• Все типы кожи
• Темные пятна
• Шрамы от прыщей
• Изменение цвета

ИНГРЕДИЕНТЫ

ОСНОВНЫЕ ИНГРЕДИЕНТЫ:

B ЭКСТРАКТ ИЛЬБЕРЫ .

Делает кожу более гладкой и молодой за счет увеличения коллагена.

ЭКСТРАКТ КОРНЯ Солодки.

Осветляет обесцвечивание кожи и гиперпигментацию.

ЭКСТРАКТ РОМАШКИ.

способствует здоровому сиянию кожи, так как лечит и восстанавливает ее естественное содержание влаги.

ПОЛНЫЕ КОМПОНЕНТЫ

Aloe Barbadensis (Aloe) Настоянная на дистиллированной воде (Agua), *** растительный глицерин, масло семян Crambe Abyssinica (абиссинского), ** масло Carthamus Tinctorius (сафлоровое), ниацинамид (витамин B3), N-ацетил глюкозамин, Vaccinium Myr Экстракт плодов черники), экстракт Saccharum Officinarum (сахарного тростника), экстракт Acer Saccharum (сахарный клен), экстракт плодов цитрусовых Aurantium Dulcis (апельсин), экстракт плодов цитрусового лимона (лимона), экстракт цветов Chamomille Recutita Matricaria (ромашка), Glycyrrhiza Glabra ( Солодка) экстракт корня, ксантановая камедь, лецитин, склероциевая камедь, пуллулан, * эфирное масло Cymbopogon Flexuosus (лемонграсс), * эфирное масло цитрусовых Aurantifolia (лайм), масло семян Daucus Carota Sativa (морковь)

• Используйте 1 насос.
• Нанесите пальцем Lumen Dark Spot Corrector непосредственно на темные пятна. Вы также можете массировать кожу круговыми движениями двумя дозами корректора Lumen Dark Spot Corrector.
• Оставьте на 5 минут, затем массируйте кожу круговыми движениями до полного впитывания.
• При использовании утром нанесите солнцезащитный крем или продукт, содержащий SPF, после нанесения (не обязательно на ночь).

Этот продукт содержит альфа-гидроксикислоту (AHA), которая может повысить чувствительность вашей кожи к солнцу и, в частности, повысить вероятность солнечных ожогов.Используйте солнцезащитный крем, носите защитную одежду и ограничьте пребывание на солнце во время использования этого продукта и в течение недели после него.

Формирование трехмерных канальцевых эндотелиальных клеточных сетей в определенных условиях бессывороточной культуры клеток в гидрогелях человеческого коллагена

Заявление по этике

Материал пациентов был обработан после одобрения этического комитета Медицинской школы Ганновера (ссылка на файл 3475- 2017) и после получения письменного информированного согласия пациентов.Все ткани использовались анонимно для этого исследования.

Все эксперименты проводились в соответствии с соответствующими инструкциями и правилами.

Уход за животными

Это исследование было одобрено Наблюдательным советом учреждения и местным комитетом по защите животных и проводилось в соответствии с постановлениями местного правительства (№ 10/0214; № 11/0458) и протоколами комитета Ганноверской медицинской школы и Консультативный комитет по исследованиям. Все животные получили гуманный уход в соответствии с Европейской конвенцией по уходу за животными.Все эксперименты проводились в соответствии с соответствующими инструкциями и правилами.

Получение подслизистой оболочки тонкого кишечника (SIS)

