любом случае, я хочу сказать, что у меня никогда не было красивых ногтей, несмотря на то, что я «пробовала все» — витамины, добавки, кремы и любые другие средства, которые только можно придумать.

Trind связался со мной по поводу набора для восстановления ногтей с новостями об их запуске в Северной Америке. Я подумал, вы знаете, я перепробовал все и могу попробовать что-нибудь еще.Все, что мне нужно потерять, это мое время. Я так счастлив, что Тринд убедил меня попробовать это.

Keratin Kit — это набор, предназначенный для слабых, тонких ногтей или ногтей, восстанавливающихся после нанесения акрила.

Trind Кератиновое средство для восстановления ногтей

«TRIND Keratin Nail Restorer — увлажняющее средство для укрепления ногтей для чувствительных ногтей или ногтей, поврежденных, например, из-за использования искусственных ногтей».

Раньше я использовал много высоко оцененных «средств для восстановления ногтей», но в конечном итоге они жгли и раздражали кожу вокруг моих ногтей (а иногда даже мои тонкие ногти).Думаю, лучшее описание, которое я могу дать, это то, что это было похоже на втирание острого перца в открытую рану (хотя моя кожа не была повреждена). Я перестал их использовать, прежде чем смог увидеть какие-либо результаты. Trind’s — единственный, который я использовал, который не горит. Я использую его не реже одного раза в день (и до трех раз). Я на самом деле обнаружил, что хочу использовать его, потому что он имеет этот мягкий, нежный аромат розы и пиона, который мне очень нравится.

Это увлажняющий бальзам, которым вы «рисуете» как лак.Я даю ему пропитаться около минуты, а затем массирую. Вы можете продолжить с помощью следующего продукта, Nail Protector.

Этот продукт стал для меня HG. Я не знаю, является ли это самим продуктом, или потому, что я сейчас уделяю внимание своим советам, но у меня это работает. Мои кутикулы никогда не выглядели лучше. Я люблю этот продукт.

Защитная насадка для ногтей Trind

“TRIND Keratin Nail Protector — это защитный усилитель для ногтей с кератином, который можно использовать в сочетании с TRIND Keratin Nail Restorer.TRIND Keratin Nail Protector разработан специально для чувствительных ногтей или для ногтей, поврежденных, например, из-за использования искусственных ногтей ».

Это 2-й шаг в комплекте. Это похоже на базовое покрытие в том смысле, что он больше похож на лак для ногтей (в отличие от средства для восстановления ногтей). При высыхании становится прозрачным, глянцевым. Если хотите, можете нанести лак для ногтей. Не вызывает раздражения на моих нежных, чувствительных ногтях.

Вот сделка. В течение 4 недель вы наносите его ежедневно… после удаления жидкостью для снятия лака, не содержащей ацетона.Затем вы наносите реставратор, а затем протектор. Я занимался этим два месяца.

Этот продукт серьезно укрепил мои ногти. Впервые за долгое время я вижу рост (жалею, что не принял до и после, но в то же время меня так смутило то, что было раньше!). Мои ногти не гнутся, как бумага! Теперь они действительно чувствуют себя и кажутся нормальными. Никаких гребней / шелушений тоже нет! Я использовал так много подобных продуктов — укрепляющие, верхнее покрытие, базовое покрытие, и это единственное, что действительно сделало мои ногти более прочными.

Вот еще один продукт HG для меня. Даже Дэвид был поражен тем, насколько «нормальными» казались мои ногти. Я знаю, что можно злоупотреблять укрепляющими средствами для ногтей (и сделать ногти ломкими). Так что я использовал продукт ежедневно в течение 8 недель. Сейчас применяю 2-3 раза в неделю. Это первый раз, когда я могу вспомнить, что мои ногти не обладают гибкостью фруктового ролла.

Trind Caring Color Nail Polish

«Лаки для ногтей TRIND Caring Color — это больше, чем просто декоративные элементы.Мы добавили специальные ингредиенты, которые естественным образом прилипают к поверхности ногтей и улучшают состояние ногтей. Вы получите более сильные и быстрорастущие ногти ».

Линия Trind Caring Color предлагает все цвета, которые только можно вообразить, и вот три из них. Мои ногти значительно улучшились, и я действительно носила эти оттенки. Но мои ногти с самого начала были настолько плохими, что я все еще не готов показать их миру 🙂 Мне нужно еще несколько месяцев, но я доберусь до них! А пока накатила эти летние оттенки на искусственные ногти.Снято при естественном освещении.

Appletini CC198 — Зеленое яблоко Granny Smith с тончайшим золотым отливом.

Мятный джулеп CC199 — Смесь мяты и синего тиффани. Нет мерцания.

Surf’s Up CC200 — Бирюзово-голубой с супертонким королевским пурпурным и бирюзовым отливом.

Формула этого лака для ногтей более густая. На накладных ногтях они покрываются одним слоем. Формула сияния Surf’s Up немного менее густая.На ногти я нанесла один слой Appletini и Mint Julep и два слоя Surf’s Up. Ручка у этих полиролей длинная, и некоторым она кажется более удобной.

У меня все еще есть проблемы с ногтями, но примерно через два с небольшим месяца мои ногти выглядят лучше, чем когда-либо. Набор Keratin Treatment Kit изменил здоровье моих ногтей, став набором HG. Я чувствую, что они стоят каждой копейки. Люди, которые меня знают, говорили: «Вы должны продолжать использовать то, что используете!» потому что мои ногти хоть раз выглядят нормально! Я не хочу сказать, что этот продукт изменил мою жизнь, это звучит так драматично, но эти продукты полностью изменили мои ногти.Теперь они кажутся более нормальными, плюс меньше боли (тонкие ногти болезненны). * Я должен добавить, что это первый раз, когда я использую продукт для ногтей с формальдегидной смолой (тозиламид), но после исследования и просмотра результатов не позволяйте слову «страшное» напугать вас. Некоторым из нас это нужно. Он не для всех, но мне он действительно помог, и я считаю, что его стоит использовать. Не могу сказать, что этот дуэт изменит твои ногти, но для меня это сработало.

