СУЩЕСТВУЕТ 3 УРОВНЯ ВОЗДЕЙСТВИЯ НА КОЖУ

Гипоксантин рибозид

Еще один ингредиент ксантина, который используется редко.

Хотя на самом деле он никогда не использовался в добавках оксида азота, здесь он имеет некоторые приятные преимущества.

Гипоксантин рибозид, также известный как инозин, может повысить производительность, хотя это никогда не было научно доказано.

Это должно помочь повысить выносливость для более длительной работы.

Динатриевая соль аденозин-5′-трифосфата

Это АТФ, тот же ингредиент, который использовался в оригинальном плазмотроне Гаспари.

Этот ингредиент с высокой биодоступностью имеет ряд преимуществ, включая повышенную производительность (например, при прыжках, спринте и поднятии тяжестей).

Тело истощает АТФ, когда дело доходит до подъема тяжестей (или любой другой подобной деятельности), и оно также может восстанавливать его, поэтому наличие АТФ в качестве ингредиента должно помочь поддерживать его на оптимальном уровне.

Раувольфия Серпентина

Это сильная версия раувольсцина.

Также известный как альфа-йохимбин, это сильный антагонист альфа-2, который может помочь предотвратить накопление жира.

Может помочь нормализовать высокое кровяное давление и поддерживать его на здоровом уровне.

Благодаря DMAA в Superpump, Alpha Y поможет предотвратить гипертонию, так что это еще одна причина объединить их вместе.

(Примечание: если вы хотите попробовать бесплатные образцы добавок и посмотреть, что работает для вас, нажмите здесь или изображение ниже)

Gaspari Propritary Nitric Nitric Support Support & Lipsomal (3500 мг)

HydroMax ™

Вы, наверное, слышали о «мокрых насосах», верно?

Это то, что делает HydroMax, он обеспечивает насосы на водной основе, поскольку помогает мышцам набирать больше воды и, теоретически, больше питательных веществ.

Обычно используется в добавках оксида азота, HydroMax — это форма глицерина с высоким выходом (65% по массе).

Это сильный усилитель объема и помогает мышцам выглядеть более полными, набухая.

По сути, вы получите супергидратацию, так как ваше тело сможет удерживать больше воды.

Ожидайте большей выносливости и продолжительной полноты, которая продлится более суток!

Nitro-RX ™ Инозитол-цитруллин силикат

Если вам нравится цитруллин, вам еще больше понравится силикат цитруллина…

Хотя никаких исследований этого ингредиента (пока) не проводилось, он должен дать такие же, но более впечатляющие результаты, как инозитол-аргинин силикат, который, как было доказано, поддерживает повышенный уровень оксида азота в течение 2 недель.

PlasmaJet — один из немногих N.O. добавки, содержащие силикат цитруллина (Superpump 250, Wicked by Innovative Labs и Pump HD, похоже, также используют его).

Ожидайте потрясающих насосов только от этого ингредиента. Представьте, что уложите его вместе с Superpump 250? Повсюду злые насосы!

Битартрат холина

Известно, что холин улучшает концентрацию внимания и способность мозга взаимодействовать с телом.

Он содержится в яйцах и может увеличить потерю жира за счет увеличения концентрации бетаина в организме.

Это еще одна причина, по которой PlasmaJet является идеальным предтренировочным средством для тех, кто отказывается от кофеина, поскольку в нем есть немного кофеина и холина для повышения концентрации и внимания.

Мы не шутили, когда сказали, что Гаспари полностью обновил формулу [PlasmaJet] и серьезно модернизировал один из самых известных насосов всех времен.

Фосфатидилсерин (PS)

Известно, что фосфатидилсерин является супер-ингредиентом для мозга, поскольку он увеличивает когнитивные функции и поддерживает их на оптимальном уровне.

Эта жирорастворимая аминокислота содержится в головном мозге, но с возрастом ее количество может уменьшаться.

Преимущества не заканчиваются.

Исследования показали, что фосфатидилсерин может повышать уровень тестостерона после тренировки и, как и фосфатидная кислота, может активировать выработку mTOR.

Фосфатидилхолин (PC)

Фосфатидилхолин — это молекула фосфолипида, которая составляет основную часть жира в белках крови.

Его цель здесь — помочь липосомной доставке всех ингредиентов.

Он может усиливать действие эргогенных ингредиентов, таких как АТФ, делая их намного более эффективными.

Аминокислотный комплекс калия (99 мг)

Глицинатный комплекс калия

Последним, но не менее важным является калий.

Это не просто обычный калий, он связан с аминокислотой глицином, что делает его гораздо более усваиваемым.

Это поможет сохранить гидратацию и позволит задействовать мышцы с максимальной эффективностью.

• Цитруллин силикат и агматин силикат
• Ингредиенты для введения гликогена в мышцы
• ДМАА (70 мг) и 250 мг кофеина для энергии и концентрации
• Лучше, чем мезоморф (APS) для насосов и оксида азота.

Дозирование

Возьмите 4 таких малыша, и вы будете готовы к помпе …

Выпейте 4 таблетки (не более!), И вы готовы к накачке (за 30-60 минут до тренировки).

Принимайте не чаще 5 дней в неделю. Это так сильно …

Новый король насосов?

За последние несколько лет мы видели, как бустеры оксида азота приходят и уходят.

Ну, в основном они ушли, но остался только один и заработал корону, чтобы стать королем насосов.

Как вы уже догадались, это был Hemav02 Max и их предыдущая версия (Hemavol).

Ну, если честно, существует масса замечательных Н.О. бустеры, но они выиграли голосование за популярность, поскольку у них была прочная формула с нитратами и всем остальным.

Но теперь, когда PlasmaJet доступен, сможет ли он превзойти его?

У вас наверняка возник вопрос «PlasmaJet или HemaVO2 Max?» поэтому мы сравним их обоих.

(Примечание: если вы хотите попробовать бесплатные образцы добавок и посмотреть, что работает для вас, нажмите здесь или изображение ниже)

HemaVO2 vs PlasmaJet

HemaVO2 и PlasmaJet — два продукта из одной категории ускорителей оксида азота, но у них обоих очень разные стратегии.

HemaVO2 фокусируется на повышении содержания N.O. уровни нитратов, набухают мышцы с большой дозой HydroMax и дополняются ингредиентами, улучшающими настроение, чтобы ваш разум был хорошо связан с вашим телом.

PlasmaJet не только увеличивает N.O. уровни с HydroMax и силикатом цитруллина, но он поддерживает их на повышенном уровне и защищает аргинин от расщепления в течение более длительного периода времени.

