что такое классика, сравнение до и после, нарощенные ресницы с натуральным эффектом

Современные технологии и материалы позволяют воплотить в жизнь женские мечты о красивой внешности. Желание иметь длинные и объёмные ресницы также стало осуществимо в последние годы. Чтобы они выглядели естественно и в то же время эффектно, применяют классическое наращивание ресниц.

Что это такое?

Классическое наращивание – это процесс увеличения длины и толщины натуральных ресниц при помощи искусственных. Процедура подразумевает наклеивание на одну натуральную ресницу одной искусственной, что зрительно увеличивает их объём. Этот способ ещё называют поресничное наращивание или 1D. В процедуре не участвуют только пушковые ресницы (маленькие).

Классика повторяет природный рост ресниц. В результате получается натуральный эффект, особенно если выбрать искусственные ресницы небольшой длины. Но несмотря на всю простоту, они могут выглядеть по-разному.

Как выглядит?

Естественный эффект классического способа всё же даёт возможность для фантазии. Главную роль в этом будут играть длина, толщина и изгиб искусственных ресниц. Например, используя более длинные варианты на внешних уголках глаз, можно придать взгляду загадочность и глубину. Чем толще волоски, тем ярче взгляд.

Лёгкий изгиб придаёт завершённости, а средний – открытости, выразительности. Сильный изгиб делает взгляд изумлённым. Кроме того, можно экспериментировать с цветом. Однако классическое наращивание может справиться не со всеми задачами, уступая дорогу объёмному.

Чем отличается от объемного?

Если от природы ресницы имеют среднюю густоту и хочется сделать их более пушистыми, то не стоит прибегать к классическому методу. Он не поможет восполнить пробелы между ресницами. Пушистые ресницы – прерогатива объёмного наращивания. Именно благодаря нему можно создать самые яркие образы. Эффект образуется от склеивания двух и более искусственных ресниц с одной натуральной.

Выразительные глаза – это не конечный результат наращивания. С его помощью можно корректировать внешность. Наглядное сравнение позволит легко увидеть разницу.

Сравнение до и после

Один из ярких примеров коррекции – это близко и далеко посаженные глаза. В первом случае глаза посажены близко. При наращивании используются реснички разной длины. Длина увеличивается при приближении к внешним уголкам глаз, визуально увеличивая расстояние между глазами.

Усилит эффект игра цвета (от светлого к тёмному, двигаясь от внутренних к внешним уголкам глаз). В этом случае клей обязательно должен быть прозрачным.

С широко посаженными глазами производится обратная процедура. Ресницы на внутренних уголках глаз должны быть яркими и заметной длины. Тем самым акцент выставляется на переносице, что существенно сокращает расстояние между глазами.

Особенности натуральных материалов оказывают влияние на выбор искусственных. Чтобы сделать его правильно, нужно ориентироваться в существующих видах ресниц и тонкостях их применения.

Виды

• Длина. Это расстояние от основания до кончика волоска. Она варьируется от 4 мм до 21 мм. В зависимости от длины они могут быть: короткие – до 8 мм, средние – 9 -12 мм, длинные – 13-14 мм, очень длинные – свыше 15 мм.

Чаще всего наращивание производится средней длиной.

• Толщина.
  Эта характеристика определяется у основания волоска и может варьироваться от 0,05 мм до 0,3 мм. Для классического наращивания выбрают волоски толще – от 0,15 мм. Но если природные ресницы тонкие и ослабленные, то нужно выбрать тонкие, чтобы не создавать на них лишнюю нагрузку.
• Изгиб. Это степень завитка ресницы, полученного термическим путём. Каждая степень имеет буквенное обозначение. J (A) – это небольшой изгиб, схожий с изгибом натуральных ресниц. Длина с таким изгибом короткая. B – слегка превышает изгиб J, являясь также естественным. C – это средний, уже более заметный изгиб. Он чаще всего используется при проведении описываемой процедуры. D – сильный изгиб. Позволяет визуально увеличить глаза. L – ресницы с этим обозначением имеют загиб на конце, у основания же они прямые.
• Цвет. Основными цветами ресниц для наращивания являются чёрный и тёмно-коричневый. Остальные цвета – дополнительные, и могут быть любыми. Существуют ресницы, которые сочетают в себе сразу несколько цветов. Они используются для декора или создания ярких образов.

Решающее значение играет не только правильно подобранная форма, но и качество. Наиболее качественные материалы относятся к премиум-классу. Такие ресницы не деформируются во время носки, с ними легко работать. Среди фирм класса Люкс по производству материалов можно отметить:

• Dolce vit. Продукция этой южнокорейской фирмы является лучшей на рынке. Они производят ресницы различных форм и расцветок. С ними легко работать как профессионалам, так и новичкам. В ассортименте представлены все необходимые материалы, чтобы выполнить поресничное наращивание.
• Irisk Professional. Ещё один популярный бренд, продукция которого имеет высокое качество и разнообразие в выборе материалов. Ресницы этого производителя прочные и невесомые. Цветовая палитра позволяет экспериментировать и добиваться самых впечатляющих результатов.
• Macy. Отличительной особенностью этого производителя является выпуск продукции, которая не вызывает аллергических реакций. Клиентам, для которых эта проблема наиболее актуальна, стоит обратить внимание на продукцию именно этого бренда. К тому же по качеству ряд продукции этой фирмы существенно выигрывает у конкурентов.

Кроме общих характеристик, ресницы принято различать по материалам. Все они произведены из моноволокна. Но для удобства работы лэшмейкеры разделили все ресницы на группы по совокупности характеристик. Каждая группа имеет название либо зверька, шерсть которого она напоминает, либо похожего материала. В итоге клиенту предлагают вариант, который лучше использовать.

Какие используют?

Всего существует четыре вида материалов, каждый из которых производит свои неповторимые эффекты:

• Соболь. Эта группа включает наиболее толстые волоски, которые не предназначены для повседневной носки. Целью наращивания являются торжественные случаи, когда нужен более выраженный эффект. Соболиные реснички держатся не долго, оказывают большую нагрузку на натуральные ресницы. Через 2-3 дня их желательно снять специальным средством.
• Шёлк. К шёлковым относят ресницы средней толщины. Они универсальны, поскольку подходят для разных видов натуральных ресниц. Шёлковые ресницы представлены в различных цветах, поэтому их можно использовать для повседневной носки и торжественных случаев.
• Норка. К этой группе относят наиболее тонкие и лёгкие ресницы. Этот вариант стоит выбрать, если натуральные ресницы тонкие и ослабленные. Они наиболее приближены к природным, поэтому выглядят естественно.
• Силикон. Эти реснички отличаются упругостью. Они очень комфортны в носке, поскольку прекрасно держат форму, не сминаясь и не заламываясь. Их выпускают различных диаметров и длины. Ещё одна особенность, которой они обладают – это красивый блеск.

Процедуру наращивания с любым из этих материалов проводятся идентично. Чтобы результат держался в течение всего обещанного срока, к каждому шагу нужно отнестись ответственно.

Пошаговое руководство

Процедура наращивания состоит из нескольких этапов:

• Выбор материала. Лэшмейкер учитывает особенности внешности клиента, толщину и длину натуральных ресниц. Всё это сказывается на выборе материала. Например, длина наращенных ресниц может превышать длину натуральных не более, чем на 2 мм.
• Фиксация нижних ресниц. Для того, чтобы верхние и нижние реснички не склеивались при соприкосновении, нижний ряд изолируют. Для этого используют гелевую, силиконовую или каллогеновую подложку. Она наклеивается поверх нижних ресниц от внутреннего к внешнему уголку глаз.
• Обработка верхнего ряда ресниц. Этот этап особенно необходим, если кожа клиента жирная. Частицы жира не позволят наращенным ресницам держаться продолжительное время. Верхние реснички и область вокруг глаз протирают обезжиривателем или мицеллярной водой.
• Подготовка материалов к работе. Все необходимые материалы должны удобно располагаться под рукой у мастера. Это во многом влияет на качество и скорость работы. Рядом должны находиться палетка с ресницами и яичко с нанесённой капелькой клея. В руках размещаются два пинцета: прямой и изогнутый.
• Наращивание ресниц. Прямым пинцетом раздвигается ресничный ряд, а изогнутым – производятся действия с искусственной ресницей. Её необходимо захватить, обмакнуть в клей, убрать излишки и поднести к натуральной, доступ к которой обеспечивает прямой пинцет. Искусственной ресницей нужно провести по натуральной, чтобы смазать клеем и приложить к ней. Важно соблюдать отступ от кожи века не более чем на 1 мм. Минимальное расстояние до века – 0,5 мм.

Область склеивания должна доходить до середины натуральной ресницы. Дальнейшие действия предполагают применение различных техник. Существует две техники наращивания: «каскад» и «книжка». В первом случае наращивание происходит поочерёдно на каждой последующей реснице, постепенно двигаясь вдоль ряда. Схема наклеивания техникой «книжка» подразумевает работу над ресницей сначала в одном уголке глаза, затем – в противоположном, попеременно.

У каждого мастера есть своя наиболее трудоёмкая зона ресничного ряда. Одним сложнее работать в области внутреннего уголка глаз, другим – внешнего. На работу в этой зоне уходит больше сил, поэтому нельзя оставлять её на конец процедуры. В это время нарастает утомление, устают глаза, работать становится сложнее.

С другой стороны, при каскадном наращивании могут быть случаи склеивания близлежащих ресниц. Идеальным вариантом избежать этих неприятностей является техника «книжка». Для поресничного наращивания её особенно удобно использовать.

Завершающие действия и консультация

После завершения работы над всеми ресницами нужно их расчесать специальной кисточкой и снять подложку. Кисточка должна быть индивидуальным аксессуаром для каждого клиента, поэтому лучше подарить её для ухода за ресницами в дальнейшем. После процедуры нужно рассказать клиенту о правилах ухода.

Сколько длится процедура?

Длительность процедуры зависит от густоты ресниц и опыта лэшмейкера. В среднем, она занимает 1,5-2,5 часа. Меньшее время будет свидетельствовать о том, что работа будет выполнена некачественно.

Сколько держится эффект?

Продолжительность ношения ресниц для всех индивидуальна. В среднем, они держатся около месяца. У некоторых срок составляет 1,5-2 месяца. Всё зависит от частоты смены собственных ресниц и качества выполнения работы.

Период роста натуральной ресницы составляет несколько месяцев, после чего она выпадает. На смену ей появляется новая. Это и оказывает влияние на срок ношения. Через 3 недели после наращивания делают коррекцию.

Последствия

При правильно выполненном наращивании опытным специалистом негативных последствий наращивания быть не должно. Если же технология была нарушена, то последствия могут быть следующие:

• Аллергическая реакция. Процедура наращивания в салоне всегда предполагает использование специального клея высокого качества. Если его наносить с соблюдений необходимого отступа, без соприкосновения с кожей века, аллергической реакции бояться не стоит. Однако индивидуальную непереносимость исключать нельзя. Применение дешёвых аналогов или клея, не предназначенного для этой процедуры, может вызвать воспалительные процессы и отёки.
• Излом натуральных волосков. Причиной этого является непрофессионализм лэшмейкера. В числе ошибок может быть склейка натуральных ресниц между собой или неправильно подобранные размеры. Виновен в этом может быть и сам клиент, если принял решение снять ресницы самостоятельно. Кроме того, к излому может привести несоблюдение правил ухода за ними.
• Преждевременное отслаивание. Причин отслаивания может быть несколько. Одна из них – некачественная обработка ресниц или её отсутствие перед процедурой наращивания. Второй причиной может быть неправильное склеивание. Препятствовать длительному эффекту наращивания может жирная кожа клиента или использование маслосодержащих средств в уходе за лицом.

Несмотря на перечень негативных моментов, стоит отдельно рассмотреть, какие возможности предоставляет правильно выполненная процедура. Эти секреты использует лэшмейкер, чтобы результат для клиента был максимально положительным.

Полезные секреты

Прибегая к любой процедуре, женщина мечтает выглядеть максимально красивой. Идеальная внешность предполагает горизонтальную линию расположения глаз. Форма глаз – миндалевидная.

Задача лэшмейкера – приблизить внешность к идеалу, не усугубляя недочёты. Кроме рассмотренного выше примера расстановки глаз относительно переносицы, существует большой перечень других хитростей. Вот лишь некоторые из них:

1. Визуально исправить глубину посадки глаз можно при помощи цвета. В этом случае светлые и тёмные ресницы чередуются, а сплошного чёрного цвета необходимо избегать.
2. Если глаза круглые, вытянуть их поможет лисья форма наращивания, когда длина ресниц увеличивается по направлению к внешним уголкам глаз. И наоборот, если необходимо округлить глаза, то акцент выставляется в средней части века.
3. Если внешние уголки глаз опущены, нужно выбрать ресницы с сильным изгибом. Если приподняты – с небольшим.

Но какие бы преимущества процедура не давала, необходимо оценить все плюсы и минусы.

Плюсы и минусы

Наращивание имеет как положительные, так и отрицательные стороны. В числе положительных можно отметить:

• Привлекательная внешность. Красивые ресницы создают игривый взгляд, позволяют своей обладательнице чувствовать себя красивой и уверенной в себе. Они привлекают к себе внимание окружающих, не позволяя женщине оставаться незаметной.
• Коррекция лица. Иногда правильно наращенные ресницы позволят избежать даже помощи пластического хирурга. Например, в случае свисающих век.
• Нет необходимости в косметике. Ресницы позволяют оставаться яркой без использования каких-либо косметических средств. Это особенно актуально при недостатке времени и в поездках.
• Водные процедуры без проблем. Можно смело купаться в море, посещать сауну, бассейн или аквапарк. Волнение за макияж не омрачает отдых. В таких случаях косметикой можно вообще не пользоваться и оставаться красивой.

Но есть и отрицательные моменты в наращивании. Среди них:

• Риск попасть к плохому мастеру. Это проблема, которая повлечёт за собой все последующие. Поэтому очень важно максимально ответственно отнестись к поиску опытного специалиста.
• Вероятность аллергии. Даже при маленькой вероятности этот пункт стоит учитывать, поскольку вред будет причинён важному человеческому органу.
• Постоянный контроль над своими действиями. Этот пункт особенно актуален для тех, кто впервые сделал наращивание. Необходимо постоянно помнить, что нельзя тереть глаза и спать лицом в подушку.
• Необходимость в коррекции. Чтобы ресницы всегда выглядели эстетично, нужно своевременно обращаться к специалисту для их коррекции. Это требует дополнительных денежных затрат.

При всех нюансах не трудно представить, что процедура может вызывать совершенно разное к себе отношение клиентов. Что и отражается в их отзывах.

Отзывы

Негативные отзывы связаны, в основном, с последствиями нарушения технологии наращивания. При этом клиенты отмечают склеивание ресниц, некрасивый их вид и непродолжительный эффект. Есть случаи аллергической реакции, ощущение пощипывания глаз. Однако большинство отзывов имеют положительный характер. Главными достоинствами для них стали преображённая внешность и возможность не пользоваться тушью.

Процедура наращивания ресниц в последнее время всё больше набирает обороты. Ведь каждая женщина уже без большой опаски может ей воспользоваться, особенно в торжественные моменты своей жизни. О том, как правильно наращивать ресницы, смотрите в следующем видео.

Разреженный эффект наращивания ресниц — схема и фото «лучики»

Наращивание ресниц является одним из самых быстрых и доступных способов придания дополнительной выразительности женскому взгляду. Макияж ресниц и правильный уход не придаст им такого обьема и густоты, как наращивание. Согласно статистике, к такой процедуре прибегают гораздо чаще, чем к другим видам современных косметических услуг по наращиванию. Среди многочисленных способов наращивания, лидирующие позиции занимает разреженный эффект, позволяющий достичь максимальной естественности во взгляде.

Наращивание ресниц с разреженным эффектом так же называют «лучиками», потому что поочередное расположение волосков вызывает визуальную ассоциацию с солнечными лучиками. Результат такого наращивания можно посмотреть на фото в конце статьи.

Принцип разреженного эффекта наращивания ресниц

Разреженное наращивание помогает придать женским глазам дополнительную красоту, не лишая их при этом природной натуральности.

Принцип эффекта заключается в креплении искусственных волосков не на каждую ресницу, а с соблюдением заданного интервала. Для этого применяются искусственные или натуральные волоски, отличающиеся друг от друга по длине. Искусственные реснички фиксируются таким образом, чтобы соответствовать особенностям естественного ряда.

Такая технология во многом напоминает классику, но позволяет достичь большей густоты и выразительности. Результатом наращивания с разреженным эффектом становятся ресницы, придающие взгляду естественную легкость и имеющие вид, приближенный к натуральному. Многие представительницы прекрасного пола, желающие выглядеть одновременно привлекательно и естественно, чаще отдают предпочтение именно этому эффекту.

Преимущества и недостатки эффекта

К основным преимуществам разреженного эффекта относят:

1. увеличение густоты и объема;
2. сохранение естественного облика;
3. способность сочетаться с любым стилем;
4. длительный эффект.

Эффект «лучиков» привлекает посетительниц салонов красоты оригинальностью и возможностью получения максимально натурального результата. Наращенные таким образом ресницы не требуют особого ухода или применения специальной косметики и инструментов. Разреженный эффект относится к неполному наращиванию. В отличие от других методов он требует меньшего количества материалов, что позволяет клиентам экономить средства.

К недостаткам эффекта можно отнести кропотливость процесса наращивания и необходимость восстановления ресниц после снятия искусственных волосков. Такая процедура требует от мастера высокого уровня профессионализма и использования высококачественных составов. Применение дешевых средств обернется неприятными последствиями для посетительниц, вплоть до серьезного повреждения натуральных ресниц.

Кому подойдет разреженный эффект

Наращенные волоски с эффектом «лучики» не вызывают ощущения тяжести и придают глазам аккуратный, сдержанный вид. Многие косметологи рекомендуют эту разновидность процедуры обладательницам любого типа натуральных ресниц. Девушки с густыми ресницами обретут большую выразительность и сохранят естественный объем, а обладательницы прямых и коротких ресничек получат дополнительные волоски, которые увеличат длину, и помогут создать привлекательный изгиб.

Процедура не подойдет девушкам и женщинам, которые хотят визуально откорректировать форму глаз, так как при использовании волосков различной длины, форма глаз остается неизменной.

Схема наращивания ресниц «лучики»

Родные ресницы отличаются по длине и растут не одинаково. Для создания разреженного эффекта наращивания ресниц специалисту потребуются искусственные или натуральные волоски различной длины, от 8 до 12 мм. Наращиваемые ворсинки внешне должны копировать вид родных ресниц, поэтому главная задача мастера – подобрать их в полном соответствии естественному ряду и виду собственных ресниц клиентки.

Специалист работает в стерильных условиях при помощи специального набора инструментов, который состоит из спрея-обезжиривателя, нескольких пинцетов и емкости для клея. Принципиальное значение имеет высокое качество и гипоаллергенность клеящего состава.

Обладательницам повышенной аллергической реакции рекомендуется с осторожностью относиться к любым видам наращивания, так как некоторые клеящие составы могут вызывать раздражение.

При разреженном эффекте применяется поресничное наращивание. Искусственные или натуральные элементы прикрепляются с определенным интервалом, который заранее был оговорен с клиенткой. Длинные волоски приклеивают через определенное количество коротких волосков, от 1 до 6. При хорошем природном объеме, но недостаточной длине, искусственные ворсинки крепят через одну. По желанию клиентки длинные фрагменты можно сделать цветными.

Уход после наращивания

Чтобы сохранить наращенные волоски как можно дольше, стоит придерживаться нескольких правил:

• умываться и использовать очищающие косметические средства следует не ранее чем через 2 часа после окончания процедуры;
• в процессе ухода за лицом избегать применения жирных и спиртосодержащих продуктов;
• для снятия косметики с век использовать ватные тампоны, так как во время умывания может ухудшиться состояние ресниц;
• избегать трения в области глаз и резких перепадов температур.

Повышенная жирность кожи нуждается в особом внимании. Дерма такого типа требует регулярного очищения и поддержки баланса – при чрезмерной активности сальных желез, наращенные волоски начинают отслаиваться. Также не стоит пытаться самостоятельно снимать добавленные элементы. При неграмотном подходе к процессу можно повредить собственные ресницы. Лучшим решением станет посещение косметического салона, где процедуру проведут безопасно и на профессиональном уровне.

Противопоказания

Основным противопоказанием к наращиванию ресниц с разреженным эффектом являются тонкие и слабые реснички, так как дополнительная нагрузка может ухудшить их состояние. «Лучики» и другие варианты не рекомендуются при сухой коже лица. После проведения таких процедур могут ощущаться дискомфорт и неприятное ощущение стянутости.

Фото

Фото разреженного эффекта наращивания ресниц можно посмотреть в галерее ниже. Не стесняемся комментировать и делиться статьей в социальных сетях.

ОСОБЕННОСТИ СИЛИКОНОВЫХ РЕСНИЦ, ПЛЮСЫ И МИНУСЫ НОВОГО МАТЕРИАЛА

Опубликовано: 28 февраля 2018 г. в 00:00
Обновлено: 30 мартa 2018 г. в 14:14

Поспать с утра подольше, но при этом сражать окружающих томным и чувственным взглядом – мечта многих девушек, ради воплощения которой все больше красоток склоняется не в пользу дорогостоящих тушей из категории люкс, а выбирают профессиональное наращивание особыми силиконовыми ресничками. Доверившись рукам опытного мастера можно надолго забыть о ежедневном ритуале макияжа, но обрести всегда пушистые, объемные, густые ресницы, которые не ломаются и не гнутся, всегда смотрятся как шикарный подиумный макияж. В чем секрет популярности искусственных ресниц из силикона, и кому непременно стоит их попробовать, мы расскажем вам в нашей сегодняшней статье.

Что представляют собой силиконовые ресницы? Достоинства и недостатки по сравнению с обычными материалами для наращивания

Нарощенные силиконовые ресницы дарят девушке невероятно выразительный взгляд, которому не страшны ни дождь, ни снег, ни мягкие объятья любимой подушки. Именно этот материал особенно подходит тем красоткам, глаза которые чувствительны и склонны к аллергическим реакциям. Он химически инертен и максимально биологически совместим с тканями человеческого организма, благодаря чему в умелых и опытных руках может подарить прекрасным дамам неотразимый взор без риска осложнений. Однажды оценив все прелести силиконового наращивания, многие представительницы прекрасной половины человечества прибегают к нему снова и снова, ведь у данного материала для моделирования взгляда очень много весомых преимуществ перед классическими искусственными ресничками. Давайте познакомимся с ними поближе…

К несомненным достоинствам данных ресничек относят такие моменты, как:

• Высокое качество экологически чистого материала изготовления.
Благодаря ответственному подходу к выбору сырья, бренды-изготовители силиконовых ресниц выпускают упругие, эластичные, прочные и гибкие волоски для наращивания, гарантирующие не только естественный эффект, но и защиту от перекручиваний и надломов. Безопасный состав позволяет комфортно носить данные реснички также и девушкам, носящим контактные линзы;

• Пластичность в процессе носки и ее длительность.
  
Новый тип волокна для искусственных ресниц делает их максимально устойчивыми к внешним воздействиям, они быстро и легко восстанавливают свою прежнюю форму после деформации. Кроме того, особый состав ресничек позволяет при качественно выполненном наращивании носить их в 2 раза дольше;




• Выразительный макияж без применения туши для ресниц.
Полимерный материал с входящим в него силиконом придает ресничкам натуральный мягкий блеск, который в зависимости от производителя может быть как более глянцевым, так и приглушенно-виниловым. Ресницы из силикона за счет своей угольной черноты придают взгляду особую красоту и притягательность, создавая эффект густо накрашенных глаз (визуальный эффект туши с удлинением и максимальным объемом).

• Легкий уход и минимум ограничений в процессе носки.
  
Должная забота о ресницах позволит вам носить их красиво и комфортно 2-3 недели до коррекции (при поресничком способе наращивания), тратя при этом минимальное время на макияж глаз. После истечения 12-ти часов от окончания процедуры наращивания вы сможете купаться без ограничений и посещать сауну. Ресничкам будут не страшны ни повышенная влажность, ни резкие перепады температур.

Что же касается возможных минусов, то к ним можно отнести такие факторы, как:

• Большая плотность и вес по сравнению с «шелковыми» ресницами.
  
Ресницы из силикона самые толстые и имеют длину волосков 0,15-0,25 мм. А значит, свои натуральные ресничные волоски должны быть достаточно прочными и сильными, чтобы выдержать дополнительный вес;

• Необходимость похода в салон к опытному мастеру.
  
Для того, чтобы силиконовые реснички придали вашему взгляду желанную манящую глубину, необходимо довериться рукам профессионала. Только сертифицированный лэшмейкер сможет подобрать длину и толщину, подходящую конкретно вашим глазам, а значит, соблюсти тонкую грань между естественностью и выразительностью. Если наращивание выполнено мастером-косметологом с ненаметанным глазом и не набитой рукой, взгляд из шикарного и таинственного превратится в нарочито кукольно-манекенный.
• Длительность процесса наращивания и высокая цена.
  
Фактура материала, диагностика глаз (ресниц) клиента и сама процедура поресничного силиконового наращивания отнимет у модницы не менее двух часов. Значительную часть этого времени придется провести с закрытыми глазами, дабы клей не проник на внутреннюю поверхность слизистого контура глаза и не вызвал покраснение. Немаловажное значение имеет и цена вопроса. Стоит быть готовым к тому, что взгляд вашей мечты потребует существенных затрат, включающих как услуги мастера и аренду кабинета, так и стоимость всех необходимых расходных материалов.