Я уверен, что результаты будут разными, но если у вас слабые ногти и вы пробовали другие продукты, которые не помогли, вы можете попробовать эти.Как я уже сказал, формальдегидная смола не для всех, но если у вас тонкие, как бумага, шелушащиеся ногти (что может действительно повредить), попробуйте это. Увлажняющий крем также имеет значение. Если ваша проблема — ломкие (раскалывающиеся / ломающиеся) ногти, Keratin Kit не для вас. Это действительно ухудшит ваше состояние.

Цвета действительно красивые, и их стоит попробовать, если вы предпочитаете более густые формулы лака для ногтей с полным покрытием.

Набор для лечения кератином Trind с протектором и реставратором ногтей в розницу примерно за 46 долларов.Розничная цена лаков для ногтей в Skinstore составляет 13 долларов за штуку. А в Канаде — Тринд.

Ребята, не могу дождаться, чтобы нанести лак для ногтей. Я уже планирую свой «осенний гвоздь-гардероб» 🙂

Хотите больше отзывов? Попробуйте…

Редактор красоты

Ооо, Шайни!

Эшли полька, зависима

Косметическое убежище

Набор в лаке

* Заявление об ограничении ответственности — Продукты предоставлены PR. Я не получаю денежной компенсации за свои обзоры. Мое мнение — мое собственное.Фотография Бетт Дэвис из журнала Life. Картинка по уходу за ногтями из Skinstore. Остальные изображения принадлежат EauMG.

Ocean Hair Smoothing Shine Protein Smoothing (1 литр)

Smoothing Shine — это органическая линия для выпрямления волос с бразильской технологией Amazon, идеальным уменьшением объема и действием против завивки.
Разглаживающий органический тип без формальдегида, со смесью протеинов, амино-комплексом и 11 питательными маслами из бразильской Амазонки. Эта процедура разглаживает, восстанавливая и восстанавливая поврежденные и вьющиеся волосы.
Средство для выпрямления кератина на 100% безопасно и специально разработано для удобного и комфортного использования парикмахерами, для легкого и быстрого нанесения с идеальными результатами. Товар продается исключительно профессионалам.

ОБОЗНАЧЕНИЕ:
Все типы волос
Этот продукт совместим со всеми средствами для ухода за волосами, поэтому его можно наносить на волосы, которые ранее были разглажены, окрашены и / или обесцвечены. Но необходимо иметь в виду, что эти предыдущие процедуры могли повредить волокна волос.В этих случаях чрезмерный нагрев пластины или чрезмерное количество проходов через каждую прядь может вызвать разрыв волокна. Желательно следовать показаниям в зависимости от типа волос. В случае обесцвеченных и окрашенных волос можно изменить цвет под воздействием тепла утюга. В любом случае, для выпрямления волосы должны быть здоровыми и в идеальном состоянии. Если волосы очень повреждены, слабые или сломанные, лучше сделать кератин. лечение, чтобы укрепить его перед выпрямлением.

АКТИВНЫЕ КОМПОНЕНТЫ:
Органический продукт, 0% формальдегид, глиоксилоил кератин, аминокислоты: эта технология обеспечивает превосходное действие против завивки и уменьшение объема даже самых непослушных волос.Сделайте постепенное и постепенное изменение структуры всех типов волос, придавая им естественное движение, яркость, мягкость и шелковистость. Смешайте протеин, Aminocompplex и 11 питательных масел из бразильской Амазонки.

ACTION:
Разглаживающее средство, специально разработанное для хорошего использования и комфорта парикмахера, для легкого и быстрого нанесения с идеальными результатами. Он обеспечивает значительное уменьшение объема, защиту волос, действие против завивки и восстановление волокон волос.

РЕЗУЛЬТАТ:
Maximum Protein Nutriçao с естественным разглаживанием. Светлые и уложенные волосы.

ПРЕЗЕНТАЦИЯ:
Лодка пластиковая вместимостью 1л.
Текстура очень легко наносится, пахнет свежей и гладкой.

НАПРАВЛЕНИЯ И ЧАСТОТА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ:
1. Вымойте волосы шампунем Hydrativit 2 раза. При второй стирке дайте постоять 10 минут. Промойте и высушите феном, выровняв волосы пальцами.№
2. Распределите с помощью кисти разглаживающий блеск и нанесите средство на полсантиметра от корня тонкими прядями, используя гребешок с мелкими зубьями для лучшего распределения средства.
3. После нанесения дайте продукту постоять от 30 до 60 минут в зависимости от структуры волос и их толщины.
4. Промойте, чтобы удалить излишки продукта.
5. Нанесите термозащитное средство (мы рекомендуем использовать сыворотку-спрей Hydrativit Spray Serum) на тонкие фитили.
6. С помощью фена при высокой температуре высушите волосы, пока они не станут полностью гладкими, используя для этого щетку.
7. Проведите утюгом по волосам при температуре 170–190º 5–7 раз и дайте остыть.
8. Закончить отделку с помощью насадок мастера по ремонту (рекомендуем сыворотку Luminosity Serum).
9. Для получения дополнительной информации следуйте инструкциям по бразильскому выпрямлению волос.