Он также использует крошечную дозу стимуляторов для стимуляции вазорелаксации и увеличения кровотока.

Основные различия между двумя усилителями оксида азота показаны ниже на рисунке …

HemaVO2

Ингредиенты HemaVO2 имеют в основном 2 назначения; взорвите свои мышцы в насосном городе и улучшите свои умственные функции, чтобы вы могли сосредоточиться на разрушении каждого мышечного волокна.

В нем вообще нет стимуляторов, поэтому его идеально использовать вечером, хотя в PlasmaJet всего 50 мг кофеина, что неплохо для большинства людей.

Ознакомьтесь с ингредиентами ниже…

Цены и дозирование

PlasmaJet стоит 25 долларов за месячный запас (20 порций, нельзя принимать более 5 раз в неделю), в то время как HemaVO2 стоит 34,99 доллара за 25 порций (до 2 порций на тренировку).

PlasmaJet может иметь здесь преимущество, поскольку у него есть 4 таблетки на порцию, независимо от того, какие таблетки используются не более 5 раз в неделю.

Итак, вопрос сводится к следующему: хотите ли вы доплатить за порошкообразную версию оксида азота и дать вам поработать помпу на несколько часов или помпы и наполнения хватит на весь день, возможно, до следующего утра?

Готовы пойти в насосный город?

Gaspari представила новую формулу PlasmaJet, поскольку она определенно увеличит наполнение мышц и расширение сосудов.Попробуйте хотя бы один раз, и на следующий день вы, вероятно, будете довольны.

Дополнения с DMAA

Mesomorph

Полная доза бета-аланина, большое количество ингредиентов оксида азота и DMAA. О чем еще ты можешь попросить?

Jack’d Up

Не идеально подходит для насосов, но отлично подходит для энергии и сосредоточенности, поскольку содержит DMAA и некоторые нитраты.

Плазменная струя атмосферного давления вызывает апоптоз митохондрий посредством образования свободных радикалов

Abstract

Плазменная струя предложена как новый терапевтический метод противоопухолевого лечения.Однако его биологические эффекты и механизм действия остаются неясными. Здесь мы исследовали его эффекты гибели клеток и лежащие в основе молекулярные механизмы, используя струи воздуха и плазмы N ₂ из массива микросопел. Обработка воздухом или струями плазмы N ₂ вызывала апоптотическую гибель клеток HeLa рака шейки матки человека одновременно с деполяризацией потенциала митохондриальной мембраны. Кроме того, плазменные струи способны генерировать активные формы кислорода (АФК), которые действуют как суррогатные сигналы апоптоза, воздействуя на потенциал митохондриальной мембраны.Антиоксиданты или ингибиторы каспаз улучшали апоптотическую гибель клеток, вызванную воздухом и плазменными струями N ₂ , предполагая, что струя плазмы может генерировать ROS как проапоптотический сигнал, тем самым инициируя митохондриально-опосредованный апоптоз. Взятые вместе, наши данные предполагают потенциальное использование плазменных струй в качестве нового метода лечения рака.

Образец цитирования: Ahn HJ, Kim KI, Kim G, Moon E, Yang SS, Lee J-S (2011) Плазменная струя атмосферного давления вызывает апоптоз с вовлечением митохондрий посредством образования свободных радикалов.PLoS ONE 6 (11): e28154. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0028154

Редактор: Борис Животовский, Каролинский институт, Швеция

Поступила: 18 июля 2011 г .; Одобрена: 2 ноября 2011 г .; Опубликовано: 29 ноября 2011 г.

Авторские права: © 2011 Ahn et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантом Национальной программы НИОКР по борьбе с раком Министерства здравоохранения и социального обеспечения Кореи (1020210) и грантом Корейского национального исследовательского фонда (313-2008-2-C00626, 2009). -0074556, 2010-0018546), для сбора и анализа данных и подготовки рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Введение

Апоптоз, один из основных типов гибели клеток, можно модулировать с помощью запрограммированных механизмов управления.В отличие от острой травматической гибели клеток, апоптоз важен не только для обновления клеток для регенерации во всех типах тканей, но и для нормального развития, дифференцировки и старения организмов [1]. В отличие от его важной роли в физиологических процессах, дефектные процессы апоптоза участвуют в различных заболеваниях, таких как атрофия, аутоиммунитет, нейродегенеративные расстройства, синдром приобретенного иммунодефицита и неконтролируемая пролиферация клеток, как при раке [2].

Митохондрии хорошо известны как главные координаторы апоптотических процессов, которые контролируют внутренний апоптотический путь. Процесс апоптоза контролируется разнообразными внешними и внутренними клеточными сигналами. Некоторые внутриклеточные сигналы могут сходиться на митохондриях, чтобы вызвать набухание митохондрий или увеличить проницаемость митохондриальной мембраны (MMP), что вызывает диссипацию митохондриального трансмембранного потенциала (Δψm) и высвобождение проапоптотических факторов, включая цитохром c .Белки внешней мембраны митохондрий, которые регулируются анти- и проапоптотическими членами семейства Bcl-2, и белки, высвобождаемые из митохондрий, приводят к активации каспаз и последующей гибели клеток [3]. Параметры физиологии митохондрий, включая потерю митохондриального трансмембранного потенциала или набухание, как было показано, являются отличительными признаками митохондриально-зависимого апоптоза [4].

Появляется все больше доказательств того, что окислительно-восстановительная среда клетки способна контролировать апоптоз.Свободные радикалы могут вызывать апоптоз за счет диссипации трансмембранного потенциала митохондрий [5]. Основными свободными радикалами являются активные формы кислорода (АФК) и оксид азота (NO), которые образуются из кислорода и азота в восстановительных условиях [6]. Свободные радикалы играют важную роль в ряде биологических процессов, таких как внутриклеточное уничтожение бактерий фагоцитарными клетками. Они также участвуют в передаче сигналов клеточного окислительно-восстановительного потенциала. Однако из-за их реакционной способности чрезмерное количество свободных радикалов может привести к повреждению и гибели клеток.АФК удаляются антиоксидантными ферментами, включая каталазу (CAT) и супероксиддисмутазу (SOD). Развивается дисбаланс окислительно-восстановительной среды, приводящий к накоплению АФК, что приводит к окислительному стрессу [7]. Другой свободный радикал, NO, является важной клеточной молекулой-посредником, участвующей во многих физиологических и патологических процессах у млекопитающих. Однако прямое клеточное повреждение является результатом повышенного уровня NO. NO взаимодействует с ROS различными способами, либо в качестве важного партнера в регулировании окислительно-восстановительного статуса клеток, определении судьбы клеток, либо в передаче сигналов в ответ на ряд физиологических и стрессовых состояний.