Получение децеллюляризованной подслизистой оболочки тонкого кишечника (SIS) выполняли, как описано ранее ^11,29,30 . Вкратце, сегменты тонкого кишечника свиней были изолированы от немецких местных сортов свиней (18-25 кг) и хранили в неразбавленном Braunol (7,5% раствор повидон-йода в воде, B. Braun) при 4 ° C. Tunica mucosa и tunica serosa сегментов кишечника были механически удалены с последующей химической децеллюляризацией в 1% Triton X-100 в 10 мМ TRIS, pH 7.5 при непрерывном встряхивании (90 об / мин) при комнатной температуре в течение 24 часов. После этого SIS промывали дистиллированной водой в течение 24 ч при непрерывном встряхивании с последующей промывкой физиологическим раствором с фосфатным буфером (PBS) с добавлением 1 г / л ванкомицина, 100 мг / л гентамицина и 2,5 мг / л амфотерицина B при непрерывном встряхивании в течение 10 дней при комнатной температуре с ежедневной сменой промывочного буфера. Наконец, SIS стерилизовали гамма-облучением 150 Гр и хранили в PBS при 4 ° C до дальнейшего использования в течение максимум 6 месяцев.Перед использованием SIS разрезали вдоль продольной оси, фиксировали в металлическом каркасе подслизистой стороной вверх и покрывали питательной средой.

Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC)

HUVEC, полученные от объединенных доноров, были приобретены у Lonza. Клетки культивировали в среде для роста эндотелия 2 (EGM-2, Lonza). Отрывки 4–6 использовали для всех экспериментов.

Выделение стромальных клеток, полученных из жировой ткани взрослого человека (hASC)

Стромальные клетки, полученные из жировой ткани взрослого человека (hASC), были выделены из тканей человека, которые были получены от пациентов, перенесших абдоминопластику.Изоляцию проводили согласно ранее опубликованному протоколу с небольшими изменениями ³¹ . Вкратце, измельчали ​​жир и соединительную ткань с последующим добавлением 10 мл раствора коллагеназы типа II (760 Ед / мл, Worthington) на 20 мл ткани и инкубации в течение 1 часа при 37 ° C при встряхивании. Жирные супернатанты собирали и промывали PBS. После центрифугирования осадок клеток промывали PBS, ресуспендировали и клетки культивировали в EGM-2. Среду меняли через 48 часов с последующей заменой среды через день.Для эксперимента использовали клетки из 2–4 пассажей.

Приготовление лентивирусных супернатантов и клеточная трансдукция

VSV.G-псевдотипированные частицы лентивируса получали, как описано ранее ³⁰ . Вкратце, частицы были получены в 293 Т-клетках путем котрансфекции фосфатом кальция самоинактивирующейся лентивирусной плазмиды pHR’-SIN-SEW (для экспрессии eGFP) ³² вместе с упаковывающей плазмидой pCMV-DR8.91 с множественными делециями. и плазмида оболочки pMD.G ³³ .Супернатант вируса, собранный через 36 и 48 часов после трансфекции, очищали центрифугированием и фильтровали через фильтр с размером пор 0,45 мкм. Частицы лентивируса концентрировали и ресуспендировали в бессывороточной среде X-VIVO10 (Lonza) и хранили в аликвотах при -80 ° C до использования. Титр вируса определяли путем инфицирования клеток K562 серийным разведением концентрированного исходного вируса 1: 2 и анализом FACS через 72 часа после трансдукции для оценки количества GFP-положительных клеток. Концентрированный запас лентивируса использовали для заражения клеток-мишеней.После 48 часов инкубации клетки промывали PBS и добавляли свежую среду.

Генерация трехмерных гидрогелевых конструкций

Приготовление гидрогелевых конструкций на основе матригеля / rCOL проводили, как описано ранее ^11,29,30 . Вкратце, 19,1 об.% Коллагена трехмерной культуральной матрицы типа I из хвостов крысы (Trevigen), 4,6 об.% Бидистиллированной H ₂ O, 24,3 об.% Гелевой среды и 10,3 об.% Matrigel ^TM (Basement Membrane Matrix, BD ) были смешаны и нейтрализованы 4.1 об.% 0,4 М NaOH. Клеточную смесь, ресуспендированную в 37,5 об.% Соответствующей среды, добавляли и смешивали с гидрогелем. Конструкции гидрогеля на основе hCOL были изготовлены из раствора коллагена из человеческих фибробластов (Sigma). Смешивали следующие компоненты: 59,7 об.% Коллагена, 4,4 об.% Воды, 23,3 об.% Гелевой среды, 6,3 об.% 0,4 M NaOH и 6,3 об.% Суспензии клеток в соответствующей среде. Полученные гидрогели содержали матричные белки от 1,8 до 1,9 мг / мл. В гидрогелях, содержащих матригель / rCOL, конечное соотношение коллаген IV: ламинин: коллаген I рассчитывается как 1: 2: 3.