ИНГРЕДИЕНТЫ:
Aqua, глиоксилоилкарбоцистеин, глиоксилоиламинокислоты, стеариловый спирт, глицерилстеарат SE, цетримония хлорид, цетеарет-20, цетеариловый спирт, полисорбат-60, пропиленгликоль, цетиловый спирт, бенетримонийхлорид. -Т-бутил-4-гидроксигидроциннамт, гидролизованный шелк, гидролизованный пшеничный белок, креатин, динатрий ЭДТА, молочная кислота, натрий-РСА, лактат натрия, бензотриазолилдодецил-Р-крезол, аргинин, кокодимония гидроксипропилгидролизованный кератин, гидролизованный кератин, аспарагиновая кислота, кератин гидролизованной кислоты лактобионовая кислота, глицин соевое масло, глицин, аланин, масло косточек elaeis oleifera, масло семян linum usitatissimum, масло семян макадамии тернифолии, масло семян госсипия травянистого, масло семян подсолнечника обыкновенного, масло семян аргании спиноза, масло бертоллетии обыкновенной, масло семян каннабиса масло семян гвайянского, смола копаифера лекарственная, масло семян корилуса авеллана, масло семян пентаклетры макролоба, масло персея гратиссима, жидкий парафин, чернослив масло amygdalus dulcis, токоферилацетат, масло зародышей triticum vulgare, масло семян vitis vinifera, серин, валин, масло семян simmondsia chinensis, масло cocos nucifera, цветков гардении таитенсис, пролин, изолейцин, треонин, фенилаланин, гистиденил-ион, альфа-бутилинон метилпропионал, кумарин, гидроксиизогексил-3-циклогексенкарбоксальдегид, линалоол.

РАЗМЕР: 1 л

Кератин 14-зависимые дисульфиды регулируют эпидермальный гомеостаз и барьерную функцию через 14-3-3σ и YAP1

Распределение остатков цистеина в белке K14 мыши схематически представлено на рисунке 1A. Кодон C367 в KRT14 (человек) находится в положении 373 в Krt14 (мышь) и консервативен в ортологическом кератине нескольких других видов (рис. 1B). Более того, этот кодон также консервативен во многих других генах кератина типа I, экспрессируемых в коже (Strnad et al., 2011; Ли и др., 2012; Рисунок 1B). Чтобы выяснить физиологическое значение консервативного цистеина заикания в K14, мы сгенерировали мутантных мышей Krt14 C373A с использованием технологии CRISPR-Cas9 (рис. 1C) и проверили его присутствие с помощью аллель-специфичного секвенирования ДНК (рис. 1D). Krt14 C373A мыши рождаются с ожидаемым менделевским соотношением, жизнеспособны и плодовиты и показывают нормальную массу тела по достижении взрослого возраста (рис. 1E). Анализ общих белков кожи из нескольких участков тела показал, что стабильные уровни белка K14 не затрагиваются в Krt14 C373A по сравнению с кожей WT.Напротив, структура K14-зависимых, высокомолекулярных соединений с дисульфидными связями заметно изменяется, учитывая меньшее количество видов, которые встречаются на более низких уровнях (рис. 1F, G). Это особенно заметно в коже ушей и хвоста (рис. 1F, G), что побуждает нас сосредоточить внимание на этих двух участках тела в последующих анализах. Остаточное K14-зависимое дисульфидное связывание, происходящее в мутантной коже Krt14 C373A (Рисунок 1F, G), вероятно, отражает участие цистеинов, расположенных в N-концевом домене K14 (см. Рисунок 1A и Feng and Coulombe, 2015a).Эти данные показывают, что мыши, гомозиготные по аллелю Krt14, C373A, являются жизнеспособными и кажутся макроскопически нормальными, хотя биохимически они демонстрируют поразительно измененный паттерн K14-зависимых дисульфидных связей, особенно в коже ушей и хвоста.

Уменьшение K14-зависимых видов с дисульфидными связями и утолщение эпидермиса в коже мыши

( A ) Расположение остатков цистеина (C) в белке K14 мыши (C4, C18, C36, C58, C373, C395), в котором N-концевой головной и C-концевой хвостовые домены фланкируют центральную α-спираль. стержневой домен (катушки 1A, 1B и 2 (синие прямоугольники) разделены линкерами L1 и L12). ( B ) Выравнивание контекста последовательности, фланкирующего остаток C373 в мышиных кератинах K14 и других кератинах мыши типа I (вверху), а также для K14 у других видов (внизу).Внизу показан гептадный повтор. «Xxxx» обозначает место последовательности заикания (зеленые буквы). ( C ) Схематическая диаграмма стратегии, используемой для создания Krt14 C373A мышей с использованием системы Crispr / Cas9. sgRNA, одиночная направляющая РНК; PAM, прилегающий мотив протоспейсера. ( D ) Секвенирование по Сэнгеру, показывающее трансверсию TGC в GCA по кодону 373 (цистеин в аланин) в гене Krt14 . ( E ) Молодые взрослые Krt14 C373A Самцы однопометных мышей WT демонстрируют аналогичную массу тела.N = 7 для каждого генотипа. ( F ) Иммуноблоттинг-анализ лизатов общего белка из ушей, лап, кожи спины и хвоста от мышей WT и Krt14 C373A молодых взрослых мышей, подвергнутых электрофорезу SDS-PAGE при восстанавливающем (+ TCEP) и невосстанавливающем (- TCEP) условия. ( G ) Количественное определение относительных количеств K14-зависимых дисульфидов по сравнению с мономерами (см. C). N = 3 повтора. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. T-критерий Стьюдента: нет данных, статистической разницы нет; * р <0,05; *** р <0.005.