Недавно мы и другие сообщили, что струи плазмы атмосферного давления [8] — [12] и азотной плазмы из массива микронасадок вызывают апоптоз раковых клеток, вызывая повреждение ДНК [13]. Однако молекулярный механизм, с помощью которого плазма индуцирует апоптоз, и какой сигнал (ы) стимулирует апоптоз, индуцированный плазмой, остаются неясными. Плазменная струя атмосферного давления может генерировать АФК, такие как озон, атомарный кислород, супероксид, пероксид и гидроксильные радикалы, но неизвестно, могут ли АФК, генерируемые плазменными струями, опосредовать апоптоз раковых клеток млекопитающих или индуцируемые плазмой процессы апоптоза. вовлекают митохондрии.В этом отчете мы показываем, что матрица микроплазменных сопел генерирует АФК, которые могут действовать как апоптотический стимул, индуцируя измененный ММП в клетках карциномы шейки матки человека HeLa. Однако поглотители свободных радикалов или ингибиторы каспаз могут ослаблять апоптотические эффекты, вызванные плазмой. Взятые вместе, наши результаты показывают, что свободные радикалы, генерируемые плазмой, играют роль в индуцированном плазмой апоптозе, действуя как внутренний сигнал для инициации апоптоза через участие митохондрий.

Результаты и обсуждение

Плазменная струя из набора микросопел

Плазменная струя, использованная в данном исследовании, исходила из массива микронасадок (рис.1 (С) — (Г)). Струя воздушной плазмы вырывается наружу через анод и имеет характеристики, отличные от характеристик струи азотной плазмы [14]. Чтобы проверить характеристики плазменной струи, мы измерили напряжение и провели оптическую эмиссионную спектроскопию (ОЭС) во время разряда. Напряжение, создаваемое разрядом через пористый оксид алюминия, значительно колебалось (рис. 2 (A)). Электрические характеристики устройства плазменной струи, использующего пористый оксид алюминия, сообщают, что импульсное напряжение упало почти до нуля в сочетании с резкими импульсами тока [15].Как показано на рис. 2 (A), плазма N ₂ генерировала более тяжелую пилообразную волну, чем воздушная плазма, за ту же продолжительность, демонстрируя, что плотность плазменной струи N ₂ была выше, чем плотность воздушной плазмы струя.

Рисунок 1.

(A) Схематическая структура матрицы сопел плазменной струи. На вставке — фотография изготовленного устройства плазменного сопла. (B) схематический вид экспериментальной установки для лечения клеток. (C) — (D) Фотографические изображения сопла микроплазменной струи во время разряда при использовании (C) N ₂ и (D) воздуха.С левой стороны показан вид спереди, а с правой стороны — вид сбоку. Плазменная струя обозначена кружками и стрелками.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0028154.g001

Как правило, струя плазмы атмосферного давления может производить химически активные вещества. Чтобы идентифицировать различные виды возбужденной плазмы, генерируемой плазменной струей, OES проводился для широкого диапазона длин волн, 250–1050 нм. Оптическое излучение N ₂ сравнивалось с излучением воздушной плазмы при скорости 10 л / мин.В спектре плазмы N ₂ преобладали полосы молекул N ₂ (вторая положительная система (SPS) для λ в диапазоне 290–500 нм и первая положительная система (FPS) для λ в диапазоне 700– 900 нм). В спектре излучения воздушной плазмы преобладали возбужденные атомы кислорода при 777,1 и 844 нм, а также молекулы в диапазоне 500–600 нм, содержащие N ₂ SPS и FPS.

Анализ гибели клеток, вызванной плазменной струей, с использованием окрашивания аннексином V-FITC и PI

Чтобы лучше понять биологические эффекты и применение плазменных струй, мы исследовали гибель клеток, вызванную плазменными струями.Плазменную струю наносили непосредственно на раковые клетки HeLa, которые затем окрашивали антителом к ​​аннексину V или PI, конъюгированным с красителем FITC, и анализировали проточной цитометрией. Для представления уровней флуоресценции FITC-меченного аннексина V (FITC-A) и PI (PI-A) были созданы точечные диаграммы из 4 логарифмически масштабированных квадрантов. Анализ проточной цитометрии показал, что струи N ₂ и воздушной плазмы увеличивают количество клеток с ранним апоптозом (аннексин V ⁺ / PI ^—), клеток с поздним апоптозом (аннексин V ⁺ / PI ⁺ ), но редко некротические клетки (аннексин V ^— / PI ⁺ ) по сравнению с необработанными клетками HeLa (рис.S1). Затем мы исследовали апоптоз в клетках, подвергшихся воздействию плазменной струи в течение различной продолжительности лечения, чтобы определить, вызывают ли плазменные струи апоптоз зависимым от продолжительности образом. Клетки обрабатывали струей плазмы в течение 2-8 мин, затем окрашивали и анализировали, как описано выше (рис. 3 (A)). Обработка клеток HeLa N ₂ и воздушной плазмой в течение 2 мин оказывала слабый апоптотический эффект на клетки HeLa. Напротив, обработка плазменными струями в течение 5 минут увеличивала апоптоз примерно на 32% (ранее, 29.72 ± 1,11% и поздно, 0,91 ± 0,35%) (N ₂ ) и 34% (раннее: 25,80 ± 1,76% и позднее: 7,58 ± 0,54%) (воздух). Более высокий апоптотический эффект на 60% (ранний, 55,69 ± 11,36% и поздний, 1,70 ± 0,35%) (плазма N ₂ ) и 70% (ранний, 53,80 ± 12,04% и поздний, 15,80 ± 3,54%) (воздушная плазма) были достигнуты лечением в течение 8 мин. Напротив, плазма индуцировала незначительный некроз (плазма N ₂ , 0,1–2,0% или воздушная плазма, 0,2–0,3%) (рис. S1). Вместе эти данные предполагают, что N ₂ и струи воздушной плазмы вызывают в значительной степени апоптотическую гибель клеток дозозависимым образом.

Рисунок 3. Плазма индуцирует апоптоз за счет образования ROS.