• Ответственный подход к последующему макияжу глаз.
  
Для того, чтобы ваши новые реснички не выпали и не повредились, необходимо выбрать качественный клей, а сам макияж глаз выполнять предельно аккуратно и использовать легкие в нанесении и последующем демакияже декоративные средства. Создавая образы с применением карандаша или подводки, у не опытных в маникюрном деле девушек могут возникнуть затруднения с нанесением декоративных продуктов на кожу, прилегающую к клеевому слою.
Если же ради красоты вы готовы на все, в том числе и на особый уход за особыми ресничками, давайте развеем последние сомнения и опровергнем бытующие заблуждения о силиконовых ресничках…

ТОП-5 мифов о силиконовых ресницах, или что вы должны знать, готовясь к наращиванию

Несмотря на то, что процедура моделирования взгляда силиконом выполняется уже достаточно давно, у девушек, впервые решающихся на эту процедуру, возникает немало вопросов. Ответим на самые распространенные из них…

• Миф №1. Наращивание ухудшает состояние собственных ресниц. Это утверждение неверно, если вы доверили ваши глаза рукам истинного профи. Если проводить коррекцию и снятие в салоне, а не снимать и не выдергивать реснички самостоятельно, ваши природные «опахала» ничуть не пострадают. В процессе ношения искусственные реснички выпадают вместе с натуральными, к которым они крепятся. Это естественный ход вещей, никак не связанный с качеством материала или клеем для его фиксации, ведь они имеют натуральное происхождение, прошли тщательное тестирование и снабжены сертификатами соответствия;
• Миф №2. Силиконовые ресницы неудобны в носке. И это также не соответствует истине. При соблюдении технологии наращивания данные реснички не утяжеляют веко, не тянут его вниз и практически невесомы при моргании. А если мастер правильно подобрал длину и изгиб, можно спать даже уткнувшись в подушку. Утром вам придется лишь умыться бережной пенкой и аккуратно расчесать реснички, — они высохнут и быстро примут прежнюю форму всего за 10-15 минут;
• Миф №3. Силикон – не лучший выбор для девушек, ведущих активный образ жизни и любящих сложный мейкап. Как раз наоборот! Если вы не обладаете дурной привычкой постоянно тереть глаза, соблюдаете рекомендации мастера-лэшмейкера, то после усадки и окончательной фиксации клея с кожей и ресничками, они порадуют вас долговечностью и красотой, даже если вы ежедневно посещаете спортзал, бассейн и солярий. Вам не потребуются щипчики для фиксации изгиба, так как ресницы не теряют его в процессе носки и отлично держат форму, сохраняя мягкость и блеск;
• Миф №4. Силиконовые ресницы заставляют глаза уставать и смотрятся вычурно. Этот миф легко опровергнуть, если вы ответственно подошли к процедуре наращивания и подобрали оптимальную длину и способ наращивания именно под ваш тип внешности. Для того, чтобы привыкнуть к силиконовым ресничкам и определиться с идеальной для вас формой, стоит начать с поресничного наращивания полным объемом с минимальной толщиной (0,10-0,15 мм). После первой коррекции вы сможете перейти на большую длину и объем, если чувствуете в этом необходимость;
• Миф №5. Силиконовые ресницы можно носить более месяца без коррекции. Хотя многим девушкам хотелось бы сэкономить на визитах к мастеру, но ни снимать реснички самостоятельно, ни перенашивать их не стоит. При поресничном наращивании обновить взгляд потребуется через 2-3 недели, а при пучковом – уже спустя пять дней. Причем выполнять это необходимо с помощью специального средства – дебондера, наносить которое следует предельно аккуратно, дабы жидкость не попала в глаза.
Помимо прочих неясностей, довольно часто начинающие знакомство с миром силиконовых ресниц справедливо интересуются особенностями ухода за новообретенной красотой. Рассмотрим этот вопрос подробно, так как именно от соблюдения всех правил и советов зависит долговечность результата и то, как скоро вам придется отправиться на повторный визит к косметологу.

Правила ухода за силиконовыми ресницами после наращивания: что можно, а что нельзя

Хотя довольно часто возникает мнение, что за нарощенными ресницами, в том числе силиконовыми очень сложно ухаживать, это не совсем верно. Да, тонкостей немало, но запомнить их легко и просто. Итак, чтобы ваша изящная и пушистая красота дольше оставалась такой же мягкой, изогнутой, прочной и с красивым блеском, нельзя:

• в первые сутки (минимум 12 часов после процедуры) мочить глаза или подвергать веки контакту с высокими температурами. Крайне нежелательно плакать, потеть, умываться. В ином случае клей не просохнет полностью и может попасть в глаза, вызвав опасные для здоровья покраснения и раздражения;
• пользоваться жирными кремами для ухода за кожей вокруг глаз, а также применять жирные продукты для демакияжа с содержанием масел. Подойдут только демакиянты на безспиртовой основе и oil-free (безмасляные). Иные продукты могут повредить реснички или растворить клей;
• макияж с силиконовыми ресницами, как правило, не подразумевает применение туши, либо необходима специальная профессиональная тушь, разработанная специально для искусственных полимерных ресничек;
• щеголяя в силиконовом великолепии нельзя направлять прямые струи душа на ресницы, так как не исключен риск повреждения клеевого слоя и выпадения ресничек;
• еще одним ограничением является склонность к частым заболеваниям глаз, в особенности коньюктивитам. В таком случае стоит отказаться от силиконовых ресниц, подлечить глаза и пользоваться специальными препаратами для укрепления собственных ресничек, перед тем как прибегнуть к процедуре наращивания.

Что же нужно делать, чтобы Вашему преображенному взгляду оставаться таковым вплоть до коррекции? Можно и нужно:


• периодически нежно промывать силиконовые реснички простой водой с щадящим детским шампунем, мягко промакнуть полотенцем и прочесать чистой щеточкой. При этом глаза не тереть и не теребить;
• снимая макияж с глаз, наносить препарат на ватный диск и прикладывать его к векам на 20-30 секунд. Затем аккуратно провести диском сверху вниз, смывая косметику;
• заботиться о поддержании витаминного баланса в организме, так как недостаток полезных веществ может спровоцировать выпадение ресниц, сведя на нет все ваши усилия и плоды трудов лэшмейкера.

Как видите, ничего особенно сложного от красотки с силиконовыми ресничками не требуется. И если все советы соблюдать в точности, то вам надолго обеспечен неотразимый взгляд, пленяющий сердца сильного пола. Как мы уже отметили выше, сам процесс наращивания необходимо проходить строго у профессионального мастера по наращиванию. Ниже вы можете познакомиться с процедурой классического наращивания ресничек, чтобы окончательно определиться с необходимостью и целесообразностью данной процедуры. А также чтобы подготовиться к ней правильно и не мешать мастеру, работающему над созданием вашего идеального взгляда.


Уже практикующим лэшмейкерам, только начинающим вводить в свой прейскурант наращивание силиконовых ресничек, мы советуем заглянуть в соответствующие разделы оборудования, инструментов, расходных жидкостей и аксессуаров, чтобы подобрать все самые необходимые высококачественные материалы для преображения любимых клиенток.

Тренды в наращивании ресниц 2021

Новый сезон – новые тренды. 2021 год принес изменения во всех модных направлениях: от одежды и аксессуаров до причесок. Наращивание ресниц тоже поддается влиянию моды.  

Итак, что сейчас в тренде?

Естественность

Натуральность все активнее и активнее вводится в моду. Естественные цвета волос и длина ресниц в этом году возьмут пальму первенства.

Экстремальная форма, длина и густота ресниц уходят в прошлое. Глаза фарфоровой куклы уже неактуально.

В этом году многие будут подчеркивать свою естественную красоту.

Отсюда наши рекомендации:

• Длина наращенных ресниц близка к естественным
• Оптимальная густота без перебора
• Натуральный цвет (для блондинок популярен коричневый и более светлые оттенки)
• Без страз и прочих излишеств
• Форма – классическая или лисья

Главная задача мастера – сделать взгляд выразительными при полном сохранении естественности.

Акцент на внешние уголки глаз

Лисий эффект – специальная техника наращивания с подчеркиванием ресничек на внешнем углу глаз. Благодаря ему визуально кажется, что у девушки нарисованы стрелки. Взгляд становится более привлекательным и манящим.

Конечно, нужно учитывать и первый пункт – естественность. Специалисты используют искусственные реснички средней длины, фиксируют их через одну и при этом не трогают основную часть ресниц, затрагивается только внешняя сторона. Те ресницы, что остались нетронутыми при процедуре можно заламинировать или окрасить. В результате получается натуральный лисий эффект. Глаза визуально вытягиваются, что придается их хитрости, игривости и загадочности.

Однако не всем эта форма подходит. Например, если у девушки далеко посажены глаза, то ей стоит применить другую технику.

Тонкие искусственные реснички

В сезоне 2021 года популярным будет наращивание тонкими ресничками. Диаметр волосков от 0,03 до 0,1 мм. Ультралегкие реснички легче фиксируются, дольше носятся, выглядят натурально и не утяжеляют взгляд. Он становится легким и воздушным, как у детей.

Экспресс-наращивание

Как понятно по названию, это быстрое наращиванием. При стандартной процедуре искусственные реснички фиксируются на каждую натуральную, а при экспресс-наращивании – только на зрелые волоски. Реснички, что находятся в стадии роста (мелкие, тонкие и короткие) не затрагиваются.

Небольшая особенность приносит свои плюсы:

• Время процедуры сокращается в разы
• Натуральный эффект
• Увеличение густоты
• После снятия наращенных ресниц глаза не остаются «голыми»
• Карим глазам подойдут голубые, синие, желтые, зеленые и золотые оттенки.
• Голубоглазым и сероглазым лучше выбрать реснички теплых оттенков — персиковые или нежно-розовые.
• Зеленые глаза отлично контрастируют с фиолетовыми и оранжевыми ресницами.

«Лучики» из ресниц выглядят естественно, сдержанно и аккуратно.

Цветное наращивание

Да, да, не удивляйтесь. Несмотря на всеобщий тренд естественности, некоторые любят выделяться своей яркостью. Речь идет не о полностью фиолетовых или зеленых ресницах.

Цветные акценты расставляются очень лаконично – обычно в уголках глаз или по краю длины ресниц. То есть это частичное цветное окрашивание. Комбинировать можно не только натуральные и яркие оттенки, но и различные натуральные (черный и коричневый, коричневый и блонд и др.).

Важно, чтобы оттенки ресниц сочетались не только друг с другом, но и с цветом глаз:

• Карим глазам подойдут голубые, синие, желтые, зеленые и золотые оттенки.
• Голубоглазым и сероглазым лучше выбрать реснички теплых оттенков — персиковые или нежно-розовые.
• Зеленые глаза отлично контрастируют с фиолетовыми и оранжевыми ресницами.

Амбре

Этот тренд тесно связан с предыдущим. Причем амбре при окрашивании волос в 2021 стало антитрендом, но техника плавно перекочевала с мир ресниц.

Корни ресничек остаются натуральными, а вот концы красят в яркие и светлые цвета. Благодаря этой технике можно расставить акценты на глазах так, чтобы это не бросалось в глаза, но при общении с человеком приковывало взгляд к себе.

Более светлые кончики выглядят как выгоревшие на солнце, что вполне натурально и интересно смотрится.

При амбре можно поиграть с цветами. Поэтом при моргании будет возникать ощущение, что один оттенок перетекает в другой. Это решение больше подходит наиболее ярким и артистичным девушкам.

Мокрые ресницы

Новая техника наращивания только-только начинает популяризироваться. Она создает эффект влажных ресниц, как будто их обладательница только что умылась. Такой акцент на глазах привлекает и выглядит вполне натурально.

Антитренды в наращивании ресниц

В 2021 году резко свою популярность потеряли следующие техники и формы:

• Эффект «Ким Кардашьян», при котором использовались максимально длинные искусственные ресницы с экстремальным изгибом.
• Голливудское наращивание. Эффект получается неестественным, а сами ресницы выглядят громоздкими. Слишком пышно и густо – не модно!
• Стразы. Все ненатуральное – убираем. Все утяжеляющее взгляд – убираем.

Несмотря на модные течения, не забывайте о своей уникальности и индивидуальности! Не всегда стоит прислушиваться к моде. Если вам нравится ваш образ, придерживайтесь его и оставайтесь прекрасными в своем ампула.

В салоне «Прекрасный стиль» учтут все ваши пожелания и помогут создать именно тот образ, что вы желаете.

Записаться на процедуру

Ресницы классика и 2d отличия. Часто задаваемые вопросы о наращивании ресниц

Классическое наращивание ресниц.Что это такое ?

При классическом (поресничном) наращивании на одну натуральную ресницу приклеивается одна ресница с помощью быстросохнущего клея.




Как выполняется наращивание и сколько оно длится?

Клиент ложится на кушетку, ему одевают одноразовую шапочку, изолируют нижние ресницы и начинают процедуру. Так он лежит от полутора часов и больше — время зависит от выбранного объема и количества натуральных ресниц. Обращаем ваше внимание, что качественное наращивание не может длится 30-40 минут. Представьте, у нас на одном глазу около 150-200 ресничек, так вот на каждую ресничку нужно приклеить еще одну, а если это объемное наращивание, то еще нужно сформировать микропучок. Среднее время при наращивании ресниц 1,5-3 часа.




Чем отличается классическое и объемное наращивание?

Как уже было отмечено выше — при классике на каждую свою ресницу приклеивается одна искусственная, при объемном наращивании — на одну натуральную клеится микропучок, в котором две и более ресниц. Отличие 2D/3D(двойного/тройного) от голливудского объема заключается в том, что в 2D/3D- клеится по 2/3 сформированные ресницы, а в голливудском — от четырех до десяти-двенадцати.

Больно ли наращивать ресницы?

Нет. Наращивание ресниц не причиняет боли,если оно выполненно в Академии взгляда Светланы Самышиной сертифицированными мастерами. Но если техника наращивания не соблюдается, то в этом случае могут быть болезненные ощущения.

Как можно проверить: при закрытых и открытых глазах ресницы не мешают, если зажмуриться, они не должны колоть или печь.

Может ли быть аллергия?

На сами ресницы — нет (если они из качественного волокна). Аллергию могут вызвать испарения клея, если глаза не до конца закрыты/приоткрываются во время разговора.

Вредно ли наращивание ресниц?

Нет! Конечно, если оно выполнено по всем правилам, если клиент не вырывает их и соблюдает рекомендации данные мастером.

Можно ли красить наращенные ресницы тушью?

Можно, но после наращивания ресниц они выглядят чернее, длиннее и гуще, поэтому необходимость подкрашивать отпадает.

Можно ли самостоятельно снять ресницы?

Существуют специальные ремуверы (только кремовые и гелевые), с помощью которых происходит процедура снятия. Возможно приобрести себе ремувер для использования в домашних условиях. Самое главное — не вырывать наращенные ресницы, так как они вырвутся вместе со своими.

Какой выбрать эффект?

Для подбора эффекта лучше посоветоваться со своим мастером и отталкиваться от Ваших пожеланий и формы глаз.

Беличий эффект — универсальный, подходит почти всем, с его помощью можно распахнуть глаз,сделать его более выразительным

Лисий эффект — крайне редко кому подходит в связи с тем, что опускает внешний уголок и создает впечатление «грустных» глаз

Кукольный эффект — хорош для округления глаз, подходит узким глазам

Натуральный эффект — подходит всем, так как при данном эффекте выполняется плавный переход длин,соответсвующий натуральному росту ресниц

Разреженный (рваный) эффект — натуральный эффект, при котором верхняя линия ресниц выглядит более «рваной».

Сколько держатся ресницы?

В этом вопросе стоит сказать про рост натуральных ресниц. Полное обновление ресниц происходит в среднем за два-три месяца. Следовательно больше этого времени проходить с ресницами невозможно из-за физиологических особенностей. Наши клиенты,в среднем, носят ресницы 3-5 недель,далее происходит перенаращивание или снятие ресниц.

Самый распространенный вопрос — из чего ресницы?

Искусственная ресница сделана из синтетического гипо-аллергенного моноволокна. Они безвредны и прекрасно имитируют натуральную ресницу. Хотим развеять миф о «норке», «соболе», «шелке» и т.п. — это условные названия. На самом деле шерсть животных, шелковая нить, и даже перья не используются для наращивания.

Длины, толщины и изгибы ресниц

Длины ресниц существуют разные — от самой маленькой 4 мм до самой большой 16 мм. Максимальные длины, которые мастера используют — 12-13мм. Это делается для того, чтобы не создать большую нагрузку на натуральные ресницы, так как под тяжестью есть вероятность их испортить. Толщина также бывает разной. Ультралегкие реснички — 0,05/0,06/0,07; натуральные — 0,10/0,12 и толстые — 0,15/0,20. Чем больше объем, тем тоньше должна быть искусственная ресница. Натуральные ресницы подходят для классики, а толстые ресницы современные мастера не используют, чтобы не утяжелять свои ресницы. Изгибы могут быть как слабые, которые визуальны схожи со своими, так и сильные, которые раскрывают взгляд, приподнимают растущие вниз ресницы.

Наталья Берёзина

Девушки, конечно же, все делают для себя, но при этом всегда хотят оставаться привлекательными для мужчин. Нарастить ресницы хотят очень многие девушки, однако не все решаются из-за страхов, что ресницы выглядят неестественно, за ними сложно ухаживать и т.п.

Классическое наращивание предполагает, что на каждую вашу натуральную ресницу мастер-лашмейкер наклеит одну искусственную. Все ваши ресницы станут длиннее, красоту глаз подчеркнет соблазнительный завиток, темный цвет ресниц позволит взгляду оставаться выразительным и красивым в любое время суток. Однако единственное, что в данном случае меняется незначительно — это объем. Визуально ресницы даже в результате классического наращивания выглядят более густыми, однако часто этого оказывается недостаточно.

Кому это не нужно?

Девушкам, которых природа сама наградила густыми ресницами. Для них классическое наращивание станет идеальным решением. Мы за то, чтобы соблюдать хрупкий баланс и выглядеть натурально, но при этом удачно подчёркивать все достоинства.

Также выбрать классическое наращивание следует девушкам с тонкими от природы, ослабленными ресницами. Оно также сможет выделить глаза, создать яркий и выразительный взгляд, но нагрузка будет минимальной. В любых подобных случаях лучшим советчиком может быть только профессиональный и опытный мастер.

Процедура объемного наращивания подразумевает приклеивание к одной натуральной реснице двух искусственных — это и будет наращивание 2D. В некоторых случаях ограничиваться и этим необязательно, и можно выполнить наращивание 3D — три искусственные ресницы,
приклеенные к одной натуральной.

Расскажем немного подробнее об этой процедуре двойного объемного наращивания (2 D) . Задача лашмейкера в данном случае, как мы уже сказали, аккуратно приклеить по две ресницы к каждой натуральной реснице клиентки. Искусственные ресницы подбираются индивидуально перед процедурой.

Предпочтение отдают тоненьким и легким ресницам , вес которых равномерно распределиться по натуральным и не станет их утяжелять. Это принципиально важный момент, не нужно пытаться добиться выразительности и объема за счет толщины искусственных ресниц — слишком толстые ресницы будут смотреться грубо и станут ненужной тяжестью на веках.

Сегодня все передовые лашмейкеры выбирают тоненькие ресницы премимум-марок и смело наращивают по 2-3 а иногда и по 5 ресниц без вреда для здоровья натуральных ресниц клиентов.

Другой важный момент — правильная постановка искусственных ресниц на натуральную. Их нельзя клеить одна на другую сверху, они приклеиваются рядом, чтобы кончики расходились в разные стороны, но соблюдали общее направление. Это необходимо, чтобы ресничный ряд выглядел ровно, аккуратно и привлекательно.

Клеятся реснички своим основанием, с учетом небольшого отступа от века. Кожи искусственная ресница и клей не касается. Ресницы клеятся плотно, чтобы нижний конец (основание) был хорошо проклеенным и не отходил при носке. Ни в коем случае не должно быть комков клея и так званых склеек.

Вы можете смело сделать себе такое наращивание и совершенно не опасаться выглядеть искусственно или кукольно. Прислушивайтесь к рекомендациям лашмейкера относительно длины, толщины и изгиба, и тогда натуральный эффект вам гарантирован.

Какие существуют варианты


наращивания 2D?
1. Помимо натурального классического эффекта наращивания ресниц , когда воссоздается естественная линия вашего ресничного ряда, существуют другие эффекты: беличий, лисий, кукольный, кошачий и др. Все они отличаются визуальным результатом и акцентами, которые с помощью ресниц разной длины создаст лашмейкер.
2. Мастер может даже изменить визуально форму ваших глаз , откорректировать некоторые недостатки лица, сделать черты более гармоничными, тем самым, преобразив не только взгляд, но и всю внешность в целом. Наращивание, как и макияж, при умелом исполнении может тонко, деликатно, но достаточно существенно подчеркнуть индивидуальные достоинства внешности каждой девушки и скрыть незначительные недостатки.
1. Однако в отличие от макияжа наращивание будет «работать на вас» круглосуточно и при любых обстоятельствах. Наращивание, как и макияж, при умелом исполнении может тонко, деликатно, но достаточно существенно подчеркнуть индивидуальные достоинства внешности каждой девушки и скрыть незначительные недостатки. Однако в отличие от макияжа наращивание будет «работать на вас» круглосуточно и при любых обстоятельствах.
2. Что еще можно менять в вашем наращивании — это цвет, ведь не всегда ваши ресницы должны оставаться исключительно черными. На самом деле, существует довольно много ситуаций, когда стоит отдать предпочтение другому цвету.

Можно ли носить двойное наращивание постоянно?
Ответ на вопрос вам даст ваш лашмекер, ведь именно профессионал видит состояние ваших ресниц, может оценить их реакцию на наращивание и сказать, стоит ли вам сделать перерыв. Как мы уже говорили, искусственные ресницы выбираются тоненькие и легкие, однако нагрузка все равно присутствует.

Чтобы перестраховаться через 3-5 месяцев непрерывного ношения дайте своим ресницам отдых. В этот период мажьте их специальными средствами и маслами, и тогда никаких проблем с внешним видом и здоровье ресниц не возникнет.

Квалифицированные лэшмейкеры всегда начинают карьеру с изучения азов. Основной техникой увеличения густоты и длины ресничек является классика, которую иногда называют 1D или одним полным объемом. Эта методика хорошо подойдет женщинам, решившим впервые подчеркнуть взгляд и посетить мастера.

Чем отличается классическое наращивание ресниц от 2D?

Суть рассматриваемой технологии заключается в аккуратном поочередном приклеивании синтетической волосинки к природной. На каждую собственную ресничку крепится одна искусственная. Чтобы понять отличие данного способа от других техник, необходимо визуально оценить классическое наращивание ресниц и – сравнение показывает, что при двойном полном объеме взгляд становится более распахнутым и выразительным. Это достигается благодаря приклеиванию 2-х полимерных волосяных стержней на один натуральный.

Классическое наращивание ресниц имеет свои преимущества:

• выглядит естественно;
• хорошо подчеркивает контуры века;
• не утяжеляет собственные волоски;
• долго держится;
• быстро делается, не более 2,5 часов.

Виды классического наращивания ресниц

Самый природный и приемлемый для повседневной носки вариант – европейский тип процедуры. Данный вид манипуляции помогает эффектно выделить глаза, но смотрится максимально естественно, окружающие никогда не догадаются, что реснички искусственные. Во время сеанса приклеиваются синтетические волосы разных размеров, в зависимости от локализации и длины собственных.

Есть оригинальное и популярное классическое наращивание ресниц – . Для процедуры подбираются искусственные отрезки 3-х типов: короткие, средние и удлиненные. Маленькие полимерные нитки клеятся в области внутренних уголков глаз. Средние предназначены для выделения центральной части века. Самыми длинными волосковыми отрезками оформляются внешние уголки глаз.

Другие формы манипуляции:

1. Разрежение. Короткие и большие стержни чередуются через один.
2. Беличий хвост. Пышность создается маленькими и средними искусственными волокнами. На внешние уголки глаза крепятся очень длинные реснички.
3. Кукольный взгляд. Делается самыми крупными и подкрученными полимерными нитями.
4. Мультицвет. Вместо черного материала используются яркие и необычные оттенки, контрастные сочетания.

Результат после косметической процедуры зависит от выбранной формы. Если оценивать по фото до и после классическое наращивание ресниц, выполненное в европейской технике, видно существенный прирост объема и небольшое увеличение размеров волосинок. Контур века аккуратно подчеркнут, будто немного подведен. Реснички выглядят пушистыми и подкрученными, но как натуральные.

Лисий эффект тоже смотрится естественно, но взгляд получается более озорным, с хитрецой. Благодаря постепенному увеличению длины стержней от внутреннего уголка к внешнему, разрез глаз становится ближе к миндалевидному. Использование такой технологии помогает женщинам скрыть некоторые недостатки, визуально скорректировать положение верхнего века.

Ниже можно рассмотреть на фото классическое наращивание ресниц остальных типов:

• разреженное;
• беличий хвост;
• кукольное;
• цветное.

Как делать классическое наращивание ресниц?