Затем были проанализированы гистология и барьерный статус кожи молодых взрослых мышей Krt14 C373A. По гистологическим данным, эпидермис мышей Krt14, C373A умеренно, но значительно утолщен по сравнению с WT в коже уха и хвоста (рис. 2A, B). Измерение трансэпидермальной потери воды (TEWL) на поверхности кожи выявило увеличение у мышей Krt14 и C373A по сравнению с контролем WT. Это так и на исходном уровне (7,02 ± 0.72 г / м2 / ч по сравнению с 2,95 ± 0,49 г / м ² / ч) и после местного нанесения ацетона (19,20 ± 1,78 г / м2 / ч по сравнению с 7,02 ± 0,72 г / м ² / ч) (Рисунок 2C), стандартное испытание, при котором кожный барьер подвергается легкому и обратимому стрессу (Denda et al., 1996). Дефекты кожного барьера часто вызывают повышенную экспрессию ассоциированных с опасностями молекулярных паттернов (Lessard et al., 2013) (DAMPs, также известные как alarmins). Исходно DAMPs, такие как S100a8 , S100a9 , Mmp9 и Ptgs2 , активируются в 4 или более раз на уровне мРНК в коже Krt14 C373A по сравнению с WT (рисунок 2D).Это аберрантное состояние заметно усиливается после местного воздействия ацетона на барьер (рис. 2E). Затем мы проанализировали ороговевшие оболочки (CE), выделенные из эпидермиса, учитывая, что они вносят ключевой вклад в барьерную функцию кожи (Eckhart et al., 2013). КЭ, полученные от мышей WT, выглядят относительно однородными по размеру и форме, в основном имеют овальную форму и четкие и плавные очертания (рис. 2F, G). Напротив, КЭ, изолированные от мышей Krt14, C373A, меньше (85% площади и 87% окружности КЭ WT), зубчатые и менее овальные (соотношение сторон 1.3 по сравнению с 1.1 в WT) (Рисунок 2F, G и Рисунок 2 — дополнение к рисунку 1A, B). Таким образом, морфологические и молекулярные аномалии, возникающие в эпидермисе, сопровождаются значительными дефектами барьерной функции кожи Krt14 C373A.

Изменения морфологии и барьерного статуса в коже

( A ) Срезы, окрашенные толуидиновым синим (толщиной 1 мм из залитой эпоксидной смолой кожи молодых взрослых мышей WT и Krt14 C373A).( B ) Количественная оценка всей толщины эпидермиса (живые слои эпидермиса и слои рогового слоя) в коже уха (слева) и хвоста (справа) мышей WT и Krt14 C373A. Были отобраны пять случайных полей для каждой из 3 мышей на каждый генотип. Масштабная линейка, 20 мкм. ( C ) Измерения трансэпидермальной потери воды в коже уха WT и Krt14 C373A на исходном уровне (необработанной) и после разрушения барьера, вызванного ацетоном. N = 6 на образец. D. Относительное кратное изменение уровней мРНК (qRT-PCR) для связанных с опасностями молекулярных паттернов (DAMP) в коже WT и Krt14 C373A на исходном уровне.N = 3 биологических повтора. ( E ) Относительное кратное изменение уровней мРНК (qRT-PCR) для DAMP после обработки ацетоном. N = 3 биологических повтора. ( F ) Типичные изображения фазово-контрастной микроскопии ороговевших оболочек, выделенных из кожи хвоста WT и Krt14 C373A. ( G ) Количественное определение площади поверхности, окружности и соотношения сторон ороговевших конвертов в d. Для каждой из четырех мышей подсчитывали приблизительно 100 CE. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Тест Стьюдента: * p <0.05; ** р <0,01; *** p <0,005; н.с., статистической разницы нет. Масштабная линейка, 100 мкм.

Затем мы оценили пролиферацию кератиноцитов, время прохождения и апоптоз, чтобы определить возможные причины увеличения толщины и дефекта барьера в эпидермисе Krt14 C373A. Через 2 часа после однократного введения аналога нуклеотида Edu (Chehrehasa et al., 2009) в базальном слое эпидермиса Krt14 C373A метится значительно большая фракция кератиноцитов по сравнению с WT (на ~ 1.6 раз; p = 0,024) (рис. 3A, B), что указывает на то, что пролиферация кератиноцитов усиливается на исходном уровне у мутантных мышей. После однодневной погони за импульсом Edu эта разница усиливается (> 2 раза; p = 0,01), и ядра, меченные Edu, теперь появляются в супрабазальных слоях эпидермиса у обоих генотипов, что отражает выход кератиноцитов из базального слоя (рис. 3A). , Б). После 3-дневной погони за импульсом Edu ядерная маркировка остается высокой и стабильной в базальном слое эпидермиса в обоих генотипах, но появляется четкое дополнительное различие, поскольку в супрабазальных слоях мутантного эпидермиса значительно больше ядер, меченных Edu.К 7-дневной отметке доля меченых клеток в базальном слое уменьшилась в обоих генотипах, но, опять же, надбазальный эпидермис кожи Krt14 C373A показывает гораздо больше меченых ядер (Рисунок 3A, B). Этот импульсный эксперимент показывает, что кератиноциты в эпидермисе Krt14, C373A демонстрируют усиленную пролиферацию, ограниченную базальным слоем на исходном уровне, и что кератиноциты демонстрируют более быстрый темп движения через надбазальные слои по мере того, как они прогрессируют через дифференцировку.Сходный фенотип был ранее описан для Krt10 нулевых мышей (Reichelt and Magin, 2002). Мы также наблюдали большую частоту (~ 3 раза) TUNEL-положительных ядер в эпидермисе Krt14, C373A по сравнению с WT, с апоптотической гибелью клеток, ограниченной супрабазальным отделом (рис. 3C, D). Мы также исследовали экспрессию p63, учитывая его роль главного регулятора стратификации и дифференцировки эпидермиса (Soares and Zhou, 2018). Отчетливая картина иммуноокрашивания наблюдалась в эпидермисе Krt14, C373A по сравнению с WT (фигура 3E).При количественном определении преобладали существенные различия в отношении частоты помеченных кератиноцитов и их расстояния от базальной пластинки (рис. 3F), при этом p63-положительное окрашивание показало заметную удлиненную форму и простиралось выше в мутантном эпидермисе. В совокупности эти данные позволяют предположить, что наблюдаемое умеренное увеличение толщины эпидермиса (рис. 1) маскирует более выраженный дефект эпидермального гомеостаза в исходных условиях у мышей Krt14 C373A.