(A) Апоптоз в клетках HeLa, клеточной линии карциномы шейки матки человека, анализировали с помощью проточной цитометрии после окрашивания анти-аннексином V-FITC и PI. Клетки HeLa обрабатывали струей плазмы N ₂ или воздухом в течение 2-8 мин, как указано, и инкубировали дополнительно в течение 24 часов. Клетки на ранней стадии апоптоза окрашиваются только антителом к ​​аннексину V, тогда как клетки на поздней стадии апоптоза окрашиваются как антителом к ​​аннексину V, так и PI.Некротические клетки окрашивали только PI. Данные представлены как среднее значение ± среднеквадратичное отклонение. ( n = 8). (B) Образование ROS контролировали с помощью проточной цитометрии. Клетки инкубировали с 2,5 мкМ H ₂ DCFDA, собирали и в течение 1 часа после обработки клеток N ₂ или струей воздушной плазмы в течение 5 минут уровень ROS оценивали путем измерения эмиссии DFC. Необработанные (-), обработанные перхлоратом железа (II) (Fe) и H ₂ O ₂ клетки (H ₂ O ₂ ) использовали в качестве контроля.В качестве антиоксидантов использовали D-маннит (D-Mann), пируват натрия (S Py.) Или N-ацетил-цистеин (NAC). Данные представлены как среднее значение ± среднеквадратичное отклонение. ( n = 13).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0028154.g003

Деполяризация мембранного потенциала митохондрий и генерация АФК индуцируются N

АФК известны как триггеры внутреннего апоптотического каскада через взаимодействие с белками комплекса перехода митохондриальной проницаемости [16].Компоненты поры с переходной проницаемостью (PTP), включая потенциал-зависимый анионный канал (VDAC), являются мишенями для ROS, а окислительные модификации белков PTP могут значительно влиять на потоки митохондриальных анионов [17]. Действительно, простое временное увеличение гиперполяризации митохондриальной мембраны после воздействия H ₂ O ₂ инициирует коллапс митохондриального трансмембранного потенциала (Δψm) [18], что приводит к митохондриальной транслокации Bax и Bad и высвобождению цитохрома c [19 ].Основываясь на сообщениях о том, что струи плазмы атмосферного давления могут генерировать АФК [20], [21], мы предположили возможность того, что струи плазмы генерируют АФК в клетках млекопитающих, и, следовательно, генерируемые АФК могут напрямую связываться с индукцией апоптоза. Как показано на фиг. 3 (B) и фиг. S2, уровень ROS увеличился примерно в 2 и 2,6 раза в клетках HeLa, обработанных N ₂ и струями воздушной плазмы, соответственно, по сравнению с необработанными клетками.

Затем мы оценили деполяризацию потенциала митохондриальной мембраны (Δψm) с использованием окрашивания JC-1 после обработки N ₂ и струями воздушной плазмы.Деполяризация митохондриальной мембраны — раннее событие апоптоза, которое увеличивает проницаемость митохондриальной мембраны, тем самым облегчая высвобождение проапоптотических факторов, включая цитохром с и AIF, в цитозоль [22]. Зонд JC-1, специфичный для митохондрий, представляет собой липофильный катионный флуоресцентный краситель с двойной длиной волны излучения. Было показано, что повышенный потенциал митохондриальной мембраны увеличивает флуоресценцию JC-1 при 530 нм (FITC-A), что соответствует его мономерной форме, и снижает флуоресценцию JC-1 при 590 нм (PI-A), что соответствует его димерной форме. форма.Интенсивность флуоресценции JC-1 при 530 нм (FITC-A) была увеличена в 3,7 и 2,8 раза в клетках HeLa, обработанных N ₂ и воздушно-плазменной струей, соответственно, по сравнению с необработанным контролем (рис. 4 и рис. S3). Интенсивность флуоресценции JC-1 при 590 нм (PI-A) снижалась до 1,7 и 1,8 раз после обработки N ₂ и струей воздушной плазмы соответственно. Эти данные показывают, что обработка плазменной струей может вызвать деполяризацию мембранного потенциала митохондрий, вызывая повышенную трансмембранную проницаемость митохондрий и возможное высвобождение проапоптотических факторов.

Рисунок 4. Трансмембранный потенциал митохондрий (ММП) измеряли с помощью проточной цитометрии после окрашивания красителем JC-1.

Клетки обрабатывали агентами, улавливающими АФК, d-маннитом, пируватом натрия, карбоксил-PTIO или N-ацетилцистеином (NAC) в течение 1 часа перед обработкой струей плазмы. После N ₂ или обработки струей воздушной плазмы клетки инкубировали еще 12 часов перед сбором. После сбора клетки промывали 3 раза PBS и окрашивали 2,5 мкМ красителем JC-1 в течение 30 мин.Зеленая флуоресценция, контролирующая деполяризацию потенциала митохондриальной мембраны (Δψm) необработанных клеток, была произвольно установлена ​​на значение 1. Данные представлены в виде среднего значения ± среднеквадратичное отклонение. ( n = 7).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0028154.g004

Антиоксиданты уменьшают апоптотическую гибель клеток в соответствии с N

Когда клетки подвергаются воздействию различных факторов стресса, таких как УФ-облучение, лекарства, гипоксия, химические вещества и многие другие, образуются АФК, которые могут атаковать внутриклеточные органеллы и мембраны, белки, ДНК и липиды.Клетки оснащены множеством защитных механизмов, включая ферменты, поглощающие каталазу и супероксиддисмутазу (SOD), механизмы восстановления и пути регенерации. Однако клеточные повреждения могут быть слишком серьезными для адаптации или выживания клеток, что приводит к их гибели.