Гелевая среда состоит из 98% 2x DMEM, 2 мМ L-глутамина, 100 Ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина. Двойную концентрацию DMEM получали из 1,348 г порошка DMEM (Gibco, Invitrogen) и 0,037 г NaHCO ₃ , растворенных в 30 мл воды. Клетки, содержащие раствор гидрогеля, отливали на СИС, закрепленную в изготовленном на заказ металлическом каркасе (1,5 см × 1,5 см). Конечная плотность клеток составляла 13 × 10 ⁶ / мл с соотношением HUVEC к hASC 1: 1,75. После 1 часа инкубации в увлажненном инкубаторе при 37 ° C и атмосфере с 5% CO ₂ затвердевшие конструкции гидрогеля покрывали соответствующей средой.Среду меняли каждые 2–3 дня, и сборку сети ЭК документировали с помощью микроскопа Stereo Discovery.V8, оснащенного камерой AxioCam и лампой HXP.

Состав среды

Конструкции культивировали либо в EGM-2 (Lonza), в среде для стимуляции сосудов (VSM) ⁷ , либо в бессывороточной среде (SFM, модифицированная из Huttala et al. . ⁷ ). VSM состоит из DMEM / F12 в качестве основной среды с добавлением 10 нг / мл VEGF-A, 1 нг / мл FGF-2, 0,1% ITS, 1.28 мМ L-глутамин, 1% BSA, 2,8 мМ NaP (пируват натрия), 100 МЕ / мл P / 0,1 мг / мл S, 0,1 нМ T3 (3,3 ‘натриевая соль 5-трийод-L-тиронина), 100 мкг / мл аскорбиновой кислоты, 0,2 мкг / мл гидрокортизона. Натриевая соль гепарина не включалась в среду, как Huttala et al . опубликовали, что это необязательно ⁷ и были добавлены антибиотики (0,1 мг / мл гентамицина, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина). SFM, используемый в нашем исследовании, состоит из M199 в качестве базальной среды с добавлением 10 нг / мл VEGF-A, 10 нг / мл FGF-2,0.1% ITS, 2 мМ L-глутамин, 1% BSA, 50 мкг / мл аскорбиновой кислоты, 0,2 мкг / мл гидрокортизона, 0,1 мг / мл гентамицина, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина.

Количественная оценка характеристик сети

Получение изображения ЕС-сети, сформированной GFP-HUVEC, было выполнено с использованием установки многофотонной микроскопии с использованием лазерной системы Chameleon Ultra II, работающей на 790 нм или 850 нм (Coherent Inc.), Thorlabs MPM 200 корпус многофотонного микроскопа (Thorlabs GmbH, Германия) и объектив Olympus XLPlan N (25x, NA 1.05). Изображения Z-стека с размером z-шага 1 мкм были взяты в 3 случайных областях каждой конструкции. Программное обеспечение Imaris (Bitplane) использовалось для трехмерной реконструкции сети по этим изображениям. Модуль FilamentTracer использовался для трехмерной количественной оценки сети EC с использованием алгоритма AutoPath. Данные представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение для следующего параметра: средний диаметр, количество узлов, общая длина ветвления (сумма длин всех сегментов в трехмерной сети), площадь сети (сумма площадей всех сегментов в трехмерной сети). ), объем сети (сумма объемов всех сегментов в трехмерной сети) и количество сегментов.Данные были проанализированы с помощью непарного t-критерия. Значение p ≤0,05 считается значимым.