Измененный гомеостаз тканей и нарушение регуляции дифференцировки кератиноцитов в коже

( A ) Непрямая иммунофлуоресценция для Edu в срезе кожи хвоста от WT и Krt14 C373A через 2 часа, 1 день и 3 дня после обработки аналогом тимидина EdU. Ядра окрашены DAPI (синий). ( B ) Количественная оценка количества EdU-положительных ядер в базальном и супрабазальном слоях на мм эпидермиса. N = 3 повтора для каждого образца. ( C ) Окрашивание TUNEL в эпидермисе хвоста молодых взрослых мышей WT и Krt14 C373A.D. Количественное определение TUNEL-положительных клеток показано в рамке c. N = 4 мыши на образец. E. Непрямая иммунофлуоресценция для p63 в срезе кожи хвоста от WT и Krt14 C373A кожи хвоста. Пунктирные линии изображают дермо-эпидермальный интерфейс. ( F ) Количественная оценка количества p63-положительных ядер на мм эпидермиса (слева) и их расстояния от базальной пластинки (справа). N = 3 повтора для каждого образца. ( G ) Непрямая иммунофлуоресценция для K14 (зеленый), K10 (красный), филаггрина и лорикрина из срезов кожи хвоста мышей WT и Krt14 C373A.( H ) Количественная оценка относительной интенсивности флуоресценции данных, показанных в рамке g, нормированных на WT. N = 3 мыши на образец. ( I ) Непрямая иммунофлуоресценция для клаудина 3, E-кадгерина и десмоплакина в срезах кожи хвоста мышей WT и Krt14 C373A. ( J ) Количественное определение относительной интенсивности флуоресценции в г. N = 3 мыши на образец. В a, c, e, g и I ядра окрашены DAPI (синий), а пунктирные линии изображают дермо-эпидермальный интерфейс. Масштабные линейки, 20 мкм.Данные в b, d, f, h и g представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. T-критерий Стьюдента: * p <0,05; ** р <0,01; *** p <0,005; н.с., без разницы.

Затем мы оценили маркеры, относящиеся к пролиферации кератиноцитов, чтобы определить возможные причины дефектного барьера кожи Krt14 C373A относительно WT. Мы исследовали распределение K14 (базальный клеточный слой), K10 (ранняя дифференцировка), филаггрина и лорикрина (поздняя дифференцировка) в срезах кожи хвоста молодых взрослых мышей.Окрашивание на филаггрин и лорикрин было заметно уменьшено (~ 62% и 48% соответственно), в то время как окрашивание для K10 было умеренно уменьшено (~ 37%) эпидермиса Krt14 C373A относительно WT (Рисунок 3G, H). Мы также исследовали маркеры соединения адгезивов (E-кадгерин), десмосом (десмоплакин), плотных соединений (клаудин 3), поскольку дифференцировка эпидермиса влечет за собой тесно скоординированную перестройку межклеточных соединений. Окрашивание клаудина 3 уменьшилось на ~ 33% в эпидермисе Krt14 C373A, что соответствует дефекту барьера.Сигналы для E-кадгерина и десмоплакина казались слегка увеличенными (Рисунок 3I), что может отражать умеренное утолщение эпидермиса (Рисунок 3J). В отличие от эпидермиса хвоста и ушей, несколько маркеров, включая K14, K10, лорикрин и филаггрин, кажутся нормальными в тонком эпидермисе кожи спины (Рисунок 3 — рисунок в приложении 1A – C), что соответствует заметно более низкому результату K14-зависимого дисульфидного связывания. на этом участке тела (рис. 1). Вместе эти наблюдения связывают аномалии, наблюдаемые в эпидермальном гомеостазе и кожном барьере, с дефектами дифференцировки терминальных кератиноцитов в коже мышей Krt14 C373A.

Ранее мы показали, что замена Cys на Ala в положении 367 в человеческом K14 не отменяет образование 10 нм филаментов, но ведет к снижению перинуклеарных кластеров кератиновых филаментов в культивируемых кератиноцитах (Feng and Coulombe, 2015b). Затем использовали просвечивающую электронную микроскопию срезов ткани кожи, залитых эпоксидной смолой, чтобы оценить, происходят ли аналогичные изменения in vivo. В базальных кератиноцитах эпидермиса WT кератиновые IFs обычно располагаются в виде пучков около ядра. Однако в базальных кератиноцитах Krt14 C373A кератиновые IFs отсутствуют в перинуклеарной области и, по-видимому, перераспределяются к периферии клетки (Рисунок 3 — приложение к рисунку 2A, B).В соответствии с макроскопическим внешним видом кожной ткани нет никаких ультраструктурных доказательств хрупкости клеток в эпидермисе Krt14 C373A (Рисунок 3 — приложение к рисунку 2A, B и данные не показаны). Мы обнаружили, что ядра имеют более эллипсовидную форму вместе с большей частотой цитоплазматических инвагинаций (в ~ 1,4 раза в базальных кератиноцитах и ​​в ~ 1,7 раза в супрабазальных кератиноцитах, соответственно) по сравнению с контролем WT; Рисунок 3 — приложение к рисунку 2С). Возникновение ультраструктурных аномалий в перинуклеарной кератиновой сети IF в базальных кератиноцитах Krt14 C373A расширяет предыдущие наблюдения с помощью визуализации в реальном времени (Feng and Coulombe, 2015b) и указывает на возможность изменения механических свойств ядерной оболочки или ядра в этих клетках. .