Мы проверили, участвуют ли АФК, генерируемые струями плазмы, в апоптозе, опосредованном плазмой. С этой целью мы оценили индуцированный плазменной струей апоптоз в клетках, обработанных агентами, улавливающими АФК. Маннит и пируват натрия являются хорошо известными поглотителями гидроксильных групп (HO ^• ) и пероксида водорода (H ₂ O ₂ ) соответственно.Карбокси-PTIO является эффективным поглотителем оксида азота (NO ^• ) [23], а N-ацетил-цистеин (NAC) — хорошо известный тиоловый антиоксидант [24]. В сочетании с плазменной струей клетки HeLa обрабатывали D-маннитом, пируватом натрия, карбоксил-PTIO или N-ацетил-цистеином. В контрольных экспериментах только маннит, пируват натрия, карбоксил-PTIO или NAC практически не влияли на рост или гибель клеток HeLa (данные не показаны). В сочетании с лечением антиоксидантом маннитолом апоптоз, вызванный струей плазмы, снизился до 27.38 ± 5,30% (ранний, 5,99 ± 1,18% и поздний, 18,75 ± 3,69%) (N ₂ ) и 24,75 ± 4,48% (ранний, 23,39 ± 4,30% и поздний, 0,99 ± 0,18%) (воздух), по сравнению с апоптотической гибелью клеток в клетках, обработанных одной плазменной струей (61,79 ± 2,36%, (N ₂ ) и 63,70 ± 2,55%, (воздух)) (фиг. 5 и фиг. S4). Аналогичным образом пируват натрия снижал апоптоз, индуцированный плазмой, до 39,60 ± 6,36% (ранний, 32,63 ± 7,26%, поздний, 6,23 ± 1,39%) (N ₂ ) и 20,28 ± 3,16% (ранний, 17,38 ± 2,89%). % и позднее 1,62 ± 0.27%) (воздух) (рис. 5 и рис. S4). Кроме того, карбокси-PTIO и NAC ослабляли апоптотический эффект струей воздушной плазмы до 18,86 ± 2,90 %% (ранний, 16,15 ± 2,57% и поздний, 2,29 ± 0,36%) и 35,44 ± 9,09% (ранний, 15,66 ± 2,13% и поздно, 18,75 ± 6,84%) соответственно (рис. 5 и рис. S4). Кроме того, гибель клеток, вызванная струей плазмы N ₂ , была частично снижена карбокси-PTIO до 44,27 ± 4,86% или NAC до 47,20 ± 2,36% (фиг. 5 и фиг. S4). Эти данные свидетельствуют о том, что удаление ROS может предотвратить гибель клеток, индуцированную плазмой, и что ROS опосредуют апоптоз, индуцированный плазменной струей.Кроме того, аннулирующий эффект карбокси-PTIO в клетках, обработанных струей плазмы воздуха, был выше, чем в клетках, обработанных струей плазмы N ₂ (фиг. 5). На основании наших наблюдений, что поглотители ROS демонстрируют дифференциальное прекращение апоптоза в клетках, обработанных плазменной струей, мы рассмотрели возможность того, что воздух и плазменная струя N ₂ могут генерировать разные ROS с использованием OES (рис. 1 (C)). Охарактеризованы спектры доминирующих пиков струи воздуха и плазмы N ₂ . Доминирующие пики в спектрах воздушно-плазменной струи в основном наблюдались в инфракрасном (ИК) спектре, тогда как пики плазмы N ₂ наблюдались в УФ и ИК областях (рис.1 (D)). Если это так, мы можем предположить, что разные источники плазмы могут генерировать различные типы и состав АФК.

Рис. 5. Поглотители способны ослаблять апоптотический эффект, вызванный N ₂ и воздействием воздушной плазмы на клетки HeLa.

Клетки обрабатывали D-маннитом, пируватом натрия, карбоксил-PTIO или N-ацетилцистеином (NAC) в течение 1 часа перед обработкой воздухом и струей плазмы N ₂ . Клетки HeLa подвергались воздействию воздуха и струи плазмы N ₂ сразу после обработки ингибитором каспазы 3 или 9.Данные представлены как среднее значение ± среднеквадратичное отклонение. ( n = 10). Значения показаны на рис. S4.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0028154.g005

Ингибиторы каспаз могут уменьшать апоптотическую гибель клеток после N

Каспасы являются одними из главных исполнителей апоптотического процесса. Индукция апоптоза обычно приводит к активации каспазного каскада. Митохондрии являются ключевыми регуляторами каспазного каскада через активацию инициатора каспазы 9, а затем каспазы 3.Помимо митохондриально-зависимого каскада, индукция апоптоза через активацию рецепторов смерти приводит к активации инициатора каспазы 8 или 10, а затем каспазы 3. Чтобы еще больше усилить индукцию в плазме митохондриально-опосредованного апоптоза, мы проверили, каспаза 3 и 9 ингибиторов могут облегчить апоптоз, вызванный плазмой. В целом, ингибиторы каспаз 3 и 9 снижали индуцированную плазмой гибель клеток примерно наполовину (примерно на 25% с 61,8% (N ₂ ) и примерно на 30% с 63.7% (воздух)) (Рис. 5 и Рис. S4). Однако ингибитор каспазы 8 оказывал незначительное влияние на апоптоз, индуцированный плазмой (данные не показаны), что позволяет предположить, что апоптоз, индуцированный плазмой, не опосредуется активацией рецепторов смерти. Примечательно, что ингибиторы каспаз 3 и 9 заметно снижают апоптоз в клетках, обработанных плазмой, что указывает на то, что митохондрии могут опосредовать индуцированный плазмой апоптотический процесс (фиг.5 и фиг. S4). Соответственно, ингибиторы каспазы 3 и 9 аннулировали индуцированный воздушной плазмой ранний апоптоз (рис. 5 и рис.S4). Вместе эти эффекты ингибитора каспаз предполагают, что апоптоз, индуцированный плазмой, опосредуется митохондриально-зависимым путем.

В отличие от апоптотической гибели клеток, ингибиторы каспаз 3 и 9 вызывали повышенный некроз в обработанных плазмой клетках (фиг. 5 и фиг. S4). Аналогичным образом ингибиторы каспаз 3 и 9 вызывали некротическую гибель клеток в клетках, обработанных перекисью водорода (H ₂ O ₂ ) (фиг. 5 и фиг. S4). H ₂ O ₂ , как известно, вызывает как апоптоз, так и некроз [25].Также сообщается, что клетки, обработанные H ₂ O ₂ , благоприятно претерпевают некротическую гибель клеток, а не митохондриально-зависимую апоптотическую гибель клеток в присутствии ингибиторов каспаз [26]. В связи с этим возможно, что обработанные плазмой клетки могут в первую очередь подвергнуться некротической гибели клеток, когда митохондриально-зависимый апоптотический путь заблокирован. Кроме того, ингибиторы каспаз 3 и 9 не могут полностью исключить гибель клеток, индуцированную плазмой, что предполагает, что гибель клеток, индуцированная плазмой, может частично опосредоваться митохондриально-зависимым путем.Несмотря на то, что эти оставшиеся проблемы должны быть решены в дальнейших исследованиях, представленные здесь данные убедительно показывают, что плазма N ₂ и воздушная плазма могут активировать внутренний проапоптотический путь, и этот апоптоз, опосредованный митохондриями, по крайней мере частично способствует гибели клеток, индуцированной плазмой.