Описываемая манипуляция упрощенно – это приклеивание волос из полимера к натуральным. Техника классического наращивания ресниц требует строгого соблюдения нескольких правил:

1. На каждую природную волосинку крепится единственная пластмассовая.
2. Материал приклеивается к ресничкам, а не к коже. Расстояние от поверхности века составляет 0,5-1 мм.
3. Отрезки крепятся отдельно друг от друга, они полностью автономны.
4. При классическом наращивании ресница клеится от основания до середины. Посадка должна быть крепкой.
5. Накануне использования смолы тщательно обезжирить кожу.

Длина ресниц для наращивания

Указанный параметр обсуждается с лэшмейкером перед началом косметической процедуры. Опытный мастер подробно объяснит, как подобрать длину ресниц при наращивании правильно, поможет принять решение в соответствии со следующими критериями:

• индивидуальные пожелания клиентки;
• требуемый результат;
• размер собственных волос;
• желаемый изгиб волокон;
• выбранная форма.

Классическое наращивание ресниц, предполагающее естественный внешний вид (европейская технология), требует приклеивания искусственных волосков стандартного размера, который составляет 8-12 мм. Доступные варианты синтетического сырья – от 5 до 18 мм. Для максимальной природности лэшмейкер использует несколько видов, в зависимости от расположения прикрепляемого полимерного стержня.

Рассматриваемый показатель подбирается индивидуально для каждой клиентки. Стандартная толщина, обеспечивающая нужный объем, но не утяжеляющая натуральные реснички – 0,1-0,15 мм. В некоторых случаях данный параметр можно уменьшить или увеличить. Если собственные волосы ломкие и слабые, лучше клеить максимально тонкие варианты. На толстые и крепкие естественные реснички рекомендуется крепить крупные нити. Они не смогут повредить натуральные волоски, но сделают их визуально гуще и пышнее.

Толщина зависит и от выбранного результата. Если необходим одинарный классический объем – наращивание ресниц проводится полимером со стандартными параметрами. Для лисьего, беличьего и кукольного взгляда больше подойдут широкие и плотные синтетические отрезки. Эффект разрежения достигается путем сочетания толстых и тонких волокон разного размера.

Секреты классического наращивания ресниц

Представленная методика производит впечатление простой и быстрой технологии, но для ее выполнения требуется мастерство, большой опыт и высокая квалификация лэшмейкера. Идеальное классическое наращивание ресниц можно сделать, зная несколько тонкостей процедуры:

1. Перед приклеиванием волосинок важно заранее определить их постоянное направление. Оно должно быть абсолютно идентичным для каждой реснички, совпадать с природной линией роста.
2. Скрепленные друг с другом волокна недопустимы. Если выпадет один волос, он неизбежно потянет за собой соседний.
3. Классическое наращивание ресниц требует периодической смены клеящей смолы. Застывающая капля обновляется каждые 15-20 минут.
4. В процессе крепления следует регулярно прочесывать ряд специальной щеточкой, чтобы исключить слипание.
5. Каждый обработанный участок желательно просушить грушей или веером, это улучшает склеивание.

Сколько держится классическое наращивание ресниц?

Минимальный срок носки синтетических волосяных стержней даже при отсутствии должного ухода – 3 недели. Если следовать рекомендациям лэшмейкера, не повреждать полимерный материал, не подвергать его действию влаги, спать на спине, классический эффект наращивания ресниц продержится дольше, около 1,5 месяцев. Своевременная коррекция поможет увеличить этот срок. При регулярном посещении мастера приклеенные реснички держатся до 3-х месяцев.

2D — так называют вид объемного наращивания, когда собственным ресницам придается дополнительный объем, за счет крепления на каждую свою ресницу двух искусственных.

Этот вид наращивания выполняют не пучками, а поштучными ресничками с ленты.

Сам процесс более трудоемкий, по сравнению с классическим наращиванием, но опытному мастеру не составит труда , в том числе 2D.

Что эффектнее смотрится: классика, 2D или 3D?

На этот вопрос, к сожалению однозначно ответить невозможно. Почему? Потому, что густота и толщина родных ресниц у всех различна. На густых ресницах классика может смотреться намного эффектнее, чем 3D-объем на редких слабых ресничках.

Если у Вас ресницы средней густоты, то для естественного эффекта подойдет классическое наращивание, для получения эффектных пушистых ресниц — , для более объемных пушистых ресниц — 3D-объем.

Наращивание ресниц классическое и 2D. В чем отличия?

1. Технология. При на 1 свою крепится 1 искусственная ресница, то есть, каждая Ваша ресничка станет длиннее, более черной и изогнутой.
   2D — двойной объем, количество Ваших ресниц увеличивается вдвое!
2. Толщина ресниц. Классика — 0,12; 0,15; 0,1мм. 2D — толщина 0,1; 0,07мм.

Наращивание ресниц 2D и 3D. В чем отличия?

Отличие состоит:

• в количестве ресниц, которые крепятся на родную ресницу;
• и в толщине ресниц.

Для 2D наращивания используются ресницы чуть толще — 0,1мм; 0,07мм, а вот для 3D наращивания ресниц используются ультратонкий материал толщиной 0,07; 0,06; 0,05мм, так как к одной родной реснице клеится три тонкие легкие реснички.
Как видите, чем больше выполняется объем (2D, 3D, 5D), тем тоньше используются реснички.

2d наращивание ресниц. Фото




Как видно на фото — количество ресничек стало намного больше, чем было изначально. За счет этого, взгляд получается более выразительный и эффектный. И обратите внимание, наращенные реснички более ровные и одной длины. Свои же, где-то длиннее, где-то короче, и имеют разное направление.

Хотите получить пушистые реснички? Звоните, пишите в Viber на номер телефона, указанный на сайте.

Мастера, занимающиеся наращиванием ресниц, владеют несколькими методиками. Одной из наиболее популярных, является классическая. Технология предполагает наклеивание одной или двух искусственных ресничек к каждой своей, родной. Такой вариант удлинения ресниц позволяет придать максимальный объем и естественную красоту. А чтобы взгляд был еще более глубоким и привлекательным, длину искусственных ворсинок подбирают индивидуально к каждой природной ресничке. В результате такого подхода, наращенная красота выглядит естественно и выразительно. Какие же особенности технологии классика?

Прежде чем приступать к работе, необходимо подготовить необходимые инструменты и материалы. В данном случае, особое внимание следует уделить выбору вида ворсинок для наращивания. От того, какими будут реснички, зависит внешний вид глаз и взгляда в целом. В продаже можно найти 4 вида ресничек для классического или поштучного наращивания:

• Из натурального волоса.
• Из шелкового сырья.
• Норковые.
• Соболиные.




Самыми лучшими, не вызывающими аллергические реакции, являются реснички из натурального волоса. Они очень легкие, позволяют создать красивый, естественный объем. Но, работать с ними довольно сложно, особенно новичку. В процессе выбора важно учитывать не только вид материала, но и изгиб, толщину и жесткость ворсинок. Как правило, все параметры указываются на упаковке. Поэтому, подобрать подходящий вариант не сложно.




Инструменты

Наращивание ресниц классика на фото, осуществляется с помощью специальных инструментов. Потребуются следующие приспособления:

• Качественный клеевой состав, не вызывающий раздражений и аллергических реакций.
• Вата, зубочистки.
• Емкость для клея.
• Обезжиривающий состав для ресниц.
• Удлиненный пинцет для удобного захватывания ресничек.




Подготовив все необходимое, можно приступать к самому процессу наращивания.




Детали технологии

Наращивание ресниц классика фото до и после начинается с подготовки ворсинок. Чтобы было удобнее, рекомендуется высыпать имеющиеся искусственные реснички на белую чистую поверхность. Так удобнее и быстрее подобрать для себя реснички нужной длины. Клеевой состав наливаем в емкость. Чтобы наращивание прошло успешно, пинцет обезжириваем специальной жидкостью.




Далее, необходимо очистить лицо от косметики, и тщательно вымыть руки с мылом. Особое внимание следует уделить глазам. Помимо умывания, веки обрабатываем обезжиривателем. Только подготовив кожный покров должным образом, можно рассчитывать на качественную фиксацию ресничек 2d. Чтобы предупредить попадание на кожный покров клея, нижнее веко следует прикрыть ватным диском.

Наращивание ресниц классика 2d начинается с расчесывания своих ресничек. Так, будет гораздо удобнее фиксировать искусственные волокна на природную основу. Чтобы нарастить ресницы, необходимо отдельно взятую волосинку обмакнуть в клее. Но, делать это нужно аккуратно, смазывая клеевым составом только кончик ворсинки. Сразу же, не дожидаясь высыхания клея, искусственную ресничку нужно зафиксировать на природной.




Делаем правильно

Уроки по наращиванию ресниц по технологии классика, рекомендуют накладывать искусственную ресницу максимально близко к веку. А чтобы соседние волоски не мешали, их следует придерживать с помощью обычной зубочистки. Для фиксации пинцетом следует слегка прижать волосинки, стараясь не пережать их.




Наращивание ресниц классика после на фото показано, что правильно приклеивать ворсинки нужно от внешней стороны к внутренней. Чтобы добиться максимальной природности, в процессе важно соблюдать направление ресничек. Оно должно быть одинаковым. После приклеивания, необходимо полежать с закрытыми глазами 10-15 минут, чтобы дать возможность клея полимеризоваться.




Если все детали и нюансы соблюдены, то результат будет радовать не менее двух недель. Конечно важна и правильная эксплуатация. Глаза нельзя тереть, тщательно умывать. Ежедневный утренний туалет нужно делать аккуратно. Отзывы девушек, регулярно делающих наращивание 2Д, 3Д уверяют, что длительная процедура, которую приходится проходить в салоне, позволяет красоваться длинными, пушистыми и объемными ресничками на протяжении довольно длительного периода.

Как происходит наращивание ресниц классика на видео, показано детально.

В завершении

Технология удлинения ресниц классика позволяет увеличить не только густоту, но и объем растительности на глазах. Мастера в салонах предлагают девушкам методику в стиле 2Д и 3Д. В чем заключается их отличие? В первом случае, реснички наращивают на самые маленькие природные ворсинки. Во втором – каждую естественную ворсинку удлиняют методом наклеивания искусственной ресницы. Как правило, 2Д применяют для девушек, у которых длинные, но редкие ресницы. 3Д – метод глобального преображения. Такую методику используют для кардинального увеличения объёма и численности волосинок.

Полезное:

фото «Классика» до и после / Mama66.ru

Классическое наращивание ресниц – самый популярный и по-прежнему модный вариант преображения своей внешности. Преимущества наращивания очевидны для каждой девушки, ведь не все могут похвастаться природной красотой, пышностью и длиной ресничек. Несмотря на популярность метода, многие не знают, в чем заключаются достоинства и недостатки классического наращивания ресниц от остальных видов и как проходит данная процедура.




Какие ресницы используют?

Искусственные ресницы бывают не только разными по длине и цвету, они различаются и материалом изготовления. Самые распространенные:

• Соболиные. Очень плотные, имеют эффект накрашенных ресниц.
• Шелковые. Блестят и смотрятся изящно.
• Норковые. Очень похожи на натуральные, тонкие, мягкие, матовые.

Что касается длины, то чаще всего классика подразумевает параметры в 7-12 мм.

В чем отличие от объемного?

Вариантов наращивания существует несколько. Поэтому те, кто решил преобразить себя подобным способом впервые, могут не знать, в чем заключается отличие классики от объемного наращивания:

• Классика – на каждый свой волосок доклеивают один искусственный.
• 2d объем – на каждый родной волосок приходится по два искусственных.


В остальном существенных отличий в наращивании нет.

Подготовка

Перед процедурой нужно обязательно смыть всю декоративную косметику. Особенное внимание стоит уделить глазам. Тушь, подводка и тени могут снизить склеивающий эффект, это приведет к тому, что волоски быстро отклеятся.

Снимать нанесенный макияж нужно специальными средствами. Подойдет тоник, молочко или лосьон для удаления косметики. Но лучший вариант – использование мицеллярной воды, с помощью которой можно удалить косметические средства полностью.

Пошаговая инструкция

Перед началом процедуры нужно подготовить весь необходимый инструментарий:

• Реснички.
• Клей для ресниц.
• Обезжиривающее средство.
• Растворитель для клея.
• Пинцет.
• Емкость для клея.
• Зубочистки.
• Увеличивающее зеркало.

Наращивание ресниц проходит в несколько этапов. В независимости от профессионализма и опыта мастера, все они должны быть строго соблюдены:

1. Обезжиривание. Необходимость данного этапа заключена в том, чтобы улучшить склеиваемость поверхностей. Мастер должен тщательно обработать родные ресницы специальным составом, захватив также часть кожи век. Обезжиривающее средство чаще всего используют в виде спрея, который наносят на ватный тампон или палочку.
2. Подбор ресничек по длине и толщине. Для этого их примеряют к глазу. Важно также учесть, что направление искусственных волосков должно полностью совпадать с направлением роста родных ресниц.
3. Накладывание на нижнее веко специальной патчи, служащей для защиты.
4. После этого начинается процесс приклеивания. Для этого небольшое количество клея выдавливают на стеклышко или другую удобную поверхность и окунают в него ресничку. Каждый волосок обмакивают до середины, а потом приклеивают к родной реснице. Расстояние от века до места приклеивания должно составлять не менее 0,5 мм и не более 1 мм.
5. После приклеивания нескольких ресничек нужно прочесать их специальной щеточкой. Также необходимо периодически обдувать глаза с помощью груши или веера.
6. Остатки и излишки клей на ресницах нужно время от времени убирать, пока клеящее вещество не схватилось. Делают это с помощью мягкого спонжа.

Клеящая смола должна меняться на новую каждые 20 минут. В противном случае клей станет густым и будет оставаться на волосках в большом количестве, что вызовет после высыхания неприятные ощущения.

Длительность процедуры

Многие опасаются, что наращивание занимает много времени и сопровождается болью. На самом деле это не так. Время длительности процедуры полностью зависит от нескольких факторов:

• профессионализм мастера;
• густота собственных ресниц;
• сложность работы.

Среднее время процедуры составляет 3 часа.

Болезненных ощущений также нет. Единственное, что может вызвать трудности, это необходимость лежать в одной позе на протяжении долгого времени.

А вот коррекция ресниц занимает немного меньше времени, чем первое наращивание. Поэтому лучше лишний раз обратиться к мастеру и подправить волоски, нежели повторно наклеивать весь ряд.

Сколько держатся ресницы?

Сегодня мастера обещают ношение ресниц максимально длительное время – до 3 месяцев. Но это будет возможно только при условии правильного ухода за ними:

• первые несколько дней их нельзя мочить;
• нужно несколько раз в день расчесывать волоски специальной щеточкой;
• лучше отказаться от использования туши, подводок и теней;
• продлить службу поможет только регулярная коррекция.

Если не соблюдать все вышеперечисленное, то срок, в течение которого вы будете обладать красивыми глазками, снизится до 4 (максимум 6) недель.

Последствия и мифы

Несмотря на то что современная косметология успела добиться многого, в процедуре наращивания ресниц существуют некоторые предубеждения, которые можно смело назвать мифами:

• Выпадение ресничек. Ресницы, конечно, выпадут. Ведь так и должно быть. Жизненный цикл волосков составляет всего 200 дней, и это с учетом правильного ухода за ними и наличия витаминов в организме. Тот факт, что после съема искусственных ресниц свои кажутся блеклыми, говорит лишь об обмане зрения. Ведь вы на протяжении нескольких недель видели в зеркале совершенно иные объемы и длину, ради которых и делали наращивание.
• Клей очень вреден. Если купить тюбик дешевого клея в ближайшем магазине, который подходит для склеивания любых поверхностей, то вред будет колоссальным. Но если наращивать реснички в условиях салона, где применяются только проверенные средства, то никакого вреда от клея не будет. За исключением индивидуальной непереносимости вещества.
• Собственные ресницы сломаются. Это можно назвать правдой, если работу делал не профессиональный мастер, который не смог подобрать нужную длину и провести процедуру по всем правилам.
• Свои ресницы снимутся вместе с накладными. В этом убеждении тоже имеется доля правды. Если проводить снятие самостоятельно, то риск отрыва родных волосков действительно есть. Поэтому работу должен выполнять мастер с помощью специальных средств для растворения клея.

Никаких негативных последствий после наращивания у опытного мастера не будет.

Преимущества и недостатки

Нарощенные ресницы «Классика» имеют свои достоинства и недостатки. Причем последних гораздо меньше.

Преимущества:

• Долгий срок ношения при правильном уходе.
• Выпадение ресниц совершенно незаметно, так как они отходят по одному волоску.
• Естественный вид.
• Отсутствие необходимости применения декоративной косметики для глаз.

К недостаткам же можно отнести только высокую стоимость процедуры.

Несмотря на то что многие считают наращивание ресниц вредным, поклонников у данной процедуры с каждым днем становится все больше. Ведь это позволяет женщинам не только выглядеть красиво, но и освобождает от ежедневного нанесения туши.

Автор: Жанна Карпунина,
специально для Mama66.ru

Полезное видео про классическое наращивание ресниц

Автор

Автор портала Mama66.ru

#постыдлялешмейкеров Instagram posts — Gramhir.com

Недавно листала тик-ток в поисках идей для контента и наткнулась на видео одной девушки. Она рассказывала о распространённой ситуации, когда клиент в ответ на ваше предложение о сотрудничестве выдаёт сухое «Я подумаю». Хотя казалось, что дело идет к покупке или заказу, но после того, как цена озвучена, фрилансер слышит «Я подумаю»😬 Вернёмся к девушке из тик -тока. В своем видео она предложила на такие сообщения отвечать уточняющим вопросом к клиенту, чтобы узнать, что именно его не устраивает и предложить заказчику свое решение проблемы🤓 Вполне вероятно, что я плохой маркетолог и кто-то с моим мнением не согласится, но я НЕ поддерживаю такой подход. Объясню почему. В 90 % случаев, когда клиент отвечает вам «Я подумаю», это значит, что его не устраивает цена. Ведь категорически отказываться как-то неудобно, поэтому большинство заворачивают свой отказ в лаконичную, вежливую фразу. Что я, как исполнитель, могу предложить клиенту в такой ситуации? К сожалению, ничего💔 Потому что цены у меня для всех одинаковые и выполнять работу за меньшую стоимость я не буду. Когда потенциальный клиент в ответ на деликатный отказ получает назойливость в виде уточняющих вопросов, это только отталкивает. Я могу судить об этом даже по своему опыту, лично меня очень раздражает «впаривание», к которому обычно прибегают консультанты в обычных или онлайн магазинах. Именно это я называю агрессивным маркетингом, когда товар хотят продать во что бы то ни стало. Редко это приводит к положительному результату, т.к. ценность продукта в глазах покупателя резко снижается. Вывод такой: если для клиента ваш товар или услуга дорогие, вряд ли он изменит свое мнение под натиском уговоров🤷‍♀️Поэтому не стоит тратить на это ни свое время, ни время заказчика. Клиент после отказа идет искать специалиста подешевле, а вы клиентов, которые готовы платить вашу цену. Все. А вы согласны с моим мнением или считаете, что без уточняющих вопросов в маркетинге никуда? Делитесь в комментариях👇🤗

Фоторецепторная сенсорная ресничка: прохождение ресничных ворот

клеток. 2015 Dec; 4 (4): 674–686.

Ганг Донг, академический редактор и Уильям Цанг, академический редактор

Отделение офтальмологии, Медицинская школа UMASS, Вустер, Массачусетс 01605, США; Электронная почта: [email protected]; Тел .: + 1-508-856-8991; Факс: + 1-508-856-1552.

Поступило 14 сентября 2015 г .; Принято 9 октября 2015 г.

Авторские права © 2015, авторы; лицензиат MDPI, Базель, Швейцария. Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Реснички представляют собой антенно-подобные расширения плазматической мембраны, обнаруженные почти во всех типах клеток. В сетчатке глаза фоторецепторы развивают уникальные сенсорные реснички. Мало что было известно о механизмах, лежащих в основе образования и функции ресничек фоторецепторов, в основном из-за технических ограничений и специфических структурных и функциональных модификаций, которые не могут быть смоделированы in vitro . Благодаря недавним достижениям в методах микроскопии и молекулярных и биохимических подходов, мы теперь начинаем понимать молекулярные основы цилиарной архитектуры фоторецепторов, функции ресничек и их участие в заболеваниях человека.Здесь я расскажу об исследованиях, которые открыли новые знания о том, как реснички фоторецепторов регулируют свою идентичность и функцию, справляясь с высокими требованиями к метаболизму и трафику, связанными с обработкой светового сигнала.

Ключевые слова: реснички, жгутики, цилиопатии, сетчатка, ретинопатии, переходная зона, трафик белков

1. Введение

Обнаружение и обработка света определяют большую часть наших воспоминаний об окружающем мире. Глаз — наиболее уязвимая часть мозга, поддающаяся нескольким манипуляциям, которые позволяют нам понять более глубокие тайны мозга.Тем не менее, мы относительно мало знаем о механизмах, с помощью которых мы обнаруживаем и обрабатываем световой сигнал. Фактически, гораздо большая часть нашей центральной нервной системы (почти половина коры головного мозга) предназначена для обработки изображений, чем любая другая система [1]. Обнаружение света инициируется, когда световой сигнал попадает в переднюю часть глаза и достигает сетчатки в задней части глаза. Здесь свет преобразуется в химический сигнал, который передается через нейроны вторичного порядка к ганглиозным клеткам сетчатки.Аксоны ганглиозных клеток образуют зрительный нерв, который передает сигнал в зрительную кору головного мозга. Как первые реагирующие на свет фоторецепторы были предметом нескольких исследований, направленных на понимание режима обнаружения и обработки света. В последние годы был достигнут большой прогресс в понимании того, как фоторецепторы развивают уникальные структурные модификации для обработки и усиления светового сигнала. В этом обзоре я остановлюсь на одной из таких модификаций, а именно на развитии и поддержании сенсорного отсека фоторецепторов, называемого внешним сегментом (ОС).

2. Сетчатка

Сетчатка представляет собой ткань толщиной ~ 0,5 мм, расположенную в задней части глаза и участвует в первых этапах светового ощущения. Это высокоорганизованная ткань, состоящая из шести основных типов нейронов и одного типа глиальных клеток, разделенных двумя синаптическими слоями, которые называются внешним и внутренним плексиформными слоями (А). Среди нейронов фоторецепторы являются наиболее распространенными типами клеток и образуют самый внешний слой сетчатки [1,2]. Кончики фоторецепторов физически наиболее близки к пигментному эпителию сетчатки (РПЭ), который образует самый внешний гемато-сетчатый барьер, а также участвует в зрительном цикле и периодическом поддержании сенсорного компартмента фоторецептора.Хориоидальные кровеносные сосуды, покрывающие РПЭ, поставляют питательные вещества к фоторецепторам.

Схематическое изображение в упрощенном виде сетчатки млекопитающих ( A ) и палочко-конусных фоторецепторов ( B ). Увеличенный вид ТЗ показан справа. РПЭ: пигментный эпителий сетчатки; ONL: внешний ядерный слой; OPL: внешний плексиформный слой; INL: внутренний ядерный слой; IPL: внутренний плексиформный слой; GCL: слой ганглиозных клеток; BB: базальное тело; М: митохондрии; G: Гольджи.

3.Фоторецепторы

Фоторецепторы — это сильно поляризованные и метаболически активные нейроны с отдельным отделом, называемым ОС, в котором размещается механизм фототрансдукции. OS представляет собой модифицированную сенсорную ресничку, которая содержит мембранные диски, расположенные в виде стопки монет (B). Эта элегантно сложная структура лишена какого-либо механизма трансляции белков; следовательно, компоненты, которые населяют OS, синтезируются во внутреннем сегменте (IS), который содержит все необходимые органеллы, включая эндоплазматический ретикулум (ER), Golgi и митохондрии, и транспортируются к дистальному OS.Дистальнее внутреннего сегмента находится тело клетки, содержащее ядро ​​и синаптические окончания, которые простираются во внешний плексиформный слой, где они синапсируют с нейронами второго порядка, называемыми биполярными клетками [3].

4. Фоторецепторная сенсорная (или первичная) ресничка

Первичные реснички представляют собой продолжения апикальной плазматической мембраны на основе микротрубочек и помогают в концентрации специфических сигнальных рецепторов, участвующих в модуляции сигнальных событий, связанных с развитием, таких как звуковая передача сигналов ежа, передача сигналов Wnt и тромбоцитов. производная сигнализация фактора роста.Реснички также участвуют в модуляции сигнальных каскадов, участвующих в сенсорном восприятии, таких как хемосенсорное восприятие, обоняние, механочувствительность и фоторецепция (тема этой статьи) [4,5,6,7,8,9]. В соответствии с широко распространенным вовлечением функции ресничек, белки ресничек связаны с несколькими заболеваниями человека, такими как кистозная болезнь почек, дегенерация сетчатки и плейотропные генетические заболевания, синдром Барде-Бидля (BBS), синдром Жубера, синдром Сеньора-Локена, синдром Ашера и Синдром Меккеля-Грубера [10,11,12,13,14].