Для выявления потенциальных путей, регулируемых K14-зависимыми дисульфидами, мы провели анализ коиммунопреципитации (co-IP) K14 с последующим масс-спектрометрическим (MS) анализом белковых экстрактов, приготовленных из кератиноцитов новорожденных WT в первичной культуре в присутствии 1 мМ Ca ²⁺ , ​​состояние, которое индуцирует дифференцировку кератиноцитов (Hennings et al., 1980). Этот скрининг идентифицировал 14-3-3σ и другие изоформы 14-4-3 в качестве основных взаимодействующих партнеров для K14 в культурах клеток WT (рисунок 4A и дополнительный файл 1).Существует убедительный прецедент взаимодействия между белками 14-3-3 и кератинами, включая K18 (Liao and Omary, 1996; Ku et al., 1998), K17 (Kim et al., 2006), которые происходят при фосфорилировании — зависимая мода. Анализы коиммунопреципитации подтвердили, что трансфицированный, меченый НА-14-3-3σ физически взаимодействует с эндогенным WT K14 и мутантным белком Krt14 373A в кератиноцитах мыши в первичной культуре (Фиг.4B и данные не показаны). Дальнейшее изучение 100 лучших белков, идентифицированных МС, в этом целевом протеомном скрининге (дополнительный файл 1), как и ожидалось, выявляет присутствие десмосомных белков, известных взаимодействующих с кератином белков (например,г., аннексины; (Chung et al., 2012) и несколько белков с известной ролью в транспорте и организации органелл (например, члены семейства рабов; Ohbayashi and Fukuda, 2012), что согласуется с установленной ролью K5-K14 в пигментации кожи (Gu and Coulombe , 2007).

14-3-3σ взаимодействует с K14, а аномальная локализация 14-3-3σ и YAP в эпидермисе

( A ) Девять самых распространенных некератиновых записей по результатам масс-спектрометрического скрининга белков, взаимодействующих с K14 в кератиноцитах кожи новорожденных дикого типа (первичная культура, 1 мМ кальция, 4 дня). Показаны спектральные подсчеты и известное отношение к передаче сигналов Hippo. См. Рисунок 4 — приложение к рисунку 1 для полного списка. ( B ) Иммунопреципитация K14 из WT или Krt14 C373A кератиноцитов кожи в первичной культуре.И K14 WT, и, хотя и в меньшей степени, мутант 373A взаимодействуют с меченным НА 14-3-3σ. КДа, килодальтон. ( C ) Непрямая иммунофлуоресценция для 14-3-3σ в срезах кожи хвоста WT и Krt14 C373A. Пунктирные линии изображают дермо-эпидермальный интерфейс. ( D ) Непрямая иммунофлуоресценция для YAP в срезах кожи хвоста WT и Krt14 C373A. ( E ) Относительные уровни мРНК (qRT-PCR) для генов-мишеней YAP Ccn1 , Zeb1 , Ccn2 и Snail2 в коже хвоста взрослых WT и Krt14 C373A.N = 3 биологических повтора на генотип. ( F ) Иммуноблоттинг для общего YAP и YAP ^Ser127 в лизатах белков кожи хвоста WT и Krt14 C373A. ( G ) Количественная оценка относительных уровней белка показана в рамке d. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для трех биологических повторов. T-критерий Стьюдента: * p <0,05; ** р <0,01; *** p <0,005; н.с., статистической разницы нет. Масштабные линейки, 20 мкм.

14-3-3σ представлял интерес, поскольку он регулирует пролиферацию и дифференцировку кератиноцитов в эпидермисе (Herron et al., 2005; Ли и др., 2005). Последнее достигается частично за счет модуляции клеточной локализации YAP (Li et al., 2005; Sun et al., 2015), конечного эффектора передачи сигналов Hippo (Schlegelmilch et al., 2011; Silvis et al., 2011; Sambandam et al., 2015). Hippo — это эволюционно консервативный путь, играющий главную роль в регулировании роста и гомеостаза в органах и тканях (Pocaterra et al., 2020). Затем мы оценили распределение 14-3-3σ и YAP с помощью непрямой иммунофлуоресценции срезов ткани, полученных из кожи хвоста WT и Krt14 C373A.14-3-3σ встречается в основном в виде агрегатов в супрабазальных кератиноцитах эпидермиса Krt14, C373A, что резко контрастирует с диффузным распределением, наблюдаемым в контроле WT (Рисунок 4C). В соответствии с предыдущими сообщениями (Schlegelmilch et al., 2011; Sambandam et al., 2015) сильный сигнал для YAP возникает как в ядре, так и в цитоплазме базальных кератиноцитов, в противном случае YAP проявляется как более слабый и диффузный сигнал в цитоплазме ( но не наблюдается в ядре) супрабазальных кератиноцитов в эпидермисе WT (рис. 4D).Поразительно, что в эпидермисе Krt14 C373A YAP локализуется преимущественно в ядрах как в базальных, так и в супрабазальных кератиноцитах, согласованным образом (Figure 4D). Последнее открытие предполагает, что экспрессия YAP-зависимого гена может быть изменена в мутантной коже мыши. Последующие анализы RT-qPCR показывают, что уровни устойчивого состояния для нескольких известных мРНК гена-мишени YAP, включая Cyr61 , Zeb1 , Ctgf и Snail2 , заметно повышены в Krt14 C373A коже WT. (Рисунок 4E).По данным вестерн-иммуноблоттинга, уровни эндогенного YAP1 и фосфорилированного YAP1 Ser ^{, 127-} сходны в коже WT и Krt14 C373A (фиг. 4F, G). Вместе эти данные указывают на неправильную регуляцию 14-3-3σ и YAP как вероятных вкладчиков в эпидермальный фенотип, проявляющийся в коже уха и хвоста мышей Krt14 C373A.