В заключение мы сообщаем, что обработка N ₂ и струя воздушной плазмы впервые вызвали апоптотическую гибель клеток за счет образования ROS и дисфункции митохондрий в клеточной линии карциномы шейки матки человека, HeLa.Совместная обработка клеток поглотителями АФК смягчала апоптотический эффект плазменной струи, предполагая, что апоптотические эффекты плазменной струи могут быть опосредованы АФК. Кроме того, смягчающие эффекты ингибиторов каспаз 3 и 9 на индуцированную плазмой гибель клеток дополнительно усиливают участие митохондрий в апоптозе. Мы и другие ранее показали, что плазменные струи могут быть эффективными при лечении рака, способствуя апоптозу, сопровождаемому повреждением ДНК [27]. Важно отметить, что воздух и струя плазмы N ₂ могут быть мощным средством против рака человека.Хотя для оценки клинической эффективности плазменных струй требуются дополнительные исследования на животных и доклинические исследования, похоже, что плазменная струя может иметь важные клинические применения. Также необходимы дальнейшие усилия по разработке эффективного клинического устройства и источника плазменных струй для лечения рака. Кроме того, комбинированное лечение плазменными струями обычно используемыми противоопухолевыми препаратами или лучевая терапия может частично или временно улучшить клиническое течение путем сенсибилизации резистентных или рецидивирующих раковых клеток.Таким образом, мы предлагаем широко изучить плазменную струю для разработки новых лекарств от рака. Наше исследование предполагает, что применение плазменной струи может обеспечить потенциальную терапию рака.

Материалы и методы

Конструкция решетки микроплазменных сопел и системы плазменного разряда

Сопло микроплазменной струи содержало тонкий никелевый анод, пористый изолятор из оксида алюминия, катод из нержавеющей стали и алюминиевый корпус. На рис. 1 (A) показан схематический вид в разрезе плазменного струйного устройства.Пленка Ti / Au была нанесена на кремниевую пластину в качестве затравочного слоя для гальваники. Фоторезист THB-151N (JSR, Япония) был нанесен на форму для гальваники. Для получения никеля с низким напряжением использовался простой электролит, содержащий 450 г / л сульфамата никеля [Ni (NH ₂ SO ₃ ) ₂ • 4H ₂ O] и 30 г / л борной кислоты. гальваника. Для улучшения свойств никеля с гальваническим покрытием в электролит добавляли 5 г / л натриевой соли додецилсульфата [C ₁₂ H ₂₅ O ₄ SNa].На пластину наносили гальваническое покрытие при 50 мА / см ² в этом электролите в течение 80 часов до толщины приблизительно 80 мкм. После гальваники никеля подложка была отполирована для планаризации. Изготовленный анод имел 210 отверстий, каждое диаметром 100 мкм и глубиной 60 мкм. Пористый оксид алюминия был достаточно пористым, чтобы пропускать газ [15]. Пористый оксид алюминия имел пористость приблизительно 30 об.% И средний диаметр пор 100 мкм. Толщина изолятора составляла 1 мм, диаметр катода — 1.5 мм. Для безопасности катод из нержавеющей стали во время экспериментов помещался в кварцевую трубку. На вставке к рис. 1 (А) показано фотографическое изображение изготовленного устройства.

Рис. 1 (B) показывает установку для экспериментов с ячейкой. Разрядный эксперимент проводился при атмосферном давлении с N ₂ и газообразным воздухом. Источником питания переменного тока был коммерческий трансформатор для неонового света, работающий на частоте 20 кГц. В экспериментах использовалось переменное напряжение 20 кВ _p-p и скорость потока 10 л / мин.

Культивирование клеток и обработка клеток струей плазмы

Клетки HeLa рака шейки матки человека (ATCC CCL-2) культивировали в среде DMEM (WelGENE, Корея) с добавлением 10% FBS (Hyclone, Logan, NY) и 500 Ед / мл пенициллина, 200 мкг / мл стрептомицина и 0,5 мкг / мл. мл амфотерицина B (WelGENE, Корея) при 37 ° C в увлажненной атмосфере 5% CO ₂ в течение 24 часов. Клетки, выросшие до 90% конфлюэнтности, подвергались воздействию струи N ₂ или воздушной плазмы из устройства, расположенного на расстоянии 3,8 см друг от друга, в течение 2, 5, 6 и 8 мин.Сразу после обработки 2 мМ перекиси водорода (H ₂ O ₂ ), 2 мМ перхлората железа (II) (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) или плазмой, клетки окрашивали 5 мкМ H ₂ DCFDA , чтобы обнаружить генерацию ROS. Некоторые обработанные плазмой клетки дополнительно инкубировали в течение 12-24 часов для измерения гибели клеток. После 24 ч инкубации клетки собирали и окрашивали 2,5 мкМ JC-1 (Molecular Probes, Юджин, штат Орегон) для анализа деполяризации трансмембранного потенциала митохондрий (Δψm).Для обнаружения апоптоза, индуцированного плазмой, клетки окрашивали FITC-конъюгированным антителом к ​​аннексину V или йодидом пропидия (PI, BD Bioscience, Сан-Хосе, Калифорния). После окрашивания клетки анализировали с помощью проточной цитометрии (BD FACSAria ™ III, BD Bioscience, Сан-Хосе, Калифорния). Агенты, улавливающие АФК, 50 мМ d-маннит, 10 мМ пируват натрия (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури), 100 мкМ карбокси-PTIO (Molecular Probes, Юджин, штат Орегон) или 4 мМ N-ацетил-цистеин (Sigma- Aldrich, Сент-Луис, Миссури), за 1 час до обработки клеток струями плазмы, клетки подвергали воздействию струи плазмы N ₂ или воздуха сразу после добавления 20 мкМ ингибитора каспазы 3, 8 или 9 (Promega , Мэдисон, Висконсин).

Дополнительная информация

Рисунок S1.

Апоптоз в клетках HeLa, клеточной линии карциномы шейки матки человека, по данным проточной цитометрии. Клетки обрабатывали N ₂ или струями воздушной плазмы в течение 2, 5 или 8 минут, а затем инкубировали еще в течение 24 часов. После сбора клетки окрашивали анти-аннексином V-FITC и PI и анализировали проточной цитометрией.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0028154.s001

(TIF)

Рисунок S2.