Реснички фоторецепторов развивают уникальные характеристики, которые помогают им адаптироваться к высоким требованиям обнаружения световых сигналов на протяжении всей жизни организма. Элегантные ультраструктурные исследования, проведенные Sjöstrand, De Robertis, Tokuyasu и Yamada, идентифицировали мембранные диски в ОС палочковидных и колбочковых фоторецепторов [15,16,17,18,19]. Фактически, ресничка первоначально была идентифицирована между внутренним и внешним сегментами как единственное соединение между этими компонентами. Таким образом, эта структура получила название соединительной реснички [15,16,17,18,19].Ресничный отсек фоторецепторов загружен белками, участвующими в каскаде фототрансдукции, такими как опсин зрительного пигмента (рецептор, связанный с G-белком), трансдуцин, аррестин, цГМФ-фосфодиэстеразы и канал, управляемый циклическими нуклеотидами (CNG). Кроме того, ОС фоторецептора предпочтительно обогащены рецептором фактора роста инсулина, фосфоинозитид-3-киназой (PI3K) и AKT (AK-трансформирующая; серин-треониновая протеинкиназа B) сигнальными компонентами [20] и омега-3 докозагексаеновой кислотой (DHA). , который, как полагают, обеспечивает текучесть родопсина в мембранах дисков.В свою очередь, такие функции регулируют каскад быстрой фототрансдукции, который возникает при обнаружении света [21,22,23].

Реснички фоторецепторов также обладают уникальными функциональными свойствами. Это связано с тем, что фототрансдукция осуществляется в различных компартментах ресничек фоторецепторов и задействует как мембраны диска, так и плазматическую мембрану ресничек. Кроме того, каскад фототрансдукции регулируется перекрывающим РПЭ. Следовательно, существует непрерывный поток информации и молекул внутри и из реснички.

5. Фоторецептор Цилиогенез

Цилиогенез (или образование ресничек) начинается, когда материнская центриоль (также называемая базальным тельцем), состоящая из массива из девяти триплетных микротрубочек, стыкуется с апикальной плазматической мембраной и зарождается в расширении цитоскелета из дублетных микротрубочек, называемого аксонемой. [24,25,26,27,28]. Этот сложный процесс регулируется Intraflagellar Transport (IFT). Впервые идентифицированный в жгутиках Chlamydomonas , IFT определяется как двунаправленная транспортировка груза от основания ресничек к кончику (антероградный; положительный конец направлен) и обратно к основанию (ретроградный; направленный отрицательный конец).Плюс и минус концы относятся к растущим и зарождающимся концам микротрубочек из базальных тел, соответственно [29]. IFT приводится в действие молекулярными моторами кинезина-II (антероградный) и цитоплазматического динеина 2 (ретроградный) и делится на два основных комплекса: IFT-A и IFTB. В то время как комплекс IFT-B облегчает антероградную перевозку груза, IFT-A преимущественно участвует в ретроградной торговле [29,30] ().

Схематическое изображение морфологии и основных компонентов первичной реснички.Антероградный транспорт опосредуется мотором Kinesin-II и комплексом IFT-B, тогда как ретроградный транспорт регулируется IFT-A и моторной субъединицей динеина. ТЗ: переходная зона; BB: базальное тело; C: дочерняя центриоль; G: Гольджи; N: ядро; М: митохондрии.

Первые доказательства участия IFT в цилиогенезе фоторецепторов и переносе ресничек были получены при анализе гипоморфного мутанта мыши Ift88 ^orpk , который несет мутацию в IFT88, субъединице IFT.Было обнаружено, что у этих мышей дефектное развитие ОС без признаков разрастания ресничек [31]. Более поздние исследования также идентифицировали мутант рыбок данио ift88 , названный ovl , который не обнаруживает образования стержневых ресничек. Более поздние исследования оценили роль др. Субъединиц IFT в цилиогенезе фоторецепторов [32]. Некоторые белки IFT, включая IFT57, IFT52, IFT140 и IFT20, локализованы в ресничках фоторецепторов [33,34,35,36,37]. Более того, было обнаружено, что удаление IFT20 или IFT140 приводит к неправильной локализации опсина и дегенерации фоторецепторов.Интересно, что IFT20 является единственной субъединицей IFT, которая также обнаруживается в Golgi [38]. Было показано, что в то время как делеция Ift20 приводит к накоплению опсина вокруг Golgi, делеция Ift140 приводит к преимущественному перемещению родопсина к плазматической мембране внутреннего сегмента, а не к OS. Поскольку IFT140 принадлежит к IFT-A, тогда как IFT20 принадлежит к IFT-B, эти исследования указывают на различные роли двух комплексов IFT в поддержании функции ресничек в фоторецепторах [38,39].Дополнительные доказательства участия IFT в цилиогенезе фоторецепторов были получены из исследований, изучающих участие IFT-моторов Kinesin-II и субъединиц динеина. Условная делеция субъединицы кинезина-II KIF3A нарушает образование ОС и транспорт опсина. Недавно было обнаружено, что эмбриональная делеция Kif3a ^{— / —} у мышей отменяет удлинение TZ от базальных тел [40,41].

6. Цилиарный трафик фоторецепторов

Для поддержания идентичности ОС используются строго контролируемые механизмы, регулирующие направленный транспорт белков.Поскольку родопсин незаменим для формирования и функционирования ОС, незаконный оборот родопсина изучен очень подробно. Работа Dusanka Deretic, Alecia Gross и др. Выявила консервативные механизмы доставки родопсина к основанию ресничек, включая участие малых GTPases ARF4, RAB11 и RAB8A и их эффекторов [22,42,43,44,45]. Учитывая массивный направленный транспорт OS в фоторецепторах, было обнаружено, что OS действительно является местом назначения по умолчанию для мембранных белков в фоторецепторах [46].Тем не менее, определенные механизмы используются некоторыми мембранными белками OS для нацеливания на реснички. Канал CNG специфически локализуется на плазматической мембране ресничек с помощью механизма, опосредованного ankyrin-G [47]. Более того, периферин-2 принимает нетрадиционный секреторный путь с участием субъединиц коатомера COPII для выхода из ER и передачи в OS [48,49]. Эти исследования также предполагают, что образование и обновление ОС требуют как традиционных, так и нетрадиционных способов доставки белка. Работа лаборатории Джо Бешарса показала, что родопсин, гуанилатциклаза и белки-шапероны являются потенциальным грузом для IFT-опосредованной доставки в ОС [50].

Помимо IFT, в ресничках были идентифицированы два др. Белковых комплекса ресничек. Один из них называется BBSome (белковый комплекс BBS) [51,52]. Мутации в компонентах BBSome связаны с мультисистемными нарушениями, включая дегенерацию сетчатки. Работа с использованием нескольких модельных систем показала критическую роль BBSome в регуляции ретроградного перемещения ресничек. Хотя прямое участие ретроградного транспорта белков OS, опосредованного двигателем dynein, отсутствует, было обнаружено, что нарушение цитоплазматического dynein-2 у рыбок данио влияет на расширение OS, но не изменяет транспортировку опсина или аррестина.Три компонента каскада фототрансдукции, аррестин, трансдуцин и регенерин, передаются двунаправленно между внутренним и внешним сегментами в палочках светозависимым образом [53,54,55]. Такая транслокация способствует эффективному регулированию каскада фототрансдукции путем модуляции молекулы опсина. Было обнаружено, что аррестин может диффундировать через TZ внутрь и из OS [56,57]. Однако молекулярные механизмы, лежащие в основе такого транспорта, неясны. Более того, это свойство двунаправленного светозависимого движения белков, по-видимому, очень специфично для ресничек фоторецепторов.Недавний отчет показал, что родопсин и периферин-2 также предпочтительно передаются в фоторецепторах светозависимым образом. Такой трафик, вероятно, связан с изменяющимся составом дисков ОС в зависимости от времени суток [58].

Другой белковый комплекс состоит из белков, мутировавших при синдромальной и несиндромальной формах кистозной болезни почек нефронофтиз (НПХП) [59]. Различные белковые комплексы NPHP локализованы в разных доменах ресничек [60].В фоторецепторах есть по крайней мере два белковых комплекса NPHP, которые связаны с белком цилиарной болезни сетчатки RPGR (регулятор GTPase пигментного ретинита) [61,62]. Их точная роль в регуляции функции ресничек фоторецепторов еще предстоит установить.

7. Фоторецептор Цилиарные ворота

Область между базальным телом и основанием OS называется «цилиарными воротами ». Эта область также называется переходной зоной (TZ), потому что микротрубочки аксонемы переходят из триплетной в дублетную конформацию [63,64].

Tokuyasu и Yamada отметили, что дуплетные удлинения микротрубочек аксонемы развивают связи с соответствующей цилиарной мембраной, которая кажется более плотной на электронных микрофотографиях [19]. Более поздние исследования в Chlamydomonas reinhardtii и у др. Видов идентифицировали эти поперечно-сшивающие структуры как Y-линкеры в ресничках и жгутиках [65,66]. Эти структуры, помимо обеспечения структурной поддержки, также, как полагают, действуют как барьеры для аномального смешивания цитозольных и цилиарных компонентов.

Дополнительные структуры, называемые переходными волокнами, наблюдаются в области, по существу, между базальным телом и TZ (). Во время цилиогенеза материнская центриоль развивает субдистальные и дистальные придатки. Дистальные отростки способствуют прикреплению материнской центриоли к плазматической мембране и становятся переходными волокнами в форме вертушки или крыловыми пластинами. Белки, в том числе OFD1, CCDC123 и CEP164, локализуются в этих структурах и не только участвуют в формировании листов крыла, но и мутируют при цилиарных заболеваниях человека.На основании своего местоположения, переходные волокна, как полагают, участвуют в стыковке пузырьков, предназначенных для ресничек, поскольку они, вероятно, обеспечивают физический блок для входа пузырьков внутрь ресничек [64]. Аналогичная структура фоторецепторов лягушек и грызунов была описана как мембрана перицилиарного гребня, которая содержит высокую плотность везикул, содержащих родопсин и IFT [35,44,67]. Считается, что эти структуры также состоят из белков синдрома Ушера [33]. Основываясь на функции составляющих белков, можно предположить, что переходные волокна участвуют в формировании и функционировании ресничек.

Схематическое изображение фоторецептора TZ, изображающее идентификацию комплексов IFT и белков заболевания сетчатки RPGR и белков комплекса NPHP. ТЗ: переходная зона; BB: базальное тело; DC: дочерняя центриоль; М: митохондрии; ОС: внешний сегмент.

8. Прохождение ворот ресничек

Считается, что до достижения OS белки проходят через узкую TZ (). Функциональная значимость TZ в фоторецепторах была впервые отмечена Spencer et al . (1988) [68].Они обнаружили, что слияние внешнего и внутреннего сегментов фоторецепторов лягушек приводит к перераспределению опсина во внутренний сегмент. Эти результаты показали, что родопсин подвижен в мембране OS и что существует диффузионный барьер, ограничивающий обратный поток опсина. TZ содержит отчетливые Y-образные линкеры, которые образуют цилиарное ожерелье вокруг микротрубочек и цилиарной мембраны. Состав ТЗ до недавнего времени был неуловим. Джордж Уитман и его коллеги показали, что CEP290 / NPHP6, который мутирован при цилиопатиях сетчатки человека, локализуется в Y-звеньях жгутиков Chlamydomonas [62,65,69,70,71,72].Замечательная работа групп Michel Leroux, Jeremy Reiter и Andrew Peterson обнаружила присутствие мультипротеиновых комплексов в TZ у млекопитающих и ресничек Caenorhabditis elegans . К ним относятся белки комплекса тектонина, NPHP, ассоциированные с синдромом Жубера и синдромом Меккеля-Грубера белки [73,74,75].

Возможно, что TZ-ассоциированные белки взаимодействуют с белками IFT, чтобы регулировать вход и выход мембранных белков и липидов внутри ресничек.Было обнаружено, что B9D2 / MKS10 взаимодействует с IFT-компонентом Fleer. Более того, белок цилиопатии сетчатки Lebercilin (LCA5) связывается с аппаратом IFT, чтобы модулировать перенос фоторецепторного опсина [76,77]. Сниженные количества белков IFT были также обнаружены в ресничках фоторецепторов мышей с целевым удалением гена Nphp1 , что приводит к неправильному перемещению опсина и дегенерации сетчатки [78].

Перенос растворимых белков через TZ: Хотя существует достаточно доказательств роли TZ в регуляции мембранного белкового состава ресничек, его участие в качестве барьера для массивной транслокации растворимых белков в зависимости от света такие как аррестин, трансдуцин и рекуперин путем диффузии изучены недостаточно.Интересно, что было обнаружено, что эктопическая экспрессия фотоактивируемого GFP приводит к его свободной диффузии через реснички и уравновешиванию между внутренним сегментом и OS фоторецепторов [79]. Чтобы проверить влияние размера белка на его доступ к ОС, та же группа использовала тандемные слитые с GFP белки с увеличивающимся числом фрагментов GFP. Они обнаружили, что белки до ~ 81 кДа могут свободно диффундировать в ОС, хотя и в относительно меньшей степени, чем диффузия одного фрагмента белка GFP [80].Однако работа Kristen Verhey с коллегами с использованием микроинъекций флуоресцентных декстранов разной молекулярной массы показала наличие барьера исключения размера, который ограничивает проникновение более крупных белков ~ 67 кДа в реснички [81]. Еще одно исследование Inoue et al., В котором они использовали рапамицин для улавливания растворимых белков, которые диффундируют в реснички, предположило, что TZ действует как молекулярное сито, чтобы ограничивать проникновение белков в зависимости от размера [82]. Остается установить, существует ли барьер исключения размера, который действует исключительно на основе размера или трехмерной конформации белков.Однако следует отметить, что растворимые белки, которые проникают в реснички, могут быть связаны с другими белками как часть функционального комплекса. Следовательно, исследования с использованием эндогенных белков в их нативной конформации необходимы для определения наличия барьера в TZ для растворимых белков. Более того, нельзя исключить специфические различия в регуляции барьера между клетками. Это особенно важно в случае фоторецепторов, которые развивают мембранные диски, которые могут ограничивать движение растворимых белков внутри ОС.

Также было высказано предположение, что перицилиарная область реснички аналогична комплексу ядерных пор. Нуклеопорины, компоненты комплекса ядерных пор, регулируют проникновение растворимых белков в реснички [81]. Недавнее исследование показало, что потеря связанного с TZ белка заболевания сетчатки RPGR приводит к меньшим изменениям в составе мембранных белков, но к значительным нарушениям в распределении растворимых белков с более высокой молекулярной массой в OS [37].Учитывая ассоциацию RPGR с отдельными комплексами NPHP в сетчатке, возможно, что некоторые белковые комплексы TZ регулируют проникновение и удержание растворимых белков в OS. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы понять молекулярную основу таких ворот и их участие в заболеваниях человека.

9. Заключительные замечания

Работа, описанная выше, помещает первичные реснички в центр множества функций сетчатки, особенно фоторецепторов. Мы узнали, что реснички фоторецепторов обладают как общими, так и уникальными особенностями, которые отвечают за метаболически активные процессы этих типов клеток.Аспект, который мы не обсуждали в этой статье, — это участие ресничек в развитии сетчатки. Было показано, что нарушение работы нескольких генов ресничек приводит к нарушению развития глаз, что обычно приводит к микрофтальмии. Хорошо известно, что некоторые IFT и цилиарные белки действуют во время деления клеток и в ориентации борозды дробления. Следовательно, выяснение роли ресничек, ресничных белков и ассоциированных сигнальных путей во время развития сетчатки предоставит новое понимание их более широкого участия в развитии и болезнях развития.

Благодарности

Я хотел бы поблагодарить г-жу Маниша Ананд за помощь в подготовке рисунков. Работа в моей лаборатории поддерживается грантами Национального института глазных болезней, Фонда борьбы со слепотой, Массачусетского фонда исследования глаз Lions и Центра клинических и трансляционных наук UMASS. Приношу свои извинения тем авторам, чьи работы не удалось процитировать в этой статье из-за ограничений по объему и объему.

Сокращения

OS: внешний сегмент; ТЗ: переходная зона; НПХП: нефронофтиз; RPGR: регулятор ГТФазы пигментного ретинита; BB: базальное тело; GFP: зеленый флуоресцентный белок; IFT: внутрижгутиковый транспорт.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Список литературы