Затем мы спросили, происходит ли неправильная регуляция субклеточного разделения YAP также в первичной культуре. Кератиноциты были изолированы от новорожденных детенышей WT и Krt14 C373A, культивированных в отсутствие или в присутствии кальция (Hennings et al., 1980), и проанализированы с использованием результатов микроскопии. K14-зависимое дисульфидное связывание является низким в отсутствие кальция и повышается в течение нескольких дней после добавления кальция к первичным культурам кератиноцитов мышей WT (Рисунок 4 — приложение к рисунку 1A, B). В отсутствие кальция окрашивание на YAP сосредоточено в ядре кератиноцитов WT и Krt14 C373A (рис. 5A, B). После добавления кальция (1 мМ), который запускает дифференцировку и имитирует супрабазальное состояние (Hennings et al., 1980), 73% кератиноцитов WT теряют свой ядерный сигнал YAP, тогда как 95% кератиноцитов Krt14 C373A демонстрируют преимущественно ядерный YAP (Рисунок 5A, B). Вестерн-иммуноблоттинг подтвердил, что, как и ожидалось, белки K10 и филаггрин встречаются на более низких уровнях в обработанных кальцием первичных культурах Krt14 C373A по сравнению с кератиноцитами дикого типа (Рисунок 4 — рисунок в приложении 1C, D), что указывает на задержку или дефект в терминальная дифференциация. Более того, анализы PLA предоставили доказательства уменьшения взаимодействий между 14-3-3σ и YAP в кератиноцитах Krt14 C373A в первичной культуре по сравнению с контрольными WT (Рисунок 4 — рисунок в приложении 1E, F), тем самым расширив результаты иммунопреципитации, показанные на рисунке 4Б.Мы пришли к выводу, что аномальное удержание YAP в ядре и аномальная дифференцировка кератиноцитов Krt14, C373A сохраняются за пределами ткани кожи, что также предполагает, что эти свойства связаны и присущи кератиноцитам.

Локализация и взаимодействие активности 14-3-3σ и YAP в кератиноцитах

( A ) Непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия для YAP (красный) и K14 (зеленый) в WT и Krt14 C373A кератиноцитов кожи новорожденных в первичной культуре в отсутствие и в присутствии 1 мМ кальция (в течение 4 дней). Стрелки показывают расположение ядер. ( B ) Количественная оценка клеток с ядерным YAP в рамке а. N = 3 биологических повтора. Прибл. Было подсчитано 100 клеток для каждого генотипа для каждого состояния. N = 3 биологических повтора.Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего. T-критерий Стьюдента: нет данных, статистической разницы нет; *** р <0,005. Масштабные линейки, 20 мкм. ( C ) Люциферазные анализы в клетках HeLa, трансфицированных репортерной конструкцией Ccn1 -люцифераза (см. Материалы и методы). Данные были нормализованы в отношении эффективности трансфекции и сигнала, полученного с векторным контролем pRL-TK. Данные представляют собой среднее значение ± SEM для трех биологических повторов, каждая из которых состоит из 6 технических повторов. Для сравнения каждого параметра были выполнены тесты Манна-Уитни с использованием GraphPad Prism 8.** p <0,01, * p <0,05, n.s., недостоверно.

Пять остатков цистеина, присутствующие в человеческом K14, консервативны в ортологе мыши (Lee et al., 2012), а цистеины в положениях 4, 40 и 367 в человеческом K14 участвуют в дисульфидных связях (Feng and Coulombe, 2015a). Затем мы спросили, является ли аберрантная локализация YAP в мутантном эпидермисе Krt14 C373A Cys373-специфичной. С этой целью мы разработали метод спасения с использованием Krt14 нулевых кератиноцитов мыши в первичной культуре, трансфекцию GFP-K14 или его мутантов и анализ субклеточного разделения YAP.В соответствии с предыдущими данными (Sambandam et al., 2015), только 19,5% кератиноцитов, экспрессирующих GFP-K14WT, обнаруживают ядерный YAP в присутствии кальция (Рисунок 5 — приложение к рисунку 1A, B). Напротив, клетки, экспрессирующие либо мутант без цистеина (CF) GFP-K14, либо одиночный мутант GFP-C367A, характеризуются аномально высоким ядерным удерживанием YAP (83,8% и 81,9% соответственно) (Рисунок 5 — приложение к рисунку 1A, Б). Восстановление Cys367 в основной цепи K14-CF (конструкция GFP-K14CF-C367) устраняет аномальное ядерное удержание YAP, учитывая, что только 27.3% трансфицированных клеток обнаруживают YAP в ядре (Рисунок 5 — рисунок в приложении 1A, B). Эти данные прямо указывают на то, что цистеин заикания (C367 в человеческом K14) является кальций-зависимым регулятором субклеточного разделения YAP в кератиноцитах кожи.