Генерация ROS отслеживалась с помощью H ₂ DCFDA. Клетки окрашивали H ₂ DCFDA в течение 1 часа после обработки N ₂ и струей воздушной плазмы в течение 5 минут, затем анализировали проточной цитометрией. Уровень генерации АФК увеличился в клетках, обработанных струей плазмы N ₂ (2,07 ± 0,38) и воздуха (2,63 ± 0,04), по сравнению с контролем (1,17 ± 0,02), H ₂ O ₂ обработанных ( 1,73 ± 0,12), N ₂ обработанный газ (1,32 ± 0,25) или воздух, обработанный газом (1.31 ± 0,31) кл. Данные представлены в виде среднего значения ± s.e.m, которое является средним значением интенсивности зеленой флуоресценции.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0028154.s002

(TIF)

Рисунок S3.

Трансмембранный потенциал митохондрий (ММП) измеряли с помощью красителя JC-1. Клетки обрабатывали N ₂ или струями воздушной плазмы в течение 5 минут, а затем инкубировали в течение 12 часов. После сбора клетки окрашивали 2,5 мкМ JC-1 в течение 30 минут и анализировали проточной цитометрией.N ₂ и обработка воздушно-плазменной струей снижали ММП (6,45 ± 0,16 и 5,88 ± 1,78, отношение зеленой флуоресценции к интенсивности красной флуоресценции) по сравнению с контролем (1,79 ± 0,74), H ₂ O ₂ -обработанные (1,89 ± 0,46) и обработанные газом (1,83 ± 0,58) клетки. Изображения были проанализированы для обнаружения относительной зеленой и красной флуоресценции с использованием микроскопа Zeiss Axioskop 2 (Carl Ziess, Оберкохен, Германия).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0028154.s003

(TIF)

Рисунок S4.

Антиоксиданты способны ослаблять апоптотический эффект, вызванный N ₂ и воздействием воздушной плазмы. Клетки обрабатывали D-маннитом (D-Mann), пируватом натрия (S Py), карбоксил-PTIO (C-PTIO) или N-ацетилцистеином (NAC) за 1 час до обработки воздухом и N _{. 2} плазменная струя. Клетки подвергали воздействию воздуха и струи плазмы N ₂ сразу после обработки ингибитором каспазы 3 или 9. Клетки обрабатывали N ₂ или струями воздушной плазмы в течение 5 минут, а затем инкубировали еще в течение 24 часов.После сбора клетки окрашивали анти-аннексином V-FITC и PI и анализировали проточной цитометрией. Показана популяция (%) апоптотических и некротических клеток (нижняя таблица).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0028154.s004

(TIF)

Благодарности

Мы благодарим всех сотрудников лабораторий Ли и Янга за их полезные советы.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: JSL SSY. Проведены эксперименты: HJA KIK.Проанализированы данные: HJA KIK GYK EPM SSY JSL. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: HJA KIK SSY JSL. Написал статью: HJA KIK SSY JSL.

Список литературы

1. 1. Ameisen JC (2002) О происхождении, эволюции и природе запрограммированной клеточной смерти: временная шкала в четыре миллиарда лет. Cell Death Differ 9: 367–393.
2. 2. Фадил Б., Оррениус С., Животовский Б. (1999) Апоптоз при болезни человека: новая кожа для старой церемонии ?. Biochem Biophys Res Commun 266: 699–717.
3. 3. Birbes H, El Bawab S, Hannun YA, Obeid LM (2001) Селективный гидролиз митохондриального пула сфингомиелина вызывает апоптоз. FASEB J 15: 2669–2679.
4. 4. Jacotot E, Ferri KF, El Hamel C, Brenner C, Druillennec S и др. (2001) Контроль проницаемости митохондриальной мембраны транслокатором адениновых нуклеотидов, взаимодействующим с вирусным белком ВИЧ-1 R и Bcl-2. J Exp Med 193: 509–519.
5. 5. Брюне Б (2003) Оксид азота: НЕТ апоптоза или его включение? Cell Death Differ 10: 864–869.
6. 6. Yang J, Wu LJ, Tashino S, Onodera S, Ikejima T (2008) Активные формы кислорода и оксид азота регулируют митохондриально-зависимый апоптоз и аутофагию в клетках HeLa карциномы шейки матки человека, обработанных эводиамином. Free Radic Res 42: 492–504.
7. 7. Дроге В. (2002) Свободные радикалы в физиологическом контроле функции клеток. Physiol Rev 82: 47–95.
8. 8. Kim GJ, Kim W, Kim KT, Lee JK (2010) Повреждение ДНК и дисфункция митохондрий при апоптозе клеток, вызванном нетепловой воздушной плазмой.Appl Phys Lett 96: 021502.
9. 9. Ким GC, Ким GJ, Park SR, Jeon SM, Seo HJ и др. (2009) Воздушная плазма в сочетании с конъюгированными с антителами наночастицами: новое оружие против рака. J Phys D: Прил. Phys 42: 032005.
10. 10. Ли Х.Дж., Шон Ч., Ким Ю.С., Ким С., Ким Г.К. и др. (2009) Деградация молекул адгезии клеток меланомы G361 нетепловой микроплазмой атмосферного давления. Новый журнал J Phys 11: 115026.
11. 11. Чжан X, Ли М., Чжоу Р., Фэн К., Ян С. (2008) Удаление раковых клеток печени in vitro с помощью плазменной иглы.Appl Phys Lett 93: 021502.
12. 12. Фридман Г., Шерешевский А., Йост М.М., Брукс А.Д., Фридман А. и др. (2007) Плазма диэлектрического барьерного разряда с плавающим электродом в воздухе, способствующая апоптотическому поведению в клеточных линиях рака кожи меланомы. Plasma Chem Plasma Process 27: 163–176.
13. 13. Ким К., Чой Дж.Д., Хонг Й.С., Ким Дж., Но Э.Дж. и др. (2011) Плазменная струя атмосферного давления из массива микронасадок и ее биологическое воздействие на живые клетки для лечения рака.Appl Phys Lett 98: 073701.
14. 14. Hong YC, Uhm HS (2006) Струя микроплазмы при атмосферном давлении. Appl Phys Lett 89: 221504.
15. 15. Kim K, Kim G, Hong YC, Yang SS (2010) Устройство с холодной микроплазменной струей, подходящее для биомедицинских применений. Микроэлектронная инженерия 87: 1177–1180.
16. 16. Tsujimoto Y, Shimizu S (2007) Роль перехода проницаемости митохондриальной мембраны в гибели клеток. Апоптоз 12: 835–840.
17. 17.Madesh M, Hajnoczky G (2001) VDAC-зависимая проницаемость внешней митохондриальной мембраны супероксидом вызывает быстрое и массивное высвобождение цитохрома c. J Cell Biol 155: 1003–1015.
18. 18. Скулачев В.П. (2006) Биоэнергетические аспекты апоптоза, некроза и митоптоза. Апоптоз 11: 473–485.
19. 19. Cook SA, Sugden PH, Clerk A (1999) Регулирование белков семейства Bcl-2 во время развития и в ответ на окислительный стресс в сердечных миоцитах: ассоциация с изменениями потенциала митохондриальной мембраны.Circ Res 85: 940–949.
20. 20. Колб Дж. Ф., Мохамед А. А., Прайс Р. О., Суонсон Р. Дж., Боуман А. и др. (2008) Плазменная струя холодного воздуха при атмосферном давлении для медицинских приложений. Appl Phys Lett 92: 241501.
21. 21. Deng XT, Shi JJ, Kong MG (2007) Разрушение белка гелиевым тлеющим разрядом при атмосферном давлении: возможности и механизмы. J Appl Phys 101: 074701.
22. 22. Ан Х.Дж., Кокецу М., Янг Э.М., Ким Ю.М., Исихара Х. и др. (2006) 2- (4-метилфенил) -1,3-селеназол-4-он вызывает апоптоз с помощью различных механизмов в клетках SKOV3 и HL 60.J Cell Biochem 99: 807–815.
23. 23. Franco R, Panayiotidis MI, Cidlowski JA (2007) Истощение глутатиона необходимо для апоптоза в лимфоидных клетках независимо от образования активных форм кислорода. J Biol Chem 282: 30452–65.
24. 24. Kalghatgi S, Kelly CM, Cerchar E, Torabi B, Alekseev O, et al. (2011) Влияние нетепловой плазмы на клетки млекопитающих. PLoS One 6: e16270.
25. 25. Wang HW, Gukassyan V, Chen CT, Wei YH, Guo HW и др.(2008) Дифференциация апоптоза от некроза по динамическим изменениям уменьшенного времени жизни флуоресценции никотинамидадениндинуклеотида в живых клетках. J Biomed Opt 13: 054011.
26. 26. Баррос Л.Ф., Канасеки Т., Сабиров Р., Моришима С., Кастро Дж. И др. (2003) Апоптотические и некротические пузырьки в эпителиальных клетках имеют одинаковый диаметр шейки, но разную киназную зависимость. Cell Death Differ 10: 687–97.
27. 27. Ptasińska S, Bahnev B, Stypczyńska A, Bowden M, Mason NJ, et al.(2010) Разрыв цепи ДНК, вызванный нетепловой плазменной струей атмосферного давления. Phys Chem Chem Phys 12: 7779–81.