1. Кандел Э. Р. Принципы неврологии. 5-е изд. Макгроу-Хилл; Нью-Йорк, Нью-Йорк, США: 2013. стр. 577. [Google Scholar] 2. Грей Х., Пик Т.П., Хоуден Р. Анатомия, описательная и хирургическая. Классическое коллекционное изд. Пресса Фолл Ривер; Нью-Йорк, Нью-Йорк, США: 1987. с. 1257. [Google Scholar] 3. Лэмб Т.Д. Эволюция фототрансдукции, фоторецепторов позвоночных и сетчатки. Прог. Ретин. Eye Res.2013; 36: 52–119. DOI: 10.1016 / j.preteyeres.2013.06.001. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 4. Пазур Г.Дж., Уитман Г.Б. Первичная ресничка позвоночных — органелла органов чувств. Curr. Opin. Cell Biol. 2003. 15: 105–110. DOI: 10.1016 / S0955-0674 (02) 00012-1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Бербари Н.Ф., О’Коннор А.К., Хейкрафт С.Дж., Йодер Б.К. Первичная ресничка как сложный сигнальный центр. Curr. Биол. 2009; 19: R526 – R535. DOI: 10.1016 / j.cub.2009.05.025. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6.Eggenschwiler J.T., Anderson K.V. Реснички и сигнализация развития. Анну. Rev. Cell Dev. Биол. 2007. 23: 345–373. DOI: 10.1146 / annurev.cellbio.23.0.123249. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Сингла В., Рейтер Дж. Ф. Первичная ресничка как антенна клетки: передача сигналов сенсорной органелле. Наука. 2006; 313: 629–633. DOI: 10.1126 / science.1124534. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. McEwen D.P., Koenekoop R.K., Khanna H., Jenkins P.M., Lopez I., Swaroop A., Martens J.R.Гипоморфные мутации cep290 / nphp6 приводят к аносмии, вызванной избирательной потерей g белков в ресничках обонятельных сенсорных нейронов. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2007; 104: 15917–15922. DOI: 10.1073 / pnas.0704140104. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Педерсен Л. Б., Веланд И. Р., Шредер Дж. М., Кристенсен С. Т. Сборка первичных ресничек. Dev. Дин. 2008; 237: 1993–2006. DOI: 10.1002 / dvdy.21521. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Хильдебрандт Ф., Отто Э. Реснички и центросомы: объединяющая патогенная концепция кистозной болезни почек? Nat.Преподобный Жене. 2005; 6: 928–940. DOI: 10,1038 / NRG1727. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Флигауф М., Бенцинг Т., Омран Х. Когда реснички портятся: дефекты ресничек и цилиопатии. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2007; 8: 880–893. DOI: 10,1038 / nrm2278. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Шостранд Ф.С. Ультраструктура внутренних сегментов стержней сетчатки глаза морской свинки при электронной микроскопии. J. Cell. Physiol. 1953; 42: 45–70. DOI: 10.1002 / jcp.1030420104. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18.Шостранд Ф.С. Ультраструктура наружных сегментов палочек и колбочек глаза, обнаруженная с помощью электронного микроскопа. J. Cell. Physiol. 1953; 42: 15–44. DOI: 10.1002 / jcp.1030420103. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Токуясу К., Ямада Э. Тонкая структура сетчатки изучается с помощью электронного микроскопа. IV. Морфогенез наружных сегментов палочек сетчатки. J. Biophys. Biochem. Цитол. 1959; 6: 225–230. DOI: 10.1083 / jcb.6.2.225. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20.Раджала А., Дигхе Р., Агбага М.П., ​​Андерсон Р.Э., Раджала Р.В. Передача сигналов рецептора инсулина в колбочках. J. Biol. Chem. 2013; 288: 19503–19515. DOI: 10.1074 / jbc.M113.469064. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Besharse J.C. Сетчатка: модель для клеточно-биологических исследований Часть I. Академическая; Нью-Йорк, Нью-Йорк, США: 1986. С. 297–352. [Google Scholar] 22. Ван Дж., Деретич Д. Молекулярные комплексы, которые направляют транспорт родопсина к первичным ресничкам. Прог. Ретин. Eye Res. 2014; 38: 1–19. DOI: 10.1016 / j.preteyeres.2013.08.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Авелдано М.И., Базан Н.Г. Молекулярные формы фосфатидилхолина, -этаноламина, -серина и -инозита в микросомальных и фоторецепторных мембранах сетчатки быка. J. Lipid Res. 1983; 24: 620–627. [PubMed] [Google Scholar] 24. Докси С. Переоценка функции центросомы. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2001; 2: 688–698. DOI: 10,1038 / 35089575. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. Басто Р., Лау Дж., Виноградова Т., Гардиол А., Вудс К.Г., Ходжаков А., Рафф Дж. У. Летит без центриолей. Клетка. 2006; 125: 1375–1386. DOI: 10.1016 / j.cell.2006.05.025. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26. Беттанкур-Диас М., Родригес-Мартинс А., Карпентер Л., Рипарбелли М., Леманн Л., Гатт М.К., Кармо Н., Баллу Ф., Каллайни Г., Гловер Д.М. Sak / plk4 необходим для удвоения центриолей и развития жгутиков. Curr. Биол. 2005; 15: 2199–2207. DOI: 10.1016 / j.cub.2005.11.042. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28. Гердес Дж. М., Дэвис Э.Э., Кацанис Н. Первичная ресничка позвоночных в развитии, гомеостазе и болезни. Клетка. 2009; 137: 32–45. DOI: 10.1016 / j.cell.2009.03.023. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Розенбаум Дж. Внутриглажечный транспорт. Curr. Биол. 2002; 12: R125. DOI: 10.1016 / S0960-9822 (02) 00703-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Розенбаум Дж. Л., Витман Г. Б. Внутрилагеллярный транспорт. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2002; 3: 813–825. DOI: 10,1038 / NRM952. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Пазур Г.J., Baker S.A., Deane J.A., Cole D.G., Dickert B.L., Rosenbaum J.L., Witman G.B., Besharse J.C. Внутрилагеллярный транспортный белок ift88 необходим для сборки и поддержания фоторецепторов позвоночных. J. Cell Biol. 2002. 157: 103–113. DOI: 10.1083 / jcb.200107108. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Цуджикава М., Малики Дж. Гены внутриглажеллярного транспорта необходимы для дифференциации и выживания сенсорных нейронов позвоночных. Нейрон. 2004. 42: 703–716. DOI: 10.1016 / S0896-6273 (04) 00268-5.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Ропман Р., Вольфрум У. Белковые сети и комплексы в ресничках фоторецепторов. Подъячейка. Biochem. 2007. 43: 209–235. [PubMed] [Google Scholar] 34. Sedmak T., Sehn E., Wolfrum U. Иммуноэлектронная микроскопия транспорта везикул к первичным ресничкам фоторецепторных клеток. Методы Cell Biol. 2009. 94: 259–272. [PubMed] [Google Scholar] 35. Седмак Т., Вольфрум Ю. Транспортные белки внутри жгутика в цилиогенезе фоторецепторных клеток. Биол. Клетка. 2011; 103: 449–466. DOI: 10.1042 / BC20110034. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Лю К., Тан Г., Левенкова Н., Ли Т., Пью Э. Н., младший, Ракс Дж. Дж., Спайчер Д. В., Пирс Э. Протеом комплекса сенсорных ресничек фоторецепторов мыши. Мол. Клетка. Proteom. 2007. 6: 1299–1317. DOI: 10.1074 / mcp.M700054-MCP200. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Рао К.Н., Ли Л., Ананд М., Ханна Х. Удаление протеина цилиопатии сетчатки rpgr приводит к изменению состава ресничек фоторецепторов. Sci. Отчет 2015; 5: 11137. DOI: 10.1038 / srep11137. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Фоллит Дж. А., Тафт Р. А., Фогарти К. Э., Пазур Г. Дж. Внутрилагеллярный транспортный белок ift20 связан с комплексом Гольджи и необходим для сборки ресничек. Мол. Биол. Клетка. 2006; 17: 3781–3792. DOI: 10.1091 / mbc.E06-02-0133. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39. Кроуз Дж. А., Лопес В. С., Санагустин Дж. Т., Киди Б. Т., Уильямс Д. С., Пазур Г. Дж. Отдельные функции для ift140 и ift20 в транспорте опсина.Цитоскелет. (Хобокен) 2014; 71: 302–310. DOI: 10,1002 / см. 21173. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Jiang L., Wei Y., Ronquillo C.C., Marc R.E., Yoder B.K., Frederick J.M., Baehr W. Гетеротримерный кинезин-2 (kif3) опосредует переходную зону и образование аксонем фоторецепторов мыши. J. Biol. Chem. 2015; 290: 12765–12778. DOI: 10.1074 / jbc.M115.638437. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Маршалек Дж. Р., Лю X., Робертс Э. А., Чуй Д., Март Дж. Д., Уильямс Д.С., Гольдштейн Л. Генетические доказательства избирательного транспорта опсина и аррестина кинезином-II в фоторецепторах млекопитающих. Клетка. 2000. 102: 175–187. DOI: 10.1016 / S0092-8674 (00) 00023-4. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Холлингсворт Т.Дж., Гросс А.К. Дефектный оборот родопсина и его роль в дегенерации сетчатки. Int. Rev. Cell Mol. Биол. 2012; 293: 1–44. [PubMed] [Google Scholar] 43. Мазелова Дж., Астуто-Гриббл Л., Иноуэ Х., Там Б. М., Шонтайх Э., Прекерис Р., Мориц О. Л., Рандаццо П.A., Deretic D. Мотив нацеливания на реснички vxpx направляет сборку модуля трафика через arf4. EMBO J. 2009; 28: 183–192. DOI: 10.1038 / emboj.2008.267. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Papermaster D.S., Schneider B.G., Besharse J.C. Везикулярный транспорт вновь синтезированного опсина от аппарата Гольджи к внешнему сегменту стержня. Ультраструктурные иммуноцитохимические и авторадиографические доказательства сетчатки xenopus. Расследование. Офтальмол. Vis. Sci. 1985; 26: 1386–1404. [PubMed] [Google Scholar] 45.Рао К.Н., Ханна Х. Роль малых gtpases в транспорте поляризованных пузырьков к первичным ресничкам. Res. Rep. Biol. 2015; 6: 17–24. [Google Scholar] 46. Бейкер С.А., Хэри М., Ю П., Госпе С.М., 3-е, Скиба Н.П., Нокс Б.Е., Аршавский В.Ю. Внешний сегмент по умолчанию служит местом назначения для транспортировки мембранных белков в фоторецепторы. J. Cell Biol. 2008. 183: 485–498. DOI: 10.1083 / jcb.200806009. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Кижатил К., Бейкер С.А., Аршавский В.Ю., Беннетт В.Ankyrin-g способствует транспорту циклических нуклеотид-управляемых каналов к сенсорным ресничкам палочковидных фоторецепторов. Наука. 2009; 323: 1614–1617. DOI: 10.1126 / science.1169789. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 48. Чакраборти Д., Конли С.М., Штук М.В., Нааш М.И. Различия в перемещении, сборке и функционировании патронов стержней по сравнению со стержнями : выводы из исследований c150s-rds. Гм. Мол. Genet. 2010; 19: 4799–4812. DOI: 10,1093 / hmg / ddq410. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49.Tian G., Ropelewski P., Nemet I., Lee R., Lodowski K.H., Imanishi Y. Нетрадиционный секреторный путь опосредует нацеливание на реснички периферинов / rds. J. Neurosci. 2014; 34: 992–1006. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.3437-13.2014. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Bhowmick R., Li M., Sun J., Baker S.A., Insinna C., Besharse J.C. Фоторецепторные ift-комплексы, содержащие шапероны, гуанилилциклазу 1 и родопсин. Движение. 2009. 10: 648–663. DOI: 10.1111 / j.1600-0854.2009.00896.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51.Джин Х., Уайт С.Р., Шида Т., Шульц С., Агиар М., Гиги С.П., Базан Дж.Ф., Начуры М.В. Консервативные белки синдрома Барде-Бидля собирают оболочку, которая транспортирует мембранные белки к ресничкам. Клетка. 2010. 141: 1208–1219. DOI: 10.1016 / j.cell.2010.05.015. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Начуры М.В., Локтев А.В., Чжан К., Вестлейк С.Дж., Перанен Дж., Мердес А., Слюсарски Д.С., Шеллер Р.Х., Базан Дж.Ф., Шеффилд В.С. и др. Основной комплекс белков bbs взаимодействует с gtpase rab8, чтобы способствовать биогенезу цилиарной мембраны.Клетка. 2007. 129: 1201–1213. DOI: 10.1016 / j.cell.2007.03.053. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Калверт П.Д., Стриссель К.Д., Шиссер В.Э., Пью Э.Н., мл., Аршавский В.Ю. Управляемая светом транслокация сигнальных белков в фоторецепторах позвоночных. Trends Cell Biol. 2006. 16: 560–568. DOI: 10.1016 / j.tcb.2006.09.001. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Соколов М., Любарский А.Л., Стриссель К.Дж., Савченко А.Б., Говардовский В.И., Пью Е.Н., мл., Аршавский В.Ю. Массивная световая транслокация трансдуцина между двумя основными отделами палочковых клеток: новый механизм световой адаптации.Нейрон. 2002. 34: 95–106. DOI: 10.1016 / S0896-6273 (02) 00636-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55. Стриссел К.Дж., Лишко П.В., Триеу Л.Х., Кеннеди М.Дж., Херли Дж.Б., Аршавский В.Ю. Рековерин подвергается светозависимой внутриклеточной транслокации в палочковидных фоторецепторах. J. Biol. Chem. 2005; 280: 29250–29255. DOI: 10.1074 / jbc.M501789200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Наир К.С., Хэнсон С.М., Мендес А., Гуревич Е.В., Кеннеди М.Дж., Шестопалов В.И., Вишнивецкий С.А., Чен Дж., Херли Дж. Б., Гуревич В.V., et al. Светозависимое перераспределение аррестина в палочках позвоночных — это энергонезависимый процесс, управляемый белок-белковыми взаимодействиями. Нейрон. 2005. 46: 555–567. DOI: 10.1016 / j.neuron.2005.03.023. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Слепак В.З., Херли Дж.Б.Механизм индуцированной светом транслокации аррестина и трансдуцина в фоторецепторах: диффузия, ограниченная взаимодействием. МСБМБ Жизнь. 2008; 60: 2–9. DOI: 10.1002 / iub.7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58.Hsu Y.C., Chuang J.Z., Sung C.H. Свет регулирует транспорт цилиарного белка и обновление фоторецепторов внешнего сегмента диска млекопитающих. Dev. Клетка. 2015; 32: 731–742. DOI: 10.1016 / j.devcel.2015.01.027. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 59. Санг Л., Миллер Дж.Дж., Корбит К.С., Джайлз Р.Х., Брауэр М.Дж., Отто Э.А., Бай Л.М., Вен X., Скейлс С.Дж., Квонг М. и др. Картирование белковой сети nphp-jbts-mks выявляет гены и пути цилиопатии. Клетка. 2011; 145: 513–528. DOI: 10.1016 / j.cell.2011.04.019. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 60. Fliegauf M., Horvath J., von Schnakenburg C., Olbrich H., Muller D., Thumfart J., Schermer B., Pazour G.J., Neumann H.P., Zentgraf H., et al. Нефроцистин специфически локализуется в переходной зоне почечных и респираторных ресничек и в фоторецепторах, соединяющих реснички. Варенье. Soc. Нефрол. 2006; 17: 2424–2433. DOI: 10.1681 / ASN.2005121351. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 61. Мурга-Замаллоа К.А., Десаи Н.Дж., Хильдебрандт Ф., Ханна Х. Взаимодействие регулятора gtpase белка пигментного ретинита цилиарного заболевания с белками, ассоциированными с нефронофтисом, в сетчатке млекопитающих. Мол. Vis. 2010; 16: 1373–1381. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 62. Ананд М., Ханна Х. Белки ресничной переходной зоны (tz) rpgr и cep290: роль в фоторецепторных ресничках и дегенеративных заболеваниях. Мнение эксперта. Ther. Цели. 2012; 16: 541–551. DOI: 10.1517 / 14728222.2012.680956. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 63. Бенцинг Т., Шермер Б. Белки переходной зоны и динамика ресничек. Nat. Genet. 2011; 43: 723–724. DOI: 10,1038 / нг.896. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 64. Reiter J.F., Blacque O.E., Leroux M.R. Основание реснички: роль переходных волокон и переходной зоны в формировании, поддержании и компартментализации ресничек. EMBO Rep. 2012; 13: 608–618. DOI: 10.1038 / embor.2012.73. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 65. Craige B., Tsao C.C., Diener D.R., Hou Y., Lechtreck K.F., Rosenbaum J.Л., Витман Г. Б. Cep290 связывает микротрубочки переходной зоны жгутиков с мембраной и регулирует содержание белка жгутиков. J. Cell Biol. 2010; 190: 927–940. DOI: 10.1083 / jcb.201006105. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 66. Бешарс Дж. К., Бок Д. Сетчатка и ее нарушения. Академическая пресса; Амстердам, Нидерланды; Бостон, Массачусетс, США: 2011. стр. xvi, 912. [Google Scholar] 67. Петерс К.Р., Паладе Г.Е., Шнайдер Б.Г., Папермастер Д.С. Тонкая структура комплекса перицилиарного гребня палочек сетчатки лягушки, выявленная с помощью сканирующей электронной микроскопии сверхвысокого разрешения.J. Cell Biol. 1983; 96: 265–276. DOI: 10.1083 / jcb.96.1.265. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 68. Спенсер М., Детвилер П.Б., Бунт-Милам А.Х. Распределение мембранных белков в механически диссоциированных стержнях сетчатки. Расследование. Офтальмол. Vis. Sci. 1988. 29: 1012–1020. [PubMed] [Google Scholar] 69. Ден Холландер А.И., Коенекоп Р.К., Изер С., Лопес И., Арендс М.Л., Военек К.Е., Зонневельд М.Н., Стром Т.М., Мейтингер Т., Бруннер Х.Г. и др. Мутации в гене cep290 (nphp6) — частая причина врожденного амавроза Лебера.Являюсь. J. Hum. Genet. 2006. 79: 556–561. DOI: 10,1086 / 507318. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 70. Коенекоп Р.К. Обзор врожденного амавроза Лебера: модель для понимания развития сетчатки глаза человека. Surv. Офтальмол. 2004. 49: 379–398. DOI: 10.1016 / j.survophthal.2004.04.003. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 71. Murga-Zamalloa CA, Ghosh AK, Patil SB, Reed NA, Chan LS, Davuluri S., Peranen J., Hurd TW, Rachel RA, Khanna H. Накопление белка, ингибирующего киназу raf-1 (rkip), связано с cep290 опосредованная дегенерация фоторецепторов при цилиопатиях.J. Biol. Chem. 2011. 286: 28276–28286. DOI: 10.1074 / jbc.M111.237560. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 72. Sayer J.A., Otto E.A., O’Toole J.F., Nurnberg G., Kennedy M.A., Becker C., Hennies H.C., Helou J., Attanasio M., Fausett B.V. и др. Центросомный белок нефроцистин-6 мутирует при синдроме Жубера и активирует фактор транскрипции atf4. Nat. Genet. 2006. 38: 674–681. DOI: 10,1038 / нг1786. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 73. Чи Б., Лю П., Чинн Ю., Чалуни К., Komuves L.G., Hass P.E., Sandoval W., Peterson A.S. Комплекс цилиопатии в переходной зоне защищает реснички как привилегированный мембранный домен. Nat. Cell Biol. 2012; 14: 61–72. DOI: 10,1038 / NCB2410. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 74. Гарсия-Гонсало Ф.Р., Корбит К.С., Сирол-Пикер М.С., Рамасвами Г., Отто Е.А., Норьега Т.Р., Сеол А.Д., Робинсон Дж.Ф., Беннетт К.Л., Джосифова Д.Д. и др. Комплекс переходной зоны регулирует цилиогенез млекопитающих и состав цилиарной мембраны. Nat. Genet.2011; 43: 776–784. DOI: 10,1038 / нг.891. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 75. Уильямс К.Л., Ли К., Кида К., Инглис П.Н., Мохан С., Семенек Л., Бялас Н.Дж., Ступай Р.М., Чен Н., Блак О.Е. и др. Модули Mks и nphp взаимодействуют, чтобы установить ассоциации мембран базальных тельцов / переходной зоны и функцию ворот ресничек во время цилиогенеза. J. Cell Biol. 2011; 192: 1023–1041. DOI: 10.1083 / jcb.201012116. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 76. Болдт К., Манс Д.А., Вон Дж., Ван Ривейк Дж., Фогт А., Кинкл Н., Леттебоер С.Дж., Хикс В.Л., Херд Р.Э., Наггерт Дж.К. и др. Нарушение внутрижгутикового транспорта белков в ресничках фоторецепторов вызывает врожденный амавроз Лебера у людей и мышей. J. Clin. Расследование. 2011; 121: 2169–2180. DOI: 10,1172 / JCI45627. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 77. Zhao C., Malicki J. Нефроцистины и белки mks взаимодействуют с ift-частицами и способствуют транспортировке выбранных цилиарных грузов. EMBO J. 2011; 30: 2532–2544.DOI: 10.1038 / emboj.2011.165. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 78. Jiang S.T., Chiou Y.Y., Wang E., Chien Y.L., He H.H., Tsai F.J., Lin C.Y., Tsai S.P., Li H. Существенная роль нефроцистина во внутричерепном транспорте фоторецепторов у мышей. Гм. Мол. Genet. 2009; 18: 1566–1577. DOI: 10,1093 / hmg / ddp068. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 79. Calvert P.D., Schiesser W.E., Pugh E.N., Jr. Диффузия растворимого белка, фотоактивируемого gfp, через сенсорную ресничку. J. Gen. Physiol.2010. 135: 173–196. DOI: 10.1085 / jgp.2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 82. Lin Y.C., Niewiadomski P., Lin B., Nakamura H., Phua S.C., Jiao J., Levchenko A., Inoue T., Rohatgi R., Inoue T. Химически индуцируемая диффузионная ловушка на ресничках обнаруживает барьер, подобный молекулярному сите. Nat. Chem. Биол. 2013; 9: 437–443. DOI: 10.1038 / nchembio.1252. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Новости: Истории с тегом: «martin-cilia»

EP Мартина Килиа «Sleepwalk» на лейбле Bombora

Sleepwalk — это кавер Мартина на заглавный трек (оригинал Santo & Johnny) со звездной игрой и типично сочным эхо.ИМО, это одна из тех вневременных мелодий (или что-то в этом роде), которую каждый должен иметь в кармане на тот момент, когда вам нужно привлечь внимание людей к танцполу. Прекрасный пример. Здесь и на протяжении всего альбома очевидна безупречная игра на ударных Ллойда Джи, который уже должен быть хорошо известен здесь многим и, кажется, уже давно стал неотъемлемой частью сольной работы Мартина — этот парень просто невероятно разносторонний.

Search for Surf — Особо следует отметить несколько экзотических клавишных / синтезаторных аранжировок, которые действительно дополняют звучание гитары.Мелодия немного преследует в своем подходе. Есть слабый аккордовый бэк-вокал, приписываемый Кармин Уоррингтон, а клавишная работа выполнена Джимом Могини. Классная вещь.

No Sign of a Pipeline — Это драйвовая инструментальная баллада (композитор Майкл Симич), которая напоминает мне о некоторых из лучших работ, сделанных Мартином над альбомами Atlantics Flight of the Surf Guitar или Point Zero. Я мог представить, как они это делают вживую.

Lost in Waikiki — Мартин Килия, автор простой серф-мелодии, с почти модной нэшвилльской структурой, но наполненной классическим тоном Мартина.Я вижу, как Брэд Пейсли сидит на диване и думает, что хотел бы попробовать, но сначала ему нужно позвонить Мартину. По идее, эта мелодия идеально подошла бы к предыдущему полноформатному релизу альбома Going to Kaleponi.

Surf Explosion — мелодия, которая у меня есть в более ранней версии, и эта новая версия имеет медленное, зловещее вступление с некоторой выдержкой и прекрасным тремело перед тем, как начать резкое стаккато для песни, которая является одним из тех аттракционов электронного билета на 200 ударов в минуту. На мой взгляд, новое вступление действительно настраивает песню и делает ее гораздо более законченной.В традициях таких вещей, как «Полет гитары для серфинга», это что-то вроде «залезь, сядь, подожди и заткнись». Для тех, кому интересно, Мартин предлагает полную табулатуру и минусовки MIDI (с мелодией и без нее) здесь:

Мартин продолжает радовать, и его щедрость, как по отношению к игрокам, так и по отношению к этому сайту, хорошо известна. Я часто поражаюсь тому, насколько практичны некоторые из действительно великих игроков — а их много здесь, в Surf Guitar 101, — что трудно представить, что такое взаимопонимание существует во многих других стилях музыки.Люди, с которыми без музыки можно было бы просто приятно поболтать, будь то у канала под городской улицей или по электронной почте в 12 000 милях от города.

Sleepwalk доступен здесь вместе с видео с заглавной песни. Возьми.

Конференция по взаимодействию ресничек, слизи и мукоцилиарного обмена, 2011 г.

7:30 — 8:30003

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Schindelin, J., Arganda-Carreras, I., Frize, E., Kaynig, V., Longair, M., Pietzsch, T., et al. (2012). Фиджи: платформа с открытым исходным кодом для анализа биологических изображений. Nat. Методы 9, 676–682. DOI: 10.1038 / nmeth.2019

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сингх Д., Ван С. Б., Ся Т., Тайнш Л., Гиасси-Неджад М., Сюй Т. и др. (2018). Биоразлагаемый каркас усиливает дифференциацию эмбриональных стволовых клеток в толстый слой клеток сетчатки. Биоматериалы 154, 158–168. DOI: S0142-9612 (17) 30717-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шарон Д., Банин Э. (2015). Несиндромный пигментный ретинит широко распространен в районе Иерусалима с высокой частотой мутаций-основателей. Mol. Vis. 21, 783–792.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Шарон, Д., Блэкшоу, С., Чепко, К. Л., и Дриджа, Т. П. (2002). Профиль генов, экспрессируемых в периферической сетчатке, желтом пятне и пигментном эпителии сетчатки человека, определяется посредством серийного анализа экспрессии генов (SAGE). Proc. Natl. Акад. Sci. США 99, 315–320. DOI: 10.1073 / pnas.012582799

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шёстранд, Ф. С. (1953). Ультраструктура наружных сегментов палочек и колбочек глаза, обнаруженная с помощью электронного микроскопа. J. Cell Comp. Physiol. 42, 15–44. DOI: 10.1002 / jcp.1030420103

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Соенс, З. Т., Ли, Ю., Чжао, Л., Эблимит, А., Дхармат, Р., Li, Y., et al. (2016). Гипоморфные мутации выявлены в кандидате гена врожденного амавроза Лебера CLUAP1. Genet. Med. 18, 1044–1051. DOI: 10.1038 / gim.2015.205

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Спаллуто, К., Уилсон, Д. И., Хирн, Т. (2013). Доказательства рецилиляции клеток RPE1 в поздней фазе G1 и цилиарной локализации циклина B1. FEBS Open Bio 3, 334–340. DOI: 10.1016 / j.fob.2013.08.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стоун, Э.М. (2007). Врожденный амавроз Лебера — модель для эффективного генетического тестирования гетерогенных заболеваний: LXIV Мемориальная лекция Эдварда Джексона. Am. J. Ophthalmol. 144, 791–811. DOI: 10.1016 / j.ajo.2007.08.022

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тан, Э., Дин, X. К., Саади, А., Агарвал, Н., Нааш, М. И., и Аль-Убайди, М. Р. (2004). Экспрессия антигенов колбочек-фоторецепторов в клеточной линии, полученной из опухолей сетчатки у трансгенных мышей. Инвест. Офтальмол. Vis. Sci. 45, 764–768. DOI: 10.1167 / iovs.03-1114

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Trapnell, C., Roberts, A., Goff, L., Pertea, G., Kim, D., Kelley, D. R., et al. (2012). Анализ дифференциальной экспрессии генов и транскриптов в экспериментах с последовательностью РНК с TopHat и Cufflinks. Nat. Protoc. 7: 562. DOI: 10.1038 / nprot.2012.016

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

ван Дам, Т.Дж., Уэуэй, Г., Слаатс, Г. Г., Исследовательская группа SYSCILIA, Хьюйнен, М. А., и Джайлз, Р. Х. (2013). Золотой стандарт SYSCILIA (SCGSv1) известных компонентов ресничек и его приложений в рамках консорциума системной биологии. Реснички 2: 7. DOI: 10.1186 / 2046-2530-2-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вербакель, С. К., ван Хуэт, Р. А. С., Бун, К. Дж. Ф., ден Холландер, А. И., Коллин, Р. В. Дж., Клавер, К. С. W. и др. (2018). Несиндромальный пигментный ретинит. Prog. Ретин. Eye Res. 66, 157–186. DOI: 10.1016 / j.preteyeres.2018.03.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wheway, G., Schmidts, M., Mans, D. A., Szymanska, K., Nguyen, T. M., Racher, H., et al. (2015). Функциональный геномный скрининг на основе siRNA для идентификации регуляторов цилиогенеза и генов цилиопатии. Nat. Cell Biol. 17, 1074–1087. DOI: 10.1038 / ncb3201

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вигеринг, А., Dildrop, R., Kalfhues, L., Spychala, A., Kuschel, S., Lier, J.M., et al. (2018). Клеточная регуляция сборки переходной зоны ресничек у позвоночных. EMBO J. 37: e97791. DOI: 10.15252 / embj.201797791

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Уортингтон, К. С., Грин, Б. Дж., Ретвиш, М., Уайли, Л. А., Такер, Б. А., Гаймон, К. А. и др. (2016). Нейрональная дифференцировка индуцированных плюрипотентных стволовых клеток на шаблонных гидрогелях хитозана сурфактантом. Биомакромолекулы 17, 1684–1695. DOI: 10.1021 / acs.biomac.6b00098

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Янг, Т. Т., Су, Дж., Ван, В. Дж., Крейдж, Б., Витман, Г. Б., Цоу, М. Ф. и др. (2015). Распознавание образов со сверхвысоким разрешением раскрывает архитектурную карту зоны цилиарного перехода. Sci. Отчет 5: 14096. DOI: 10.1038 / srep14096

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Формирование и функции эктосом, высвобождаемых из ресничек / жгутиков —- Институт гидробиологии Китайской академии наук

Реснички — это эволюционно законсервированные органеллы, простирающиеся от поверхностей почти всех эукариотических клеток, участвующие в подвижности клеток, сенсорной передаче и передаче сигналов.Дисфункция ресничек связана с широким спектром заболеваний и расстройств человека, известных как цилиопатии. Недавняя работа с зеленой водорослью , Chlamydomonas и нематодой C.elegans продемонстрировала, что реснички обладают функцией «секреции». Эктосомы (один тип везикул) могут высвобождаться из ресничек и могут опосредовать межклеточную коммуникацию. Однако детальные механизмы эктосом, высвобождаемых из ресничек / жгутиков, а также дополнительные возможные функции цилиарной эктосомы в настоящее время неизвестны.

Ученые из Института гидробиологии Китайской академии наук (IHB) и Йельского университета использовали классическую модель исследования ресничек / жгутиков, Chlamydomonas , для решения вышеуказанных проблем. Тело клетки Chlamydomonas покрыто клеточной стенкой, а жгутики обеспечивают единственную поверхность мембраны, контактирующую с окружающей средой и способную высвобождать мембрану в окружающую среду, тем самым облегчая очистку эктосом жгутиков.

Long et al. изолировали жгутиковые эктосомы и сравнили их белковый состав с жгутиковой мембраной и продемонстрировали, что эктосомы, высвобождаемые из жгутиков, имеют уникальный белковый состав, особенно обогащенный малыми GTPases, киназами, фосфатазами, эндосомным сортировочным комплексом, необходимым для транспорта (ESCRT) и убиквитинированным. белки.

Эти данные предполагают, что образование эктосом включает активное накопление специфических белков для высвобождения в среду.Кроме того, мембранные белки имеют четкое распределение в эктосомах и жгутиковых мембранах, подразумевая, что существует механизм сортировки белков жгутиковых мембран, нацеленных на эктосомы.

ESCRT участвует в биогенезе мультивезикулярных телец, почковании вируса, цитокинезе и так далее. Они идентифицировали три связанных с ESCRT белка, обогащенных эктосомами жгутиков. Живое изображение показало, что эктосомы, обогащенные ESCRT-связанным белком (PDCD6), высвобождались из жгутиков во время активации гамет.Нокдаун двух ESCRT-связанных белков, PDCD6 и VPS4, ослаблял высвобождение эктосом во время укорочения жгутиков, и укорочение замедлялось. Эти данные подтверждают, что белки ESCRT обеспечивают высвобождение эктосом и тем самым влияют на разборку жгутиков у Chlamydomonas . Эта работа была опубликована в журнале Current Biology .

Таким образом, их работа продемонстрировала, что эктосомы, высвобождаемые из жгутиков / ресничек, обладают уникальным белковым составом и участвуют в процессе укорочения жгутиков.Присутствие комплексов ESCRT и пути убиквитинирования в жгутиках и жгутиковых эктосомах указывает на то, что они опосредуют образование цилиарных / жгутиковых эктосом. Эти находки проливают новую информацию о перемещении цилиарной мембраны и могут предоставить новые стратегии для манипулирования сигнальными путями в ресничках / жгутиках.