Иммунофлуоресцентное окрашивание

Иммунофлуоресцентное окрашивание проводили в соответствии со стандартными протоколами и описаны ниже. 3D-конструкции фиксировали 4% параформальдегидом в PBS при комнатной температуре в течение 30 мин с последующими 3 стадиями промывки с использованием PBS. Конструкции вырезали из металлических каркасов и помещали на предметные стекла или заделывали в Tissue-Tek O.C.T. состав, шоковой заморозки в жидкости N ₂ , разрезанный.Образцы (либо целые конструкции, либо криосрезы) подвергали проницаемости 0,3% Triton X-100 в PBS в течение 1 часа при комнатной температуре. Блокирование осуществляли 2% ослиной сывороткой в ​​PBS в течение 20 минут при комнатной температуре с последующей инкубацией в течение ночи с первичным антителом α-актином гладких мышц (α-SMA) (DAKO, 1: 400) или расщепленной каспазой-3 (CASP3) (Cell Сигнальная технология, 1: 200) при 4 ° C. На следующий день образцы трижды промывали PBS и инкубировали с Cy3-конъюгированным ослиным антимышиным антителом или Cy3-конъюгированным ослиным антимышиным антителом (оба Jackson Research, 1: 300) в течение 2 часов при комнатной температуре соответственно. .Образцы трижды промывали PBS. Ядра контрастировали 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) (0,7 мкг / мл в PBS) в течение 10 минут при комнатной температуре. После дополнительных стадий промывки PBS образцы покрывали флуоресцентной монтажной средой и стеклянными покровными стеклами. На следующий день образцы сфотографировали с помощью микроскопа Oberserver.A1 или конфокального лазерного сканирующего микроскопа Olympus FluoView 1000. Виртуальные стеки были созданы с помощью ImageJ.

Анализ формирования просвета с использованием декстрана, помеченного красным, Техас

Для того, чтобы исследовать, свободен ли просвет собранных сетей ЭК от матрицы, целые живые трехмерные конструкции инкубировали с декстраном, помеченным красным цветом Техас (D1863, 10000 MW, ThermoFisher Scientific. ) как описано ³⁴ .Более подробно, 0,5 мг / мл декстрана в EGM-2 или SFM, соответственно, использовали для инкубации 3D гидрогелевых конструкций при 37 ° C и 5% CO ₂ в течение ночи с последующей фиксацией 4% PFA при комнатной температуре в течение 30 минут и двух последующие этапы промывки PBS. Фотографии были сделаны с помощью микроскопа Stereo Discovery.V8 или конфокального лазерного сканирующего микроскопа Olympus FluoView 1000. Виртуальные стеки были созданы с помощью ImageJ.

Покадровая микроскопия для исследования динамики сетей EC

Чтобы исследовать, как формировались сети EC и как они располагаются во времени, была выполнена покадровая микроскопия с использованием микроскопа-люмаскопа (etaluma), оснащенного светодиодным источником света 488 нм.С помощью программного обеспечения Lumaview620 фотография снималась каждые 20 минут при 37 ° C в стандартном инкубаторе. Отдельные изображения были преобразованы в фильм с помощью программного обеспечения ImageJ. Покадровое наблюдение было начато через 24 часа после отливки конструкции, чтобы обеспечить начальную полимеризацию и консолидацию конструкции.

Lumen Vitae Skincare Radiant Glow, ингредиенты осветляющей сыворотки (пояснения)

Жожоба — устойчивый к засухе вечнозеленый кустарник, произрастающий в юго-западной части Северной Америки.Он известен и выращивается из-за масла жожоба, золотисто-желтой жидкости, исходящей из семян (около 50% веса семян составляет масло).

На первый взгляд кажется, что это обычное смягчающее растительное масло: оно похоже на масло, питает и увлажняет кожу, но если копнуть глубже, оказывается, что масло жожоба действительно особенное и уникальное : технически — или, скорее, химически — это не масло, а эфирный эфир воска (и называть его маслом некрасиво).

Так что же такое восковой эфир и почему это так важно? Что ж, чтобы понять, что такое восковой эфир, вы сначала должны знать, что масел являются химически триглицеридами: один глицерин + три жирные кислоты, присоединенные к нему. Жирные кислоты, присоединенные к глицерину, различаются, поэтому у нас есть много видов масел, но все они триглицериды. Мать-природа создала триглицериды, которые легко гидролизуются (расщепляются на глицерин + 3 молекулы жирных кислот) и окисляются (жирные кислоты расщепляются на мелкие части) — в основном это происходит, когда мы едим жиры или масла и наше тело вырабатывает энергию. из него .