Ученые визуализируют плазменную струю черной дыры с беспрецедентной детализацией

В центре большинства галактик находится сверхмассивная черная дыра. Хотя многие аспекты этих объектов остаются загадочными, ясно, что они поглощают огромное количество энергии и вещества. Это образует аккреционный диск из плазмы, но иногда эта плазма также вылетает из магнитных полюсов черной дыры почти со скоростью света.С помощью телескопа Event Horizon ученые изобразили одну из этих плазменных струй с таким уровнем детализации, который позволит глубже понять, как они формируются, как сверхмассивные черные дыры потребляют энергию, и многое другое.

На изображении виден яркий овал, который, по мнению астрономов, является аккреционным диском черной дыры, а также более темный поток энергии, исходящий из него. Тот факт, что струя направлена ​​на Землю, дает ученым лучший угол обзора струи, чем обычно.Мы видели аналогичное изображение, полученное от галактики M87 в видимом спектре света, но это изображение отражает явление в инфракрасном диапазоне, что означает, что астрономы могут лучше понять, насколько горячее вещество вокруг черной дыры.

Когда сверхмассивная черная дыра имеет такие струи, она классифицируется как блазар. Астрономы утверждают, что магнитные полюса черной дыры направляют энергию вверх от аккреционного диска и выбрасывают ее с огромным количеством энергии — струя, запечатленная на изображении, движется со скоростью около 0.В 995 раз больше скорости света. Как ни странно, похоже, что рассматриваемый джет вылетает из черной дыры под странным углом. Это подтвердил доктор Зири Юнси из Университетского колледжа Лондона, который является соавтором статьи, в которой было показано это изображение. Согласно The Guardian , он говорит, что это может указывать на «перегиб» в основании струи или что энергия каким-то образом наматывается вокруг струи.

Это изображение, как мы надеемся, поможет астрономам ответить на некоторые насущные вопросы, например, как вещество и энергия переносятся от аккреционного диска к полюсам черной дыры или почему наша собственная сверхмассивная черная дыра, которая в 200 раз меньше, чем в изображение — не стреляет струями энергии.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Есть много причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с вашим системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Антибактериальные эффекты низкотемпературной плазмы, генерируемой плазменной струей атмосферного давления, опосредуются реактивными формами кислорода — Penn State

@article {57a1141f799f42119c98dbe39177541c,

title = «Антибактериальные эффекты низкотемпературной плазмы, генерируемой плазменной струей атмосферного давления. опосредованы активными формами кислорода «,

abstract =» Возникновение и распространение устойчивости к антибиотикам требует разработки нехимических методов лечения бактериальных инфекций.Плазменная медицина применяет физику низкотемпературной плазмы (НТП) для решения биомедицинских проблем, таких как заживление ран и подавление опухолей. LTP также использовался для дезинфекции поверхностей. Однако еще многое предстоит узнать об эффективности LTP в отношении бактерий, суспендированных в жидкостях, и особенно на пористых поверхностях. Мы исследовали эффективность лечения LTP против бактерий с использованием плазменной струи атмосферного давления и показали, что лечение LTP обладает способностью подавлять как грамположительные (S.aureus) и грамотрицательных (E. coli) бактерий на твердых и пористых поверхностях. Кроме того, как прямая обработка LTP, так и среда, активируемая плазмой, были эффективны против бактерий, суспендированных в жидкой культуре. Наши данные показывают, что активные формы кислорода являются ключевыми медиаторами бактерицидных эффектов LTP, а перекись водорода необходима, но недостаточна для антибактериальных эффектов. Кроме того, наши данные свидетельствуют о том, что бактерии, подвергшиеся воздействию LTP, не развивают резистентность к дальнейшему лечению LTP.Эти данные позволяют предположить, что эта новая плазменная струя атмосферного давления может быть использована в качестве потенциальной альтернативы лечению антибиотиками in vivo.