Секреция жгутиковых эктосом увеличивалась во время резорбции жгутиков и активации гамет (Изображение IHB)

Контактное лицо:
Проф.HUANG Kaiyao
Исследовательская группа клеточной биологии зеленых водорослей и ресничек
Институт гидробиологии Китайской академии наук
E-mail: [email protected]

Stentors

Stentors

18:00	Ужин
19:30 — 19:35	Приветственные / вводные комментарии персонала сайта GRC
19:35 — 21:30	На пути к интеграции ресничек , Муцины и мукоцилиарные взаимодействия: перспективы и темы
	Руководители обсуждения: Питер Сатир (Альберт Эйнштейн) и Сандра Гендлер (клиника Майо, Феникс)
19:40 19:35	Питер Сатир (Альберт Эйнштейн) и Сандра Гендлер (клиника Майо, Феникс) «Введение»
19:40 — 20:05	Грегори Дж.Pazour (Univ. Mass.) «Подвижные и первичные реснички в биологии и болезнях»
20:05 — 20:15	Обсуждение
20:15 — 20:40	Дэвид Торнтон (Манчестерский университет, Великобритания) «От слизи к слизи»
20:40 — 20:50	Обсуждение
20:50 — 21:20	Ричард Баучер (Университет Северной Каролины, Чапел-Хилл) «Мукоцилиарные взаимодействия: взгляды со стороны дыхательных путей»
21:20 — 21:30	Обсуждение
ПОНЕДЕЛЬНИК
Завтрак
9:00 — 12:30	Развитие ресничек и секреторных клеток
	Руководители дискуссий: Мэри Портер (Univ.Миннесота, Миннеаполис) и Бертон Дики (Центр медицины Андерсона, Хьюстон)
9:00 — 9:05	Мэри Портер (Университет Миннесоты, Миннеаполис) «Введение — реснички и развитие «
9:05 — 9:25	Кристофер Кинтнер (Институт Солка, Ла-Хойя) «Сигналы развития определяют разные подтипы ресничек у Xenopus»
9:25 — 9:35	Обсуждение
9:35 — 9:55	Эстер К.Владар (Стэнфорд) «Planar Cell Polarity Orients Respiratory Cilia»
9:55 — 10:05	Обсуждение
10:05 — 10:25	Групповое фото / кофе-брейк
10: 25:00 — 10:45	Стивен Броди (Вашингтонский университет, Сент-Луис) «Взаимосвязь между первичным и подвижным цилиогенезом в развивающемся и поврежденном эпителии дыхательных путей»
10:45 — 10:55	Обсуждение
10:55 — 11:00	Burton Dickey (MD Anderson Cancer Ctr) «Введение — секреторные клетки и развитие»
11:00 — 11:20	Веллингтон Кардосо (Boston Univ.) «Передача сигналов Notch модулирует баланс между реснитчатыми и секреторными клетками»
11:20 — 11:30	Обсуждение
11:30 — 11:50	Jeffrey Whitsett ( Cincinnati Children’s Hospital) «Транскрипционная регуляция дифференцировки бокаловидных клеток»
11:50 — 12:00	Обсуждение
12:00 — 12:20	Scott Randell (Univ .Северная Каролина, Чапел-Хилл) «Регуляция микро-РНК эпителиальных фенотипов дыхательных путей человека»
12:20 — 12:30	Обсуждение
12:30	Обед
1: 30:00 — 16:00	Свободное время
16:00 — 18:00	Постерная сессия A (просмотр 1 st )
18:00	Ужин
19:30 — 21:30	Сигнализация и регуляция ресничек и муцинов
	Руководители обсуждения: Сьюзан Датчер (Вашингтонский университет., Сент-Луис) и Инь Чен (Университет Аризоны)
19:30 — 19:35	Сьюзан Датчер (Вашингтонский университет, Сент-Луис) и Инь Чен (Университет из Аризоны) «Введение»
19:35 — 19:55	Уоллес Маршалл (Университет Калифорнии, Сан-Франциско) «Системы контроля длины ресничек»
19:55 — 20:05	Обсуждение
20:05 — 20:30	Zhaoxia Sun (Yale Univ.) «Реснички в пути TSC / mTOR»
20:30 — 20:35	Обсуждение
20:35 — 20:55	Кристофер Эванс (MD Anderson Cancer Центр, Хьюстон) «Жизнь (и смерть) без Muc5ac и Muc5b в дыхательных путях мыши»
20:55 — 21:05	Обсуждение
21:05 — 21:25	Isabelle Van Seuningen (Inserm, Lille, France) «Эпигенетическая регуляция генов муцина: новое семейство биомаркеров рака легких»
21:25 — 21:30	Обсуждение
TUESDAY
7:30 — 8:30	Завтрак
9:00 — 12:30	Фундаментальные процессы: муцины и реснички
	Руководители обсуждения: K.К. Ким (Temple Univ.) И Морин Уиршелл (Эмори)
9:00 — 9:05	K.C. Kim (Temple Univ.) «Введение — Муцины»
9:05 — 9:25 утра	Bradley Schroeder (Univ. CA, San Francisco) «Специализированные белки ER, играющие важную роль в муцине. производство »
9:25 — 9:35	Обсуждение
9:35 — 9:55	Mehmet Kesimer (Univ.Северная Каролина, Чапел-Хилл) «Раскрытие секретного муцина»
9:55 — 10:05	Обсуждение
10:05 — 10:25	Перерыв на кофе
10:25 — 10:45	Гуннар К. Ханссон (Университет Гетеборга, Швеция) «Функция и организация муцина кишечника в отношении МВТР и дыхательных путей»
10:45 — 10 : 55 утра	Обсуждение
10:55 — 11:00	Морин Виршелл (Эмори) «Введение — Реснички»
11:00 — 11:20	Winfield Sale (Emory Univ.) «Регуляция функции ресничек у Chlamydomonas »
11:20 — 11:30	Обсуждение
11:30 — 11:50	Элизабет Смит (Дартмутский колледж ) «Кальций и регуляция перистальтики ресничек»
11:50 — 12:00	Обсуждение
12:00 — 12:20	Ребекка Бурдин (Принстон) «Структура и функции ресничек в развитии рыбок данио»
12:20 — 12:30	Обсуждение
12:30	Обед
13:30 — 16:00	Свободное время
16:00 — 18:00	Постерная сессия A (2 -й просмотр )
18:00	Ужин
19:30 — 9: 30 часов	Генетические подходы к цилиопатиям и мукоцилиарным заболеваниям
	Руководители дискуссий: Хеймут Омран (Univ.Фрайбург) и Джудит Войнов (Университет Герцога)
19:30 — 19:35	Хеймут Омран (Университет Фрайбурга) и Джудит Войнов (Университет Герцога) «Введение»
19:35 — 19:55	Халид Фахро (Йельский университет) «Генетика гетеротаксии человека»
19:55 — 20:05	Обсуждение
20:05 — 20:25	Филип Л.Билс (Университетский колледж, Лондон) «Черепно-лицевой и скелетный паттерны при цилиопатиях»
20:25 — 20:35	Обсуждение
20:35 — 20:55	Maimo Заривала (Университет Северной Каролины, Чапел-Хилл) «Использование секвенирования всего экзома для определения генетических причин первичной цилиарной дискинезии»
20:55 — 21:00	Обсуждение
9: 00 вечера — 21:20	Дэвид Шварц (Национальное еврейское здравоохранение, Денвер) «Генетические исследования указывают на причастность MUC5B к идиопатическому фиброзу легких»
21:20 — 21:30	Обсуждение
СРЕДА
7:30 — 8:30	Завтрак
9:00 — 12:30	Мукоцилиарные заболевания, подслизистые железы и слизь
	eaders: Джудит Войнов (Duke Univ.) и Стивен Баллард (Университет Южной Алабамы)
9:00 — 9:05	Джудит Войнов (Герцог) «Введение — модели мукоцилиарных заболеваний»
9:05 am — 9:25 am	Larry Ostrowski (Univ. North Carolina, Chapel Hill) «Патогенез и лечение первичной цилиарной дискинезии в новой модели мыши»
9:25 am — 9:35	Обсуждение
9:35 — 9:55	Майкл Уэлш (Univ.Айова) «Изменения дыхательных путей в модели свиней CF»
9:55 — 10:05	Обсуждение
10:05 — 10:25	Перерыв на кофе
10 : 25 — 10:45	Джон Энгельгардт (Университет Айовы) «Изменения дыхательных путей в модели хорька CF»
10:45 — 10:55	Обсуждение
10 : 55–11:00	Стивен Баллард (Univ.Южная Алабама) «Введение — Подслизистые железы и слизь»
11:00 — 11:20 утра	Джефф Вайн (Стэнфордский университет) «Подслизистые железы, слизь и кистозный фиброз»
11:20 — 11:30	Обсуждение
11:30 — 11:40	Walter Finkbeiner (UCSF) «Характеристика природных и культивированных серозных и слизистых клеток трахеобронхиальной железы человека»
11:40 — 11:45	Обсуждение
11:45 — 11:55	Silvia Kreda (UNC) «Сигнализация Rho и VAMP8 являются важными медиаторами поражения дыхательных путей. секреция клеточного муцина »
11:55 — 12:00	Обсуждение
12:00 — 12:20	Кен Адлер (North Carolina State Univ.) «Обход гиперсекреции муцина путем ингибирования пептидов»
12:20 — 12:30	Обсуждение
12:30	Обед
13:30 — 16:00 вечера	Свободное время
16:00 — 18:00	Постерная сессия B (просмотр 1 st )
18:00	Ужин
19:00 — 19:30	Деловая встреча
	(кандидатуры следующего заместителя председателя; заполнение форм оценки конференции; обсуждение будущих предпочтений сайта и расписания; выборы следующего заместителя председателя)
7:30 вечера — 9:30 вечера	Взаимодействие структуры и функции в ресничках и слизи
	Лидеры дискуссий: Стивен Кинг (Univ.Conn) и CW Davis (Университет Северной Каролины, Чапел-Хилл)
19:30 — 19:50	Даниэла Никастро (Университет Брандейса) «КриоЭМ-томография: Аксонемальный регуляторный комплекс динеина and nexin link »
19:50 — 20:00	Обсуждение
20:00 — 20:10	Мэри Портер (США) «Консервативные субъединицы, необходимые для сборки связи нексин-DRC и регулируемого скольжения микротрубочек»
20:10 — 20:15	Обсуждение
20:15 — 20:35	Крис О’Каллаган, (Univ.Лестер, Великобритания) «Взаимодействие ресничек с патогенами»
20:35 — 20:45	Обсуждение
20:45 — 20:55	Diego Preciado (Children’s National, Вашингтон, округ Колумбия) «Индукция бактериальным лизатом Cxcl2 и метаплазия слизистой среднего уха у мышей»
20:55 — 21:00	Обсуждение
21:00 — 21:20	Ричард Коун ( Johns Hopkins Univ.) «Барьерные свойства слизи»
21:20 — 21:30	Обсуждение
ЧЕТВЕРГ
7:30 — 8:30	Завтрак
9:00 до 12:30	Мукоцилиарные взаимодействия
	Руководители обсуждения: Джастин Хейнс (Университет Джона Хопкинса) и Майкл Рубинштейн (Университет Северной Каролины, Чапел-Хилл)
9:00 до 9:05	Джастин Хейнс (Johns Hopkins Univ.) «Введение в основы слизи»
9:05 — 9:15	Ying-Ying Wang (Университет Джона Хопкинса) «Слизисто-инертные наночастицы обнаруживают высококонсервативную микроструктуру слизи человека по всей физиологической Диапазон pH »
9:15 — 9:20	Обсуждение
9:20 — 9:40	John Fahy (Univ. CA, San Francisco) « Механизмы патологическое образование слизи при заболеваниях дыхательных путей: роль протеаз и лектинов »
9:40 — 9:50	Обсуждение
9:50 — 10:10	Paul Quinton (Univ.Калифорния, Сан-Диего) «Новое пересечение электролитов и слизи»
10:10 — 10:20	Обсуждение
10:20 — 10:40	Перерыв на кофе
10:40 — 10:45	Майкл Рубинштейн (Университет Н. Каролина, Чапел-Хилл) «Введение в взаимодействие слизи с ресничками»
10:45 — 10:55	Liheng Cai (Univ N.Carolina, Chapel Hill) «Новые сведения о структуре перицилиарных слоев легких»
10:55 — 11:00	Обсуждение
11:00 утра — 11:20 утра	Susan Suarez (Cornell Univ.) «Взаимодействие сперматозоидов со слизью и ресничками»
11:20 — 11:30	Обсуждение
11:30 — 11:50	Panteleimon Rompolas (Univ. Conn. ) «Планарии как молекулярно-генетическая система для анализа ресничек и выработки силы против секретируемой слизи»
11:50 am — 12:00 pm	Discussion
12:00 pm — 12:20 pm	Ричард Суперфайн (Univ.Северная Каролина, Чапел-Хилл) «Моделирование мукоцилиарного взаимодействия для создания потока»
12:20 — 12:30	Обсуждение
12:30	Обед
1: 30 — 16:00	Свободное время
16:00 — 18:00	Постерная сессия B (2 , просмотр )
18:00	Ужин
19:30 — 21:30	Жизнь на границе раздела: реснички и взаимодействия жидкостей
	Руководитель обсуждения: Мартина Брюкнер (Yale Univ.Нью-Хейвен)
19:30 — 19:35	Мартина Брюкнер (Йельский университет, Нью-Хейвен) «Введение»
19:35 — 19:55	Хироши Хамада (Осакский университет, Япония) «Гидродинамика в узле, развитие слева направо»
19:55 — 20:00	Обсуждение
20:00 — 20:20 20:00	Иэн Драммонд (Гарвардский университет) «Движение жидкости в развивающейся почке»
20:20 — 20:30	Обсуждение
20:30 — 20:50 pm	Sergio Gradilone (Mayo Clinic, Rochester) «Первичные реснички холангиоцитов: ключевые органеллы органов чувств в жидкости билиарного дерева»
20:50 — 21:00	Discussion	60 9157 вечера — 21:20	Маттиас Салате (Univ.Майами) «Новые парадигмы регуляции функции ресничек секрецией»
21:20 — 21:30	Обсуждение
ПЯТНИЦА
7:30 — 8:30	Завтрак. В то время как большинство из нас более крупные, многоклеточные, (или тонны клеток) эукариоты могут двигаться и бороздить борозды с помощью некоторых ног и рук, нашим одиночным клеткам и одноклеточным товарищам не так повезло.То, что некоторым клеткам не хватает способности давать пять, может быть восполнено способностью перемещаться с помощью клеточных придатков. Первыми в движении эукариотических клеток являются жгутики и реснички. Жгутики (единственное число: жгутик) представляют собой хлыстовые хвосты, которые управляют движением клеток. Сперматозоиды являются примером отдельных эукариотических клеток, которые двигаются жгутиками. В то время как прокариотические клетки тоже могут иметь эти клеточные расширения, жгутики эукариот совершенно разные. Ну, не совсем другое.Оба вида жгутиков получают отдельные клетки от точки A до точки B, но прокариотические жгутики используют вращающийся «мотор», чтобы вращаться по кругу, в то время как эукариотические жгутики движутся вперед и назад. Сперматозоид, оплодотворяющий яйцеклетку выше, является примером эукариотической клетки, которая использует жгутик для передвижения. Жгутики прокариот состоят из специализированных белков. Жгутики эукариот состоят из микротрубочек, окруженных плазматической мембраной. Микротрубочки — это всего лишь один компонент цитоскелета , эукариотической клетки, который выполняет такие функции, как организация и поддержка клеточных структур, точно так же, как ваш собственный костный скелет поддерживает вас.Микротрубочки состоят из димеров (пар) белков альфа и бета тубулина, которые соединяются вместе, образуя длинные цепи. Затем тринадцать длинных цепей скручиваются в полую трубу, похожую на элементарный пиратский прицел. Эй, дружище! Где мое сокровище? В жгутиках эти микротрубочки расположены по особой схеме «9 плюс 2». Это означает, что если вы разрежете одну из этих присосок пополам, вы увидите 9 пар микротрубочек, расположенных по кругу, с еще двумя в центре (см. Рисунок ниже). Реснички (единственное число: реснички) представляют собой другой тип клеточного удлинения с тем же расположением 9 + 2, что и эукариотические жгутики.Реснички же короче и их больше. Они напоминают красиво уложенную прическу на поверхности каких-то клеток, развевающуюся на ветру. Однако на самом деле они ритмично бьют взад и вперед, перемещая жидкость вокруг себя. Например, реснички выстилают клетки дыхательного пути. Хотя реснички на самом деле не помогают этим клеткам легких двигаться, они помогают перемещать слизистую вокруг них. Здесь можно увидеть движение некоторых ресничек. Здесь показаны поперечные сечения ресничек, показывающие классическое расположение микротрубочек «9 плюс 2», которые имеют общие реснички и жгутики. Возможно, самые крутые из эукариотических локомотивов — это псевдоподий (единственное число: псевдоподий) или эти глобулярные расширения клеточных мембран. Слово псевдоподия переводится с греческого как «поддельные ноги». Одноклеточные эукариоты, такие как протисты (подробнее об этих парнях мы поговорим позже), являются одним из типов организмов, которые передвигаются с помощью этих временных конечностей. Псевдоподии — это не совсем отдельные придатки, и они не являются постоянными структурами, такими как жгутики и реснички.Вместо этого псевдоподии на самом деле являются частью клетки, которая выходит из клеточной мембраны, как пара слизистых рук из болота. Они структурированы с использованием частей цитоскелета, таких как микротрубочки, но не с использованием того же расположения 9 плюс 2. Это одноклеточная эукариотическая амеба с расширениями псевдоподий. В то время как простейшие используют эти фальшивые стопы для передвижения, наши белые кровяные тельца используют псевдоподии для поглощения чужеродных бактерий, которые имеют наглость вторгаться в наши тела.(Нерв!) По сути, они используют свои псевдоподии, чтобы протянуть руку и проглотить их целиком в процессе, известном как фагоцитоз . Brain Snack Присоединитесь к амебе на обед. Мммммм. У нас будет то, что у него есть. Границы | Линия фоторецепторных клеток 661W как модель клеток для изучения цилиопатий сетчатки Введение Сенсорная первичная ресничка — важная неподвижная клеточная органелла, ответственная за обнаружение изменений во внеклеточной среде и передачу сигналов, позволяющих клетке реагировать соответствующим образом.Сетчатка содержит несколько типов реснитчатых клеток, включая пигментный эпителий сетчатки (РПЭ) и фоторецепторные клетки. Есть два типа фоторецепторов; палочки и колбочки, которые различаются своей формой и содержащимся в них фотопигментом. Оба типа клеток содержат внутренний сегмент, в котором расположены ядра и другие органеллы. От апикальной поверхности этого внутреннего сегмента проходит соединительная ресничка, которая содержит проксимальную область, аналогичную переходной зоне первичных ресничек на других типах клеток, и дистальную область, которая является уникальной для фоторецептора, соединяющего реснички (Dharmat et al., 2018). В конце соединительной реснички находится огромная конструкция из стопок мембраны, в которой расположены молекулы фотопигмента; названный внешним сегментом (Sjöstrand, 1953). У стержней есть длинный, тонкий стержневидный внешний сегмент, содержащий родопсин (Wheway et al., 2014), а колбочки имеют более короткий конический внешний сегмент, содержащий опсины, которые поглощают волны различной длины, чтобы обеспечить цветовое зрение (Рисунок 1). Наружные сегменты конуса часто описываются как имеющие складки мембраны, продолжающиеся с плазматической мембраной, а не диски, отделенные от плазматической мембраны, но это верно только для низших позвоночных (Pearring et al., 2013; Май-Симера и др., 2017). Рисунок 1. Схематическое изображение фоторецепторной клетки колбочки и локализация цилиарных белков. На схеме представлен внешний сегмент фоторецепторной клетки колбочки, соединяющий ресничку, внутренний сегмент, внешнее волокно, тело клетки, внутреннее волокно и синаптический конец. Ряд ключевых компонентов цилиарного аппарата обозначен и обозначен цветом. Комплекс IFT A (синий) и комплекс B (красный) представлены на увеличенной вставке. Белки перемещаются от места продуцирования во внутреннем сегменте к месту поглощения света во внешнем сегменте вдоль соединительной реснички посредством процесса, известного как внутричерепный транспорт (IFT; Ishikawa and Marshall, 2017). Соединительная ресничка состоит из аксонемы из девяти дублетов микротрубочек, образованных в основании триплетной структурой микротрубочек, называемой базальным телом. Эта структура происходит от материнской центриоли на апикальной поверхности внутреннего сегмента.Аксонема простирается во внешний сегмент, превращаясь в одиночные микротрубочки по направлению к дистальному концу, часто достигая около дистального конца внешнего сегмента конуса и, по крайней мере, на полпути вдоль внешнего сегмента стержня (Roof et al., 1991). Проксимальная область аксонемы стабилизируется посттрансляционными модификациями, такими как глутамилирование и ацетилирование, и переворачивается на дистальном конце, когда мембраны заменяются на дистальном конце внешнего сегмента, особенно в колбочках (Eckmiller, 1996). В совокупности соединяющая ресничка и внешний сегмент называются фоторецепторной ресничкой, и это наиболее сильно модифицированная и специализированная сенсорная ресничка в организме человека (Wheway et al., 2014). Возможно, неудивительно, что дефекты ресничек часто приводят к фенотипам сетчатки либо как часть синдромных состояний, вовлекающих другие органы, либо изолированно при так называемых цилиопатиях сетчатки (Bujakowska et al., 2017). Несиндромальные цилиопатии сетчатки включают несколько генетических подтипов пигментного ретинита (RP), врожденного амавроза Лебера (LCA) и дистрофии колбочек-стержней (CORD). Пигментный ретинит является наиболее частой причиной наследственной слепоты, поражающей до 1: 2000 человек во всем мире (Головлева и др., 2010; Шарон, Банин, 2015), и характеризуется куриной слепотой и потерей периферического зрения из-за дегенерации палочковидные фоторецепторные клетки, часто прогрессирующие до потери центрального острого зрения, поскольку рецепторы колбочек также поражаются (Verbakel et al., 2018). Обычно это диагностируется на третьем или четвертом десятилетии жизни, хотя возраст начала и степень тяжести сильно различаются.Это может происходить изолированно или как часть таких синдромов, как синдром Ушера, синдром Барде-Бидля и синдром Жубера. Состояние чрезвычайно генетически неоднородно, с 64 генами, идентифицированными как причины несиндромального RP, и более 50 генов, связанных с синдромальным RP (RetNet), и могут наследоваться по аутосомно-доминантному, аутосомно-рецессивному или X-сцепленному типу. Из генетических причин Х-сцепленных несиндромальных RP, OFD1, RP2 и RPGR кодируют белки ресничек. В аутосомно-доминантных несиндромальных RP (ADRP), RP1 и TOPORS (RP31) кодируют известные белки ресничек.По крайней мере 13 генетических причин аутосомно-рецессивного несиндромального RP (ARRP) кодируют белки ресничек, включая FAM161A (RP28), TTC8 (RP51), C2orf71 (RP54), ARL6 (RP55), MAK (RP62), NEK2 (RP67), BBS2 (RP74), IFT140 (RP80), ARL2BP, RP1L1, C8orf37, CC2D2A и IFT172. Врожденный амавроз Лебера — наиболее частая генетическая причина детской слепоты, с оценкой заболеваемости во всем мире от 1:33 000 (Alstrom, 1957) до 1:81 000 живорождений (Stone, 2007). На его долю приходится 20% заболеваний глаз у детей, посещающих школы для слепых (Schappert-kimmijser et al., 1959). Пациенты с LCA рождаются с тяжелым нарушением зрения, которое обычно диагностируется в течение нескольких месяцев после рождения по сильно уменьшенным или не регистрируемым результатам электроретинограммы. Наряду с плохим зрением наблюдается нистагм (непроизвольное движение глаз) и медленная реакция зрачков или ее отсутствие. Несмотря на то, что они родились с уже плохим зрением, некоторые пациенты с LCA претерпевают дальнейшее ухудшение зрения во взрослом возрасте, при этом пигментные изменения сетчатки часто происходят в более позднем возрасте (Heher et al., 1992). Это может происходить изолированно или как часть таких синдромов, как синдром Сеньора-Локена.LCA также генетически неоднородна, с 13 известными генами, связанными с аутосомно-рецессивным LCA, и одним геном, связанным с аутосомно-доминантным LCA (RetNet см. Сноску 1). Пять генетических подтипов LCA являются известными цилиопатиями сетчатки. LCA5 кодирует леберсилин, белок цилиарного транспорта (den Hollander et al., 2007), LCA6 кодирует RPGRIP1, белок переходной зоны ресничек (Dryja et al., 2001), LCA10 кодирует CEP290, белок переходной зоны который также мутирует при многочисленных синдромальных цилиопатиях (den Hollander et al., 2006) и LCA15 кодирует IQCB1 / NPHP5, который взаимодействует с CEP290, локализуется в переходной зоне и необходим для формирования внешнего сегмента (Estrada-Cuzcano et al., 2010; Ronquillo et al., 2016). Все эти белки локализуются в соединительной ресничке фоторецепторных клеток. CLUAP1 (IFT38) также является причиной LCA (Soens et al., 2016) и играет центральную роль в цилиогенезе фоторецепторов (Lee et al., 2014). Дистрофии конического стержня (CRD) — редкие дегенеративные состояния с оценочной частотой 1: 40 000 (Hamel et al., 2000). Состояние характеризуется потерей фоторецепторов колбочек, что приводит к потере центрального острого зрения, нарушению цветового зрения (дисхроматопсия) и светобоязни, иногда с последующей дегенерацией палочковых фоторецепторов, вызывающей куриную слепоту и туннельное зрение. Обычно это диагностируется в первое десятилетие жизни (Hamel, 2007). Это может происходить как изолированное состояние или как часть синдромальной цилиопатии синдрома Альстрёма (Hearn et al., 2002; Collin et al., 2012). CRD также генетически гетерогенны: 16 аутосомно-рецессивных и пять аутосомно-доминантных генов были идентифицированы как вызывающие CRD (см. Сноску 1).Из них по крайней мере семь кодируют белки ресничек (RAB28 (CORD18), C8orf37 (CORD16), CEP78, POC1B, IFT81, RPGRIP1 и TTLL5). В целом, по крайней мере 30 генов ресничек были идентифицированы как генетические причины несиндромальных дистрофий сетчатки, и это число продолжает расти. Новые цилиарные причины дистрофий сетчатки продолжают обнаруживаться, и устанавливаются новые связи между ресничками и состояниями сетчатки, которые ранее не считались цилиопатиями сетчатки. Например, недавний скрининг нокдауна полногеномной siRNA в линии реснитчатых клеток идентифицировал PRPF6, PRPF8 и PRPF31, известные причины RP, как белки ресничек (Wheway et al., 2015), предлагая новые взгляды на плохо изученную форму РП. Ясно, что реснички имеют центральное значение для развития и функции сетчатки, с дефектами большого количества белков ресничек, ведущих к различным наследственным дистрофиям сетчатки. Дистрофии сетчатки по-прежнему чрезвычайно трудно поддаются лечению, и для подавляющего большинства пациентов существует очень мало вариантов лечения, за исключением генной терапии RPE65, CEP290 и GUY2D при LCA (DiCarlo et al., 2018). Для улучшения этой ситуации требуется лучшее понимание клеточной биологии и молекулярной генетики дистрофий сетчатки, включая цилиопатии сетчатки. Для этого требуются надежные, легко поддающиеся генетической манипуляции клеточные модели клеток сетчатки. ARPE19 (ATCC CRL-2302; Dunn et al., 1996), линия спонтанно возникающих мужских пигментных эпителиальных клеток сетчатки, и hTERT RPE-1 (ATCC CRL-4000), иммортализованная линия женских пигментных эпителиальных клеток сетчатки hTERT, обычно используются в молекулярных исследованиях. биологические исследования цилиопатий сетчатки из-за их ретинального происхождения и способности образовывать реснички при голодании сыворотки и во время позднего G1 (Spalluto et al., 2013). Однако эти клетки морфологически и функционально отличаются от фоторецепторов, и выделенная линия фоторецепторных клеток будет иметь огромное значение в этой области.Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) могут быть надежно дифференцированы в фоторецепторные клетки сетчатки после 60-дневного протокола дифференцировки (Mellough et al., 2012). Однако быстрая потеря клеток, связанных с судьбой фоторецептора (CRX + / OPSIN + / RHODOPSIN + ), наблюдается в течение 45-60 дней. То же явление наблюдается в клетках-предшественниках сетчатки мышей (Mansergh et al., 2010). В качестве альтернативы этому оптические чашки, полученные из эмбриональных стволовых клеток мыши (Eiraku et al., 2011), эмбриональные стволовые клетки человека (Nakano et al., 2012) и ИПСК человека (Meyer et al., 2011; Reichman et al., 2014) стали популярными 3D-моделями для исследований сетчатки. Им требуется всего 14–18 дней, чтобы дифференцироваться и самостоятельно собраться в неприсоединившейся культуре. Полученные в результате структуры гомологичны эмбриональным чашкам сетчатки, наблюдаемым при развитии глаз у позвоночных, и включают фоторецепторы, но не являются идеальными моделями зрелой сетчатки. Они также представляют проблемы, связанные с эпигенетическими эффектами и сфероидальной природой глазных чашечек, что препятствует доступу к центру этих органоидов для тестирования или анализа.Попытки выращивать и дифференцировать ЭСК и клетки-предшественники сетчатки в листы сетчатки в пользовательских матрицах были успешными, но показали плохое ламинирование (Worthington et al., 2016; Singh et al., 2018). 661W представляет собой иммортализованную клеточную линию фоторецепторов колбочек, полученную из опухоли сетчатки мыши, экспрессирующей Т-антиген SV40 (Tan et al., 2004). Эти клетки в основном использовались в качестве клеточной модели для изучения фотоокислительного стресса и апоптоза, но не для изучения наследственных дистрофий сетчатки. Здесь мы характеризуем клеточную линию 661W как модель для изучения цилиопатий сетчатки. Материалы и методы Культура клеток клеток 661W (Tan et al., 2004) были любезным подарком профессора Муайяда Аль-Убайди из Хьюстонского университета. Клетки культивировали в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы + 10% FCS при 37 ° C, 5% CO 2 и разделяли в соотношении 1: 5 один раз в неделю. Клетки hTERT-RPE1 (ATCC CRL-4000) культивировали в среде DMEM / F12 (смесь 50:50) + 10% FCS при 37 ° C, 5% CO 2 и разделяли в соотношении 1: 8 один раз в неделю. . Иммуноцитохимия Клетки высевали из расчета 1 × 10 5 на мл на стерильные покровные стекла в полной среде, и через 48 часов среду меняли на среду, не содержащую сыворотки, и клетки выращивали еще 72 часа. Клетки промывали теплым фосфатно-солевым буфером Дульбекко (DPBS) и фиксировали ледяным метанолом при –20 ° C в течение 5 минут. Затем клетки немедленно промывали PBS и инкубировали с блокирующим раствором (1% мас. / Об. Обезжиренное сухое молоко / PBS) в течение 15 мин при комнатной температуре.Покровные стекла переворачивали на первичные антитела в блокирующем растворе во влажной камере и инкубировали при 4 ° C в течение ночи. После трех промывок PBS клетки инкубировали со вторичными антителами и DAPI в течение 1 ч при комнатной температуре в темноте. После трех промывок PBS и одной промывки dH 2 O клетки помещали на предметные стекла с помощью Mowiol. Антитела Первичные антитела к IF Мышиный анти-полиглутамилированный тубулин (GT335) 1: 1000. Adipogen Life Sciences AG-20B-0020. Кролик анти-гамма-тубулин 1: 500. Abcam ab11317. Кролик против Arl13b 1: 500. Proteintech 17711-1-AP. Кролик против Ift88 1: 500. Proteintech 13967-1-AP. Rabbit anti Rpgrip1l 1: 100. Proteintech 55160-1-AP. Мышь против Cep164 1: 100. Санта-Крус sc-515403. Вторичные антитела к IF Козьи анти-кроличьи IgG AlexaFluor 488 1: 1000. Козьи антимышиные IgG AlexaFluor 568 1: 1000. Ослиный антимышиный IgG AlexaFluor 488 1: 500. Осел против кроличьих IgG AlexaFluor 568 1: 500. Первичные антитела к WB Мышиный клон АС-15 против бета-актина. 1: 4000. Сигма-Олдрич A1978. Кролик против Ift88 1: 500. Proteintech 13967-1-AP. Вторичные антитела к WB Donkey anti mouse 680 1: 20 000 (LiCor). Осел против кролика 800 1: 20,000 (LiCor). Конфокальная визуализация высокого разрешения конфокальных изображения были получены в Центре исследований в области биологических наук в Центре визуализации UWE в Бристоле с использованием HC PL APO 63x / 1.40 масляный объектив CS2 на инвертированном эпифлуоресцентном микроскопе Leica DMi8, присоединенном к конфокальному лазерному сканирующему микроскопу Leica SP8 AOBS с четырьмя твердотельными лазерами с поддержкой AOTF (405 нм / 50 мВт, 488 нм / 20 мВт, 552 нм / 20 мВт и 638 нм / 30 мВт), два стандартных ФЭУ и два высокочувствительных гибридных SMD GaAsP-детектора HyD. Изображения были получены с использованием программного обеспечения LASX с Hyvolution II, с автоматическими настройками для получения изображений с самым высоким разрешением, с отверстием, установленным на 0,5 AU. Изображения были деконволюционированы с использованием алгоритма оценки максимального правдоподобия Гюйгенса (CMLE) (Scientific Volume Imaging).Изображения были собраны в Adobe Photoshop, а рисунки подготовлены в Adobe Illustrator. Ручной подсчет и измерение длины ресничек Клетки, иммуноокрашенные Arl13b, который маркирует ресничку большей длины, чем наш альтернативный маркер, GT335, были отображены в x63, и были взяты три поля зрения для подсчета числа целых ядер (ядра на краях полей зрения исключены) и числа ресничек. Длину ресничек измеряли с использованием масштабной линейки в качестве эталона. В эксперименте рассчитывали среднюю длину ресничек и процент ресничных клеток.Это было повторено в пяти независимых биологических повторностях. Средний процент ресничных клеток и среднюю длину ресничек рассчитывали по средним значениям всех экспериментов. Конфокальная визуализация с высокой пропускной способностью изображений было получено в Wolfson Bioimaging Facility Бристольского университета с использованием высокопроизводительного формирователя изображений Perkin Elmer OperaLX, линзы объектива 60x, лазеров с длиной волны 405, 488 и 561 нм. Регулирующая пластина PerkinElmer Opera, содержащая разноцветные шарики, использовалась для определения параметров косой обрезки и эталонных параметров.Клетки выращивали, фиксировали и иммуноокрашивали в 96-луночных планшетах Cell Carrier с оптическим дном (Perkin Elmer), и изображения получали с использованием программного обеспечения OperaDB. Отдельные z-срезы были экспортированы как файлы .flex и собраны в z-стеки проекций максимальной интенсивности в Fiji ImageJ (Schindelin et al., 2012). Эти z-стеки были экспортированы в виде 16-битных файлов TIFF, которые были импортированы в CellProfiler для анализа с использованием настраиваемых протоколов анализа (Carpenter et al., 2006; Kamentsky et al., 2011). В качестве альтернативы, z-стеки были построены в OperaDB, а изображения проанализированы с использованием скриптов PerkinElmer Acapella, включая алгоритмы «Найти ядра», «Найти цитоплазму» и «Найти пятна» (для поиска ресничек). SDS-PAGE и вестерн-блоттинг Общий белок экстрагировали из клеток с использованием буфера для лизиса NP40 и соскоба. Нерастворимый материал осаждали центрифугированием при 10000 × g в течение 5 минут и определяли общую концентрацию белка в супернатанте с использованием набора для анализа белков, совместимого с детергентами (BioRad). 20 мкг общего белка на образец смешивали с 2-кратным загрузочным буфером SDS, кипятили при 95 ° C в течение 5 минут и загружали в предварительно отлитые 4–12% гели NuPAGE Novex Bis-Tris (Life Technologies) вместе со Spectra Multicolor Broad Range. Белковая лестница (Thermo Fisher).Образцы разделяли электрофорезом в рабочем буфере MES-SDS (Life Technologies) при 200 В в течение 45 мин. Белок переносили на мембрану из ПВДФ с использованием влажного переноса при 40 В в течение 2 часов. Мембраны инкубировали с 5% (мас. / Об.) Обезжиренным молоком / PBS для насыщения неспецифического связывания и инкубировали с первичным антителом в течение ночи при 4 ° C. После отмывки в PBST мембраны инкубировали со вторичным антителом в течение 1 ч при комнатной температуре и экспонировали с использованием лазера с длиной волны 680 нм и / или 780 нм, или мембрану инкубировали с реагентом SuperSignal West Femto (Pierce) и экспонировали с использованием настроек хемилюминесценции на изображении LiCor Odyssey. система (LiCor). Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) Изображения , полученные с помощью сканирующей электронной микроскопии, были получены с использованием полевого эмиссионного электронного микроскопа FEI Quanta FEG 650 в UWE Bristol Center for Research in Biosciences Imaging Facility, с использованием выдержки 20 мкс, 30,00 кВ HV, 3,45 мкм HFW. Давление 8,33e – 7 Торр, увеличение 60 000 раз. Секвенирование РНК Тотальную РНК экстрагировали из ткани с использованием реагента TRI (Sigma-Aldrich). Образцы РНК обрабатывали набором TURBO DNA-free TM Kit (Ambion Inc.) в условиях, рекомендованных производителями, а затем очистили на спин-колонке RNA Clean & Concentrator TM -5 (Zymo Research Corp.). Качество и выход РНК проверяли с помощью спектрофотометра NanoDrop 1000 и биоанализатора Agilent 2100. Шесть образцов тотальной РНК были предоставлены и подготовлены в библиотеки для секвенирования от ~ 500 нг от Bristol Genomics Facility с использованием набора Illumina TruSeq Stranded mRNA kit. Вкратце, РНК была отобрана по полиА, химически фрагментирована до размера примерно 200 нуклеотидов (время фрагментации 4 мин) и кДНК синтезирована с использованием случайных гексамерных праймеров.Каждая отдельная библиотека получила уникальный штрих-код Illumina. Качество исходной общей РНК (разбавленной 1: 100, чтобы быть в пределах анализа) и конечных библиотек также оценивали с помощью Agilent TapeStation. RNA-seq выполняли на приборе Illumina NextSeq500 с шестью мультиплексированными библиотеками и прогоняли по четырем дорожкам на проточную кювету с использованием односторонних считываний 75 п.н. в режиме высокого выхода. Это привело к более чем 400 миллионам считываний на одну проточную кювету (651Mill, 590Mill PF), в среднем 94 миллиона считываний на образец. необработанных считываний с четырех дорожек на образец (четыре файла FASTQ) были сопоставлены с полным геномом мыши ( Mus musculus ) (GRCm38, UCSC mm10) с использованием STAR, выравнивателя с поддержкой сплайсинга (Dobin et al., 2013), с Модель гена UCSC mm10.gtf для сплайсинговых соединений и полученные файлы BAM были объединены. Опять же, используя файл UCSC mm10.gtf, количество сырых генов было оценено в объединенных файлах BAM с использованием HTSeq, с использованием метода объединения и опций –stranded = reverse (Anders et al., 2015). Дифференциальную экспрессию генов анализировали с помощью DESeq2 (Love et al., 2014) со статистической значимостью, выраженной как значение p , скорректированное на коэффициент ложного обнаружения 0,01 с использованием поправки Бенджамини-Хохберга для множественного тестирования. Генетическая онтология (GO) Анализ обогащения был проведен на генах, которые, как было обнаружено, по-разному экспрессируются между голодными и голодными клетками, с использованием DAVID (Huang da et al., 2009). Для сравнения с экспрессией клеток hTERT-RPE1 мы загрузили данные о последовательностях РНК из необработанных и лишенных сыворотки клеток hTERT-RPE1 из архива считывания последовательностей (SRA; SRR2895378 и SRR2895380).Эти образцы были отобраны для сравнения с нашими образцами 661 Вт, потому что те же протоколы соблюдались для сывороточного голодания, экстракции и очистки РНК, подготовки библиотеки и секвенирования. Однако длина считывания при секвенировании для образцов hTERT-RPE1 была короче, чем для 661 Ws (односторонние считывания 50 пар оснований) и на более низкой глубине (21 миллион считываний и 26 миллионов считываний на образец). Эти данные были ранее опубликованы в Wheway et al. (2015). Необработанные считывания hTERT-RPE1 были сопоставлены с полным геномом человека ( Homo sapiens ) (GRCh48.92, UCSC hg38) с использованием STAR (Dobin et al., 2013) с генной моделью UCSC hg38.gtf для сплайсинговых соединений. Инструмент Cufflinks (Trapnell et al., 2012) использовался для расчета транскриптов на килобазу экзонов на миллион картированных считываний (TPKM) для всех собранных транскриптов для всех образцов 661W и образцов hTERT-RPE1, а также для сравнений, проведенных между интересующими генами между hTERT. -RPE1-клеточная экспрессия и 661W-клеточная экспрессия. Результаты Чтобы подтвердить происхождение этой линии клеток от фоторецепторов колбочек и полностью охарактеризовать профиль экспрессии этих клеток, мы выполнили секвенирование полнотранскриптомной РНК на клетках 661W с и без воздействия сывороточного голодания (номер GEO: GSE119190; номер SRA: SRP159075 ) и сравнили их с экспрессией в клетках hTERT-RPE в тех же условиях роста (SRA, доступ: SRR2895378 и SRR2895380; дополнительная таблица 1).Клеткам не хватало сыворотки в течение 72 часов, чтобы побудить клетки выйти из клеточного цикла и сформировать постмитотические реснички (Santos and Reiter, 2008). Мы отфильтровали данные, чтобы специально изучить 47 генов, которые показывают характерную экспрессию в фоторецепторных клетках колбочек (Sharon et al., 2002; Corbo et al., 2007; рисунок 2A и дополнительная таблица 2). Данные показывают, что клетки 661W экспрессируют ряд маркеров колбочек. Удивительно, но наши данные, по-видимому, предполагают, что OPN1SW экспрессируется в клетках hTERT-RPE1 с TPKM около 4, но анализ в Integrative Genomics Viewer (IGV; Robinson et al., 2011), показали, что это было основано на выравнивании множества прочтений с одним экзоном OPN1SW, который является общим с соседним геном CALU, который высоко экспрессируется в этих клетках (Рисунок 2B). Основываясь на нашем анализе других выравниваний в IGV, мы решили исключить любой ген с оценкой численности менее 0,1 TPKM и рассматривать их как неэкспрессируемые. На рис. 2С показаны все маркеры происхождения колбочковых клеток, которые экспрессируются в клетках 661W, но обычно не экспрессируются в клетках hTERT-RPE1, включая альфа-трансдуцин колбочки (Gnat2) и Rom1.Данные свидетельствуют о том, что экспрессия большинства этих генов увеличивается при сывороточном голодании, предполагая, что клетки индуцируются в сторону более конусообразной судьбы при сывороточном голодании (рис. 2С). Коротковолновый и средневолновый опсин (Opn1sw и Opn1mw) и аррестин колбочек (Arr3) не экспрессировались ни в одном из типов клеток. Это контрастирует с ранее опубликованными статьями, показывающими экспрессию этих маркеров колбочек в клеточной линии 661W. В более ранних публикациях изучались ранние пассажи этого типа клеток, тогда как мы изучали клетки между 24 и 27 пассажами.Это говорит о том, что экспрессия этих маркеров колбочек не поддерживается на многих пассажах. Рисунок 2. Клетки 661W экспрессируют маркеры судьбы фоторецепторов. (A) Тепловая карта экспрессии 48 генов, характерных для фоторецепторов колбочек (Corbo et al., 2007) в клетках hTERT-RPE1 и клетках 661W в условиях сывороточного и сывороточного голодания. Шкала показывает интенсивность цвета относительно TPKM. (B) IGV снимок экрана местоположения генома OPN1SW в геноме человека hg38 с одним общим экзоном с CALU, который отвечает за сопоставление считываний с OPN1SW в клеточной линии hTERT-RPE1. (C) Тепловая карта, показывающая уровень экспрессии всех генов колбочек, экспрессируемых в клетках 661W, относительно экспрессии этих генов в клетках hTERT-RPE1. Масштабная полоса показывает интенсивность цвета относительно масштабированного значения выражения от –1 до 1 в каждой строке. Чтобы исследовать экспрессию генов ресничек в этой клеточной линии, мы извлекли данные оценки обилия транскриптов TPKM из наших данных RNAseq для генов Syscilia Gold Standard (SCGS) (van Dam et al., 2013) в голодных и не голодных клетках hTERT-RPE1 и 661W. .Опять же, исключая любые гены с оценкой численности менее 0,1 TPKM, клетки 661W показали устойчивую экспрессию 213 генов SCGS в не голодных и голодных клетках, включая такие маркеры, как Cep164, Rpgrip1l и Ift88 (дополнительная таблица 3). Клетки также экспрессируют многочисленные гены альфа-бета и гамма-тубулина, а также ферменты, участвующие в посттрансляционной модификации микротрубочек аксонем ресничек, такие как Ttll9, который участвует в полиглутамилировании тубулина. Кроме того, клетки 661W экспрессировали 33 гена, которые либо не экспрессируются в клетках hTERT-RPE1, либо экспрессируются на низком уровне в клетках hTERT-RPE1 (рис. 3A).Сюда входят многие гены заболевания, связанные с фенотипом цилиопатии сетчатки, включая гены болезни Жубера Ahi1, Arl13b, Pde6b, Tmem138 и Tmem231; Гены болезни Барде-Бидла Arl6, Bbs12, Bbs5, Bbs9, Ift74, Lztfl1 и Trim32; Ген синдрома Сеньора-Локена Iqcb1; гены болезни пигментного ретинита Arl3, Nek2, Rp2 и Topors; Ген врожденного амавроза Лебера Lca5 и; Ген синдрома Ашера Iqcb1 (рис. 3А). В дополнение к этому, клетки 661W экспрессируют несколько генов синдромальной цилиопатии, которые вообще не экспрессируются в клетках hTERT-RPE1, включая B9d1, B9d2, Evc2, Pkd1 и Tmem138 (Рисунок 3B).Для изучения генов этих заболеваний клетки 661W являются ценным ресурсом, поскольку исследования широко используемой клеточной линии сетчатки hTERT-RPE1 не будут эффективными. Рисунок 3. Клетки 661W экспрессируют маркеры судьбы реснитчатых клеток. (A) Тепловая карта, показывающая уровень экспрессии 33 генов Syscilia Gold Standard (SCGS), экспрессируемых в клетках 661W, которые либо не экспрессируются в клетках hTERT-RPE1, либо экспрессируются на низком уровне в клетках hTERT-RPE1. Зеленые точки указывают на гены болезни синдрома Жубера, синие точки указывают на гены болезни пигментного ретинита, оранжевые точки указывают на гены болезни синдрома Барде-Бидля, точка борвона указывает на ген болезни синдрома Сеньора-Локена, розовая точка указывает на ген врожденного амавроза Лебера, желтая точка указывает на синдром Ашера ген болезни.Стрелки указывают на гены синдромного заболевания, которые экспрессируются в клетках 661W, но совсем не экспрессируются в клетках hTERT-RPE1. (B) График, показывающий среднее значение TPKM выбранных генов SCGS в не голодающих клетках и клетках, лишенных сыворотки, чтобы показать активацию этих генов при голодании сыворотки, чтобы вызвать образование ресничек. ∗∗∗ p <0,005; ∗∗ p <0,01; ∗ p <0,05. Из 213 генов SCGS, экспрессируемых в клетках 661W, имеется статистически значимый ( p <0.05) повышающая или понижающая регуляция 22/213 (10,3%) этих генов при сывороточном голодании. предполагая, что клетки индуцируются к более дифференцированному состоянию после сывороточного голодания (рис. 3B). Затем мы использовали HTSeq и DESeq2 для идентификации всех генов, по-разному экспрессируемых в различных условиях (голодание или отсутствие голодания), контроль пакетных эффектов и выполнили анализ обогащения для всех совпадений с скорректированным значением p > 0,01 с использованием DAVID ( Huang da et al., 2009; дополнительная таблица 4).Это выявило ряд расширенных кластеров аннотаций, в том числе с терминами GO «дифференциация нейронов» (оценка обогащения 2,22), «развитие глаз» (оценка обогащения 0,16) и «сенсорное восприятие» (оценка обогащения 0,52), «GPCR, родопсин- как суперсемейство »(оценка обогащения 0,25) и« центросома »(оценка обогащения 0,010; дополнительная таблица 4). Иммуноокрашивание и конфокальная микроскопия этих клеток показывают, что в среднем 30,2% клеток, лишенных сыворотки, вырастают первичные реснички (st.error 2.49, n = 5 независимых повторов), со средней длиной ресничек 3,01 мкм (стандартная ошибка 0,45, n = 5 независимых повторов). Клетки локализуют многие белки ресничек в аксонеме (полиглутамилированный тубулин, Ift88), зоне перехода ресничек (Rpgrip1l), мембране ресничек (Arl13b) и базальном тельце (гамма тубулин; Фигуры 4A – D). Клетки могут вырастать первичные реснички почти до 15 мкм в длину (рис. 4В). Способность образовывать длинные реснички согласуется с длинными аксонемами колбочек in vivo .В то время как аксонема фоторецепторов палочек распространяется только вдоль части внешнего сегмента, у Xenopus laevis toads in vivo (Eckmiller, 1996) она проходит вдоль всего внешнего сегмента конуса. Аксонема большинства первичных ресничек, как правило, сильно посттрансляционно модифицируется, но в клетках 661W полиглутамилирована лишь небольшая часть проксимальной аксонемы (Рисунки 4A – D), что согласуется с аналогичным наблюдением в колбочках у мышей, которые демонстрируют обширное глутамилирование. и гликирование в соединительной области ресничек фоторецептора, но не вдоль аксонемы внешнего сегмента колбочек (Bosch Grau et al., 2017). Этот уровень посттрансляционной модификации жестко регулируется в колбочках мышей, а нарушение глицилирования, ведущее к гиперглутамилированию, ведет к дегенерации сетчатки (Bosch Grau et al., 2017). SEM показывает, что эти реснички растут в характерных ресничных ямках в клеточной мембране (Figure 4E). Рисунок 4. Клетки 661W растут длинными первичными ресничками. (A) 661W, окрашенные проксимальным аксонемным маркером, полиглутамилированным тубулином (красный), маркером базального тельца γ тубулином (зеленый), показывают, что во многих клетках растут первичные реснички.Клетки контрастировали с DAPI (синий). Шкала 10 мкм. (B) Окрашивание мембранным маркером ресничек Arl13b (зеленый) показывает, что в этих клетках рост ресничек до прибл. Длина 15 мкм, полиглутамилирована только проксимальная часть аксонемы. Масштабная полоса 10 мкм (C) Окрашивание антителом Ift88 (зеленый) показывает, что этот белок IFT локализуется вдоль реснички с более концентрированной локализацией в основании и на кончике реснички. Шкала 10 мкм. (D) Окрашивание антителом Rpgrip1l (зеленый) показывает, что этот переходный белок колокализируется с полиглутамилированным тубулином, с более концентрированной локализацией в основании этой области полиглутамилированного тубулина.Шкала 10 мкм. (E) Изображение клетки 661 W, полученное с помощью сканирующего электронного микроскопа, показывающее ресничку в ресничной ямке. Масштабная линейка = 500 нм. Для дальнейшего определения ультраструктуры этой реснички мы использовали конфокальную микроскопию с деконволюцией для анализа относительной локализации маркера центросомы и базального тела (гамма-тубулин), маркера дистального центриолярного отростка (Cep164), маркера аксонемы (Arl13b) и маркера переходной зоны. (Rpgrip1l) вдоль реснички (Fig. 5A – C). Это выявило мембрану ресничек Arl13b, отходящую от кольца Cep164, лежащую дистальнее кольца гамма-тубулина базального тельца, происходящего от материнской центриоли.Второе кольцо гамма-тубулина дочерней центриоли лежит примерно под прямым углом к ​​этому базальному телу. Rpgrip1l, маркер переходной зоны, простирается изнутри кольца Cep164 за пределы этого кольца, предположительно вдоль аксонемы реснички. Это отличается от описаний локализации Rpgrip1l в переходной зоне в первичных ресничках, где обычно видно, что он располагается в плотном кольце, более узком по диаметру до Cep164, но более дистальнее от Cep164 (Yang et al., 2015). Однако известно, что сборка переходной зоны сильно зависит от типа клеток, и Rpgrip1l играет ключевую роль в этом процессе (Wiegering et al., 2018). Распространение Rpgrip1l дальше дистальных придатков в этой клеточной линии напоминает локализацию RPGR1P1L в фоторецепторах in vivo , где он локализуется вдоль соединительной реснички (Dharmat et al., 2018). Рис. 5. Ультраструктура реснички 661 W. (A) Hyvolution визуализация дистального центриолярного маркера придатка Cep164 (красный), который локализуется специфически в зрелой материнской центриоле базального тельца, и белка ресничной мембраны Arl13b (зеленый). (B) Hyvolution визуализация дистального центриолярного маркера придатка Cep164 (красный), который локализуется специфически в зрелой материнской центриоле базального тела, и γ-тубулина (зеленый), который маркирует как материнские, так и дочерние центриоли. Масштабная линейка = 5 мкм. (C) Hyvolution визуализация дистального центриолярного маркера придатка Cep164 (красный) и белка переходной зоны Rpgrip1l (зеленый). Масштабная линейка = 5 мкм. (D) Схематическое изображение локализации белка в ресничках 661W, помечено масштабными полосами.Звездочки символизируют область полиглутамилирования аксонемы. Данные о некодирующей РНК, полученные при секвенировании РНК этой клеточной линии, идентифицируют ряд новых РНК, ранее не связанных с судьбой фоторецепторов (дополнительная таблица 5). Наиболее примечателен mmu-mir-6236, который экспрессировался на очень высоких уровнях в голодных и ненасытных клетках. Эта miRNA ранее не была связана с судьбой или функцией фоторецепторов. Было также обнаружено, что эти клетки экспрессируют miR-17-hg, которая ранее была связана с дифференцировкой нейронов (Bian et al., 2013; Mao et al., 2016) и могут способствовать дифференцировке фоторецепторов нейронов в этих клетках. Интересно, что экспрессия этой микроРНК, как было показано, способствует росту кист при поликистозной болезни почек, распространенной цилиопатии (Patel et al., 2013). Можно предположить, что эта miRNA играет роль в цилиогенезе как в почках, так и в фоторецепторах. Наконец, чтобы оценить применимость клеток 661 W для высокопроизводительного скрининга, мы выполнили нокдаун siRNA белка ресничек Ift88 в клетках 661 W в 96-луночных культуральных планшетах с оптическим дном и проанализировали количество клеток и количество ресничек с помощью высокой визуализация содержимого с использованием Arl13b и полигутамилированного тубулина в качестве маркеров ресничек (рис. 6А).Ядра были идентифицированы с использованием DAPI, а реснички были обнаружены с использованием модифицированного алгоритма анализа изображений Perkin Elmer «поиск пятен». Это показало, что нокдаун положительного контроля Plk1 индуцировал статистически значимое уменьшение количества клеток (фиг. 6B), а нокдаун Ift88 индуцировал статистически значимое уменьшение количества клеток с одной ресничкой (фиг. 6B, C). Вестерн-блоттинг подтвердил нокдаун Ift88 (фиг. 6D). Автоматический анализ изображений показал хорошее согласие с нашими ручными измерениями количества ресничек; около 22% клеток используют подсчет вручную. Рис. 6. Высококачественная визуализация ячеек мощностью 661 Вт. (A) Примеры изображений из Perkin Elmer Opera, показывающие клетки 661W, окрашенные глутамилированным тубулином (красный), Arl13b (зеленый) и DAPI (синий). (B) Среднее количество целых клеток в поле зрения статистически значимо снижается после 72 ч нокдауна миРНК Plk1 и Ift88 по сравнению с клетками, обработанными нецелевым контролем, ∗∗∗ p <0,0001. (C) % клеток с одной ресничкой на поле зрения статистически значимо снижается через 72 ч нокдауна миРНК Ift88 по сравнению с клетками, обработанными нецелевым контролем, ∗∗ p <0.001, # — контрольный эксперимент, с которым сравнивается статистическая значимость нокдаунов. (D) Вестерн-блоттинг подтверждает снижение уровня белка Ift88 (зеленый) через 72 часа нокдауна миРНК Ift88 по сравнению с нецелевым контролем. Красный показывает контроль загрузки бета-актина. Обсуждение Наше всестороннее глубокое секвенирование общей мРНК и выбранных некодирующих РНК в клеточной линии 661 W подтверждает ее происхождение от фоторецепторов колбочки и способность выращивать фоторецептороподобные реснички в культуре после сывороточного голодания (рисунки 2–4 и дополнительная таблица 1) .В недавней статье клеточная линия 661 W описана как линия клеток сетчатки, подобная ганглию, благодаря экспрессии в ней маркеров, специфичных для ганглиозных клеток сетчатки, таких как Rbpms, Pouf2, Pouf3, Thy1 и γ-синуклеин (Sayyad et al., 2017). Наши данные о последовательности РНК всего транскриптома подтверждают, что эта клеточная линия экспрессирует Rbpms, Thy1 и Sncg на низких уровнях, но не экспрессирует Pouf2 или Pouf3 (дополнительная таблица 1). Это говорит о том, что эта клеточная линия действительно имеет некоторые черты ганглиозных клеток сетчатки, но также экспрессирует маркеры судьбы фоторецепторов колбочек.Наши данные подтверждают вывод Sayyad et al. (2017), что эта клеточная линия демонстрирует свойства как ганглия сетчатки, так и фоторецепторных клеток и является полезной моделью фоторецептора in vitro . Иммунофлуоресцентная конфокальная микроскопия и деконволюция изображений этих клеток выявляют реснички, сходные по структуре с ресничками колбочки фоторецепторов in vivo . После сывороточного голодания в культуре около трети клеток расширяют ресничку длиной около трех микрон, которая посттрансляционно модифицируется только на проксимальном конце и локализует Rpgrip1l вдоль этой проксимальной области (Рис. 4, 5).Клеточная линия экспрессирует многие гены ресничек bona fide , в том числе многие мутировавшие при цилиопатиях сетчатки, и экспрессия многих из них увеличивается при сывороточном голодании клеток (фиг. 3 и дополнительная таблица 3). Нокдаун ключевого гена ресничек Ift88 приводит к стойкому снижению процента целых клеток с единственной ресничкой, что может быть легко проанализировано с помощью визуализации с высоким содержанием (Рис. 6). Наша демонстрация визуализации высокого содержания клеток 661 W иллюстрирует потенциальную полезность этой линии клеток для высокопроизводительного скрининга.Недавний высокопроизводительный скрининг малых молекул в клетках hTERT-RPE1 успешно идентифицировал эупатилин как небольшую молекулу, которая устраняет дефекты переходной зоны в клетках RPE1, нокаутирующих CEP290 (Kim et al., 2018). Подобный подход с использованием клеток 661 W может быть еще более клинически значимым методом для идентификации небольших молекул, которые могут быть использованы для лечения цилиопатий сетчатки. Точно так же клеточная линия может быть полезна для обратного генетического функционального скрининга геномики для выявления новых генов ресничек сетчатки и генов-кандидатов на цилиопатию сетчатки, аналогично предыдущим скринингам (Wheway et al., 2015). Эти методы имеют огромное значение в области, где так мало эффективных методов лечения. Клеточная линия 661 W может быть особенно полезной для изучения генов цилиопатии, которые не экспрессируются в клетках hTERT-RPE1 или экспрессируются только на низком уровне в этой клеточной линии (рис. 3A). Таким образом, мы предоставляем доказательства того, что клетки 661 W являются полезной моделью in vitro для изучения цилиопатий сетчатки. Взносы авторов GW задумал исследование, провел эксперименты, провел анализ данных, визуализацию, анализ изображений, биоинформатический анализ и написал статью.LN провела эксперименты, провела анализ данных, визуализацию и анализ изображений. DT внесла свой вклад в биоинформатический анализ. Компания SC предоставила поддержку в области высокопроизводительной визуализации и анализа изображений. Финансирование LN и GW поддерживаются небольшой премией SAC019 Национального совета по исследованиям глаз, премией Wellcome Trust Seed Award в области науки (грант № 204378 / Z / 16 / Z) и фондами исследований качества UWE Bristol. SC был поддержан Институтом Элизабет Блэквелл через награду Wellcome Trust ISSF. Заявление о конфликте интересов Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов. Благодарности Мы хотели бы поблагодарить доктора Дэвида Паттона за помощь с SEM. Мы хотели бы поблагодарить профессора Муайяда Аль-Убайди за дар клеток 661 W и профессора Джереми Натанса за дар антител к опсину. Мы хотели бы поблагодарить всех сотрудников Scientific Volume Imaging за помощь в деконволюции Гюйгенса.GW благодарит профессора Дэвида Стивенса и профессора Кэтрин Нобс за предоставление доступа к лабораториям Школы биохимии Бристольского университета. Дополнительные материалы Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fgene.2019.00308/full#supplementary-material ТАБЛИЦА S1 | Оценки обилия транскриптов в транскриптах на килобаз экзона на миллион картированных считываний (TPKM) для всех генов во всех повторах голодных и не голодных клеток 661W (вкладка 1) и клеток hTERT-RPE1 (вкладка 2). ТАБЛИЦА S2 | Оценка обилия транскриптов в транскриптах на килобаз экзона на миллион картированных считываний (TPKM) для 47 генов колбочек фоторецепторов во всех повторах голодных и не голодных клеток 661W и клеток hTERT-RPE1. ТАБЛИЦА S3 | Оценка обилия транскриптов в транскриптах на килобазу экзона на миллион картированных считываний (TPKM) для 277 генов Syscilia Gold Standard (SCGS) во всех повторах голодных и не голодных клеток 661W и клеток hTERT-RPE1. ТАБЛИЦА S4 | Результаты анализа дифференциальной экспрессии генов голодных и не голодных клеток 661W (вкладка 1) и кластерного анализа функциональной аннотации DAVID дифференциально экспрессируемых генов (вкладка 2). ТАБЛИЦА S5 | Оценка обилия транскриптов в транскриптах на килобаз экзона на миллион картированных считываний (TPKM) для некодирующих РНК во всех повторах голодных и не голодных клеток 661W. Сноски https://sph.uth.edu/retnet/sum-dis.htm Список литературы Альстром, К. Х. (1957). Врожденная ретинопатия — monohybrida recessiva autosomalis. Hereditas 43, 1–77. Google Scholar Андерс, С., Пил, П. Т., и Хубер, В. (2015). HTSeq — среда Python для работы с высокопроизводительными данными секвенирования. Биоинформатика 31, 166–169. DOI: 10.1093 / биоинформатика / btu638 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Bian, S., Hong, J., Li, Q., Schebelle, L., Pollock, A., Knauss, J. L., et al. (2013). Кластер микроРНК miR-17-92 регулирует экспансию нервных стволовых клеток и переход к промежуточным предшественникам в развивающейся неокортексе мыши. Cell Rep. 3, 1398–1406. DOI: 10.1016 / j.celrep.2013.03.037 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Bosch Grau, M., Masson, C., Gadadhar, S., Rocha, C., Tort, O., Marques Sousa, P., et al. (2017). Нарушение баланса глицилирования тубулина и глутамилирования в фоторецепторах приводит к дегенерации сетчатки. J. Cell Sci. 130, 938–949. DOI: 10.1242 / jcs.199091 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Карпентер, А.E., Jones, T. R., Lamprecht, M. R., Clarke, C., Kang, I.H., Friman, O., et al. (2006). CellProfiler: программное обеспечение для анализа изображений для определения и количественной оценки фенотипов клеток. Genome Biol. 7: R100. DOI: 10.1186 / GB-2006-7-10-r100 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Коллин, Г. Б., Маршалл, Дж. Д., Кинг, Б. Л., Милан, Г., Маффеи, П., Джаггер, Д. Дж. И др. (2012). Белок синдрома Альстрома, ALMS1, взаимодействует с альфа-актинином и компонентами пути рециклинга эндосом. PLoS One 7: e37925. DOI: 10.1371 / journal.pone.0037925 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Корбо, Дж. К., Майерс, К. А., Лоуренс, К. А., Джадхав, А. П., и Чепко, К. Л. (2007). Типология паттернов экспрессии гена фоторецепторов у мышей. Proc. Natl. Акад. Sci. США 104, 12069–12074. DOI: 10.1073 / pnas.0705465104 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar ден Холландер, А. И., Коенекоп, Р.К., Мохамед, М. Д., Артс, Х. Х., Болдт, К., Таунс, К. В. и др. (2007). Мутации в LCA5, кодирующем цилиарный белок леберсилин, вызывают врожденный амавроз Лебера. Nat. Genet. 39, 889–895. DOI: 10,1038 / ng2066 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar den Hollander, A. I., Koenekoop, R. K., Yzer, S., Lopez, I., Arends, M. L., Voesenek, K. E. J., et al. (2006). Мутации в гене CEP290 (NPHP6) — частая причина врожденного амавроза Лебера. Am. J. Hum. Genet. 79, 556–561. DOI: 10.1086 / 507318 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Дхармат Р., Эблимит А., Робишо М. А., Чжан З., Нгуен Т. Т., Юнг С. Ю. и др. (2018). SPATA7 поддерживает новую зону, специфичную для фоторецепторов, в дистальной соединительной ресничке. J. Cell Biol. 217: 2851. DOI: 10.1083 / jcb.201712117 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Добин, А., Дэвис, К.A., Schlesinger, F., Drenkow, J., Zaleski, C., Jha, S., et al. (2013). STAR: сверхбыстрый универсальный выравниватель RNA-seq. Биоинформатика 29, 15–21. DOI: 10.1093 / биоинформатика PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Dryja, T. P., Adams, S. M., Grimsby, J. L., McGee, T. L., Hong, D., Li, T., et al. (2001). Нулевые аллели RPGRIP1 у пациентов с врожденным амаврозом Лебера. Am. J. Hum. Genet. 68, 1295–1298. DOI: 10.1086 / 320113 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Данн, К.К., Аотаки-Кин, А. Е., Путки, Ф. Р., и Хьелмеланд, Л. М. (1996). ARPE-19, линия пигментных эпителиальных клеток сетчатки человека с дифференцированными свойствами. Exp. Eye Res. 62, 155–169. DOI: 10.1006 / exer.1996.0020 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Экмиллер, М. С. (1996). Обновление аксонемы ресничек в конусных внешних сегментах сетчатки Xenopus laevis . Cell Tissue Res. 285, 165–169. DOI: 10.1007 / s004410050632 CrossRef Полный текст | Google Scholar Эйраку, М., Таката, Н., Исибаши, Х., Кавада, М., Сакакура, Э., Окуда, С. и др. (2011). Самоорганизующийся морфогенез глазного яблока в трехмерной культуре. Природа 472, 51–56. DOI: 10.1038 / nature09941 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Эстрада-Кускано, А., Коенекоп, Р., и Коль, К. Ф. (2010). Мутации IQCB1 у пациентов с врожденным амаврозом Лебера. Инвест. Офтальмол. Vis. Sci. 52, 834–839. DOI: 10.1167 / iovs.10-5221 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Головлева, И., Кон, Л., Бурстедт, М., Дайгер, С., и Сандгрен, О. (2010). Спектры мутаций при аутосомно-доминантном и рецессивном пигментном ретините в северной Швеции. Adv. Exp. Med. Биол. 664, 255–262. DOI: 10.1007 / 978-1-4419-1399-9_29 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Hamel, C.P., Griffoin, J.M., Bazalgette, C., Lasquellec, L., Duval, P.A., Bareil, C., et al. (2000). Молекулярная генетика пигментных ретинопатий: выявление мутаций в генах CHM, RDS, RHO, RPE65, USh3A и XLRS1. J. Fr. Офтальмол. 23, 985–995. PubMed Аннотация | Google Scholar Хирн Т., Ренфорт Г. Л., Спаллуто К., Хэнли Н. А., Пайпер К., Бриквуд С. и др. (2002). Мутация ALMS1, большого гена с тандемным повтором, кодирующим 47 аминокислот, вызывает синдром альстрома. Nat. Genet. 31, 79–83. DOI: 10.1038 / ng874 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Heher, K. L., Traboulsi, E. I., and Maumenee, I.H.(1992). Естественное течение врожденного амавроза Леберса — возрастные данные у 35 пациентов. Офтальмология 99, 241–245. DOI: 10.1016 / S0161-6420 (92) 31985-2 CrossRef Полный текст | Google Scholar Хуанг да, В., Шерман, Б. Т., и Лемпицки, Р. А. (2009). Систематический и комплексный анализ больших списков генов с использованием ресурсов биоинформатики DAVID. Nat. Protoc. 4, 44–57. DOI: 10.1038 / nprot.2008.211 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Каменцкий, Л., Джонс, Т. Р., Фрейзер, А., Брей, М. А., Логан, Д. Дж., Мэдден, К. Л. и др. (2011). Улучшенная структура, функции и совместимость с Cell Profiler: модульное высокопроизводительное программное обеспечение для анализа изображений. Биоинформатика 27, 1179–1180. DOI: 10.1093 / биоинформатика / btr095 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Ким, Ю. Дж., Ким, С., Юнг, Ю., Юнг, Э., Квон, Х. Дж., И Ким, Дж. (2018). Эупатилин устраняет дефекты переходной зоны ресничек, улучшая фенотипы, связанные с цилиопатией. J. Clin. Инвестировать. 128, 3642–3648. DOI: 10.1172 / JCI99232 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Ли К., Уоллингфорд Дж. Б. и Гросс Дж. М. (2014). Cluap1 важен для цилиогенеза и поддержания фоторецепторов в глазах позвоночных. Инвест. Офтальмол. Vis. Sci. 55, 4585–4592. DOI: 10.1167 / iovs.14-14888 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Mansergh, F. C., Vawda, R., Millington-Ward, S., Kenna, P.F., Haas, J., Gallagher, C., et al. (2010). Потеря фоторецепторного потенциала из культур клеток-предшественников сетчатки, несмотря на улучшение выживаемости. Exp. Eye Res. 91, 500–512. DOI: 10.1016 / j.exer.2010.07.003 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Мао, С., Ли, X., Ван, Дж., Дин, X., Чжан, К., и Ли, Л. (2016). miR-17-92 облегчает нейрональную дифференцировку трансплантированных нервных стволовых клеток / клеток-предшественников при нейровоспалительных условиях. J. Нейровоспаление 13: 208. DOI: 10.1186 / s12974-016-0685-5 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Меллоу, К. Б., Сернагор, Э., Морено-Гимено, И., Стил, Д. Х., Лако, М. (2012). Эффективная стадия дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток человека в фоторецепторные клетки сетчатки. Стволовые клетки 30, 673–686. DOI: 10.1002 / стержень.1037 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Мейер, Дж.С., Хауден, С. Е., Уоллес, К. А., Верховен, А. Д., Райт, Л. С., Каповски, Е. Е. и др. (2011). Структуры, подобные оптическим пузырькам, полученные из плюрипотентных стволовых клеток человека, облегчают индивидуальный подход к лечению заболеваний сетчатки. Стволовые клетки 29, 1206–1218. DOI: 10.1002 / стержень.674 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Накано Т., Андо С., Таката Н., Кавада М., Мугурума К., Секигучи К. и др. (2012). Самообразование глазных бокалов и хранимой стратифицированной нервной сетчатки из человеческих ESCs. Стволовые клетки клеток 10, 771–785. DOI: 10.1016 / j.stem.2012.05.009 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Патель В., Уильямс Д., Хаджарнис С., Хантер Р., Понтоглио М., Сомло С. и др. (2013). miR-17∼92 кластер miRNA способствует росту кисты почек при поликистозной болезни почек. Proc. Natl. Акад. Sci. США 110, 10765–10770. DOI: 10.1073 / pnas.1301693110 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Пирринг, Дж.Н., Салинас, Р. Ю., Бейкер, С. А., Аршавский, В. Ю. (2013). Сортировка, нацеливание и перемещение белков в фоторецепторных клетках. Prog. Ретин. Eye Res. 36, 24–51. DOI: 10.1016 / j.preteyeres.2013.03.002 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Райхман, С., Террей, А., Слембрук, А., Нанто, К., Орие, Г., Хабелер, В., и др. (2014). От конфлюэнтных iPS-клеток человека до самоформирующихся нервных клеток сетчатки и пигментированного эпителия сетчатки. Proc.Natl. Акад. Sci. США 111, 8518–8523. DOI: 10.1073 / pnas.1324212111 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Робинсон, Дж. Т., Торвальдсдоттир, Х., Винклер, В., Гутман, М., Ландер, Э. С., Гетц, Г. и др. (2011). Программа просмотра интегративной геномики. Nat. Biotechnol. 29:24. DOI: 10.1038 / NBT.1754 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Ронкильо, К. К., Ханке-Гогохия, К., Ревело, М. П., Фредерик, Дж.М., Цзян Л. и Баэр В. (2016). Связанный с цилиопатией белок IQCB1 / NPHP5 необходим для образования внешнего сегмента фоторецептора мыши. FASEB J. 30, 3400–3412. DOI: 10.1096 / fj.201600511R PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Руф, Д., Адамян, М., Джейкобс, Д., и Хейс, А. (1991). Специализация цитоскелета на дистальном конце фоторецептора стержня. J. Comp. Neurol. 305, 289–303. DOI: 10.1002 / cne. 0210 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Сайяд, З., Сирохи, К., Радха, В., Сваруп, Г. (2017). 661W представляет собой клеточную линию, подобную предшественнику ганглия сетчатки, в которой ассоциированные с глаукомой мутанты оптинейрина селективно индуцируют гибель клеток. Sci. Отчет 7: 16855. DOI: 10.1038 / s41598-017-17241-0 PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar Schappert-kimmijser, J., Henkes, H.E., and Van den Bosch, J. (1959). Врожденный амавроз (Лебер). Arch. Офтальмол. 1959, 211–218. DOI: 10.1001 / archopht.1959.009400