Мать-природа также создала эфиры восков, но для совершенно другой цели. Химически восковой эфир представляет собой жирную кислоту + жирный спирт , одну длинную молекулу. Эфиры воска нанесены на внешнюю поверхность нескольких листьев растений , чтобы обеспечить им защиту окружающей среды . 25-30% кожного сала человека — это также эфиры воска, которые защищают окружающую среду.

Таким образом, наличие сложного эфира воска дает несколько уникальных свойств: во-первых, масло жожоба чрезвычайно стабильно .Как безумная конюшня. Даже если вы нагреете его до 370 C (698 F) в течение 96 часов, он не сдвинется с места. (Многие растительные масла очень быстро уходят). Если у вас дома есть чистое масло жожоба, вы сможете использовать его годами.

Во-вторых, масло жожоба наиболее похоже на кожное сало человека (оба являются сложными эфирами воска), и они полностью смешиваются. Acne.org предлагает не полностью подтвержденную теорию о том, что благодаря этому жожоба может «обмануть» кожу, заставив думать, что она уже вырабатывает достаточно кожного сала, так что может иметь «балансирующие кожу» свойства для жирной кожи.

В-третьих, масло жожоба увлажняет кожу за счет уникального двойного действия: , с одной стороны, смешивается с кожным салом и образует тонкий, нежирный, полуокклюзионный слой; с другой стороны, он впитывается в кожу через поры и волосяные фолликулы, затем диффундирует в межклеточные пространства внешнего слоя кожи, делая ее мягкой и эластичной .

В итоге суть : в отличие от настоящих растительных масел, эфиры воска были разработаны матерью-природой, чтобы оставаться на поверхности и образовывать защитный, увлажняющий барьер, а масло жожоба, являющееся эфиром воска, уникально превосходно для этого. .

Секреция кишечной щелочной фосфатазы в просвет и сыворотку крови крыс согласованно регулируется

Abstract

Мы сообщили о присутствии кишечной щелочной фосфатазы на частицах с поверхностно-активными свойствами внутри энтероцитов, на поверхности просвета (светлые соскобы слизистой оболочки) и в просвете. кишечника взрослых крыс, питающихся жиром ((1989) J. Clin. Invest. 84, 1355). Чтобы проверить физиологическую роль этих частиц, мы сравнили влияние на секрецию частиц известного индуктора секреции люминальной и сывороточной щелочной фосфатазы (жира) с действием фармакологических стимуляторов (холецистокинин и бетанекол).Жир индуцировал 2–3-кратное повышение активности безмембранной фосфатазы в сыворотке и активности связанной с частицами щелочной фосфатазы в смывах проксимального отдела просвета и легких соскобах слизистой оболочки, достигая пика в обоих отделах через 7 часов после кормления кукурузным маслом. Бетанекол, введенный подкожно, вызывал количественно аналогичное увеличение активности щелочной фосфатазы в сыворотке и активности связанной с частицами фосфатазы в соскобах проксимальной легкой слизистой оболочки, достигая пика через 7,5 мин после инъекции. Холецистокинин также оказывал 2–3-кратное стимулирующее действие через 30 мин после инъекции на активность связанной с частицами фосфатазы в соскобах слизистой оболочки проксимального отдела кишечника и смывах из просвета дистального отдела кишечника.Увеличение активности щелочной фосфатазы в образцах сыворотки достигало пика через 60 мин после введения холецистокинина. Таким образом, три независимых стимула увеличивают появление кишечной щелочной фосфатазы как в просвете, так и в сыворотке. Эти данные подтверждают ранее сделанные выводы о том, что секреция кишечной щелочной фосфатазы в просвет опосредуется секретируемой частицей, а также показывают, что секреция в сыворотку и просвет координируется, и согласуются с гипотезой о том, что повышение активности щелочной фосфатазы в сыворотке может быть связано с для внеклеточного высвобождения фермента из частиц.

Ключевые слова

Щелочная фосфатаза

Желудочная секреция

Холецистокинин

Бетанекол

(кишечник крысы)

Сокращения