В попытке напрямую связать K14 с активностью YAP1 в качестве регулятора транскрипции, мы затем провели анализы репортера люциферазы в условиях гетерологичной клеточной культуры. Клетки HeLa были отобраны, потому что они происходят из эпителия, хорошо растут и трансфицируются.Клетки HeLa обычно показывают низкие уровни экспрессии K14 (Moll et al., 1982), но хорошо реагируют на котрансфекцию K5-K14 (Рисунок 5 — рисунок в приложении 1C). Трансфекция управляемой промотором люциферазы Firefly плазмиды гена Ccn1 ( Cyr61) , которая, как было ранее показано, эффективно сообщает о транскрипционной активности YAP (Ma et al., 2017), привела к сильной (~ 8-кратной) индукции активности люциферазы нормализовано к клеткам, трансфицированным эталонной плазмидой люциферазы Renilla (фиг. 5C). В соответствии со способностью K14 удерживать YAP в цитоплазме, активность промотора Ccn1 была значительно ослаблена совместной экспрессией WT K14 вместе с партнером по сборке WT K5 (фиг. 5C).В противоположность этому, активность промоторной конструкции Ccn1 была гораздо меньше затронута, когда не содержащий цистеина K14 (K14 CF) коэкспрессировался с WT K5 (фигура 5 — рисунок в приложении 1C). Следует отметить, что организация филаментов в клетках HeLa, коэкспрессирующих либо K5 и K14WT, либо K5 и K14CF, сопоставима (Рисунок 5 — рисунок в приложении 1C). Результаты этого гетерологичного анализа подтверждают мнение, что K14-содержащие филаменты влияют на активность YAP, как и предполагалось, и что это свойство зависит от присутствия остатков Cys в K14.

YAP является ключевым эффектором механочувствительности и механотрансдукции (Dupont et al., 2011; Benham-Pyle et al., 2015; Panciera et al., 2017). Клетки, испытывающие напряжение, часто реагируют усилением детерминант, таких как стрессовые волокна F-актина, сокращение актомиозина, рекрутирование α-катенина и винкулина в слипчивые соединения (Leckband and de Rooij, 2014; Yap et al., 2018), экспрессия ламина A / C в ядре (Swift et al., 2013) и частоты бинуклеации (Cao et al., 2017). Мониторинг состояния таких элементов обеспечивает тест на изменение механочувствительности или механотрансдукции.В срезах ткани кожи хвоста иммуноокрашивание на α-катенин и на ламин A / C, но не на десмоглеин 1, заметно увеличилось у мышей Krt14 C373A по сравнению с контрольными WT (фиг. 6A, B). Использование антитела a-18, которое распознает механочувствительный эпитоп на α-катенине (Shimoyama et al., 1992), подтверждает, что эпидермальные кератиноциты испытывают измененное растягивающее напряжение в эпидермисе Krt14 C373A (рис. 6C). В условиях первичной культуры мы наблюдали более высокую частоту появления многоядерных кератиноцитов в Krt14 C373A обработанных Ca ²⁺ кератиноцитах кожи новорожденных по сравнению с контролем WT (14.3% против 2,8%; Рисунок 6D). Мы также обнаружили, что каждый из сигналов иммунофлуоресценции для α-катенина, ламина A / C, стрессовых волокон F-актина и фосфорилированной легкой цепи миозина II (pMLC Ser19) увеличивается в Krt14, C373A по сравнению с WT (рис. 6E, F). В совокупности эти находки убедительно подтверждают, что, в соответствии с неправильной регуляцией YAP (см. Фиг. 5), мутантные кератиноциты Krt14 C373A обнаруживают изменения в механочувствительности и / или механотрансдукции по сравнению с WT.

Измененная механика в

( A-C ) Исследования с участием срезов кожи хвоста молодых взрослых мышей WT и Krt14 C373A мышей. A. Непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия для определения α-катенина, десмоглеина один и ламина A / C. Пунктирные линии изображают дермо-эпидермальный интерфейс. B. Количественная оценка относительной интенсивности флуоресценции, как показано на рамке a, для WT и Krt14 C373A. N = 3 биологических повтора. ( C ) Непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия механочувствительного эпитопа a-18 в α-катенине в срезах кожи хвоста мышей WT и Krt14 C373A (см. A).D-F: Исследования с участием кератиноцитов кожи новорожденных в первичной культуре. ( D ) Процент клеток с многоядерностью в кератиноцитах WT и Krt14 C373A, культивируемых, как описано для рамок a, c. N = 3 биологических повтора (всего 100 клеток, подсчитываемых каждый раз на генотип). ( E ) Непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия для ламина A / C (верхний и средний ряды) и α-катенина (нижний ряд) в первичных культурах кератиноцитов новорожденных WT и Krt14 C373A. ( F ) такой же, как E, за исключением того, что окрашены F-актин (через фаллоидин) и pMLC легкой цепи миозина, фосфорилированной Ser19 (Ser19).Ядра окрашены DAPI в кадрах A, C, E и F. Шкала 20 мкм. Данные в B и F представляют собой среднее ± SEM. T-критерий Стьюдента: * p <0,05; *** p <0,005; н.с., статистической разницы нет.

Средство для удаления кератина 50 мл в American Dream Extensions

Варианты доставки

Варианты доставки для Великобритании

Варианты международной доставки

Доставка

Мы пользуемся услугами сторонних поставщиков услуг с хорошей репутацией, чтобы обеспечить безопасную доставку вашего заказа. Примечание. Если ваш товар утерян или украден в пути, компания-перевозчик будет нести ответственность за компенсацию.

Информация о доставке

Имейте в виду, что кто-то должен будет подписать доставку вашей покупки с 9:00 до 18:00.Неспособность предоставить адрес, по которому кто-то может подписать ваши товары, или запрос на изменение адреса доставки, пока ваши товары находятся в пути, повлечет за собой дополнительную плату за доставку. Товар не будет оставлен с подписью.

Поставки в Великобританию

Все заказы, сделанные до 13:00 с понедельника по пятницу, будут отправлены в этот день.
Любая доставка в Великобритании на следующий день до 13:00 будет доставлена ​​на следующий рабочий день.
Заказы, размещенные в выходные и праздничные дни, будут обработаны на следующий рабочий день.

Международные поставки

Заказы будут доставлены в течение 10 рабочих дней. Это ожидает таможенного оформления.

Возвращает

Возврат должен быть произведен в течение 7 рабочих дней для полной кредитной ноты. Возврат не производится. Это торговый веб-сайт Business to Business, и любые продажи заключают договор на этих условиях.