Стенторы пользователем Ховард Уэбб (Сент-Луис, Миссури, США) США)

Вступление

Стенторы — одноклеточные инфузории, известные своей трубой. как форма (отсюда и название стентор, от греческого вестника Троянская война).Стенторы — одни из самых крупных одноклеточных организмов, иногда достигая нескольких миллиметров в длину.

Где найти

Стенторы обычно встречаются в спокойной воде прудов и озера, как правило, у поверхности, прикрепленные к листьям или веткам. Хотя они могут свободно плавать, они чаще всего замечены сгруппированными в небольшие колонии. Эти конкретные стенты были найдены в кластере, прикрепленном к стороне сборная банка.Я собрал несколько веточек на мелководье (Я действительно искал гидру), и они стали очевидными примерно через неделю. Я использовал небольшую пипетку, чтобы соскоблить колония со стороны банки и перенесла ее на горку для наблюдения.

Обычно, чтобы найти стенторы, нужно немного поохотиться, хотя я иногда находили их настолько толстыми, что образец окрашивался зеленый от их присутствия.

Анатомия

Наиболее примечательным из стента является «корона» ресничек. окружающий трубу «колокол». Эта корона не полная круг. Эти реснички используются для создания потока воды из который подметает пищу. Время от времени стентор будет закрыть коронку ресничек и контакт, принося пищу внутрь его клеточная структура.

Коронка — это не единственные реснички на стенторе, это все его тело. покрыт более короткими ресничками, которые используются для передвижения при свободном плавании.При движении стентор сжимается в овал или грушу.

Будучи одноклеточным, нет отдельных частей, составляющих «рот» или другие органы. Для пищеварения клеточная стенка обволакивает пищу и разделяется, образуя круглый пузырь, похожий на «вакуоль» внутри клетки. После питания из пища извлекается, эта вакуоль перемещается к внешней клеточной стенке и «хлопает», удаляя оставшееся содержимое.С стенты имеют более высокую плотность клеток, чем вода, в которой они живут, осмотическое давление заставляет воду переноситься в клетка. Ячейка стента активно собирает эту лишнюю воду. в вакуоль и выталкивает ее; тем самым поддерживая внутренняя плотность жидкости.

Поведение

Стенторы, как и большинство инфузорий, являются фильтраторами; пассивно едят все, что попадает в их сторону.Они обычно питаются бактериями и водорослями, хотя большие стенты сообщил, что поедает коловратки или что-нибудь еще что они могут поймать.

Изображений

В отличие от некоторых вихрей, где вся колония соединен как единый организм, колония стенты — это группа отдельных организмов которые просто случайно расположены вместе.Эта колония выглядела как пятно плесень начинает формироваться на стороне сборная бутылка. Я оттолкнул его пипетку, и перенес ее в микроскоп горка.

Стенторы

Когда стенты путешествуя, они не в обычной трубе формы, но сжимаются в более овальную форму.Реснички на колокольчике закрываются, и реснички на теле используются для передвижения. Осветитель был перемещен вниз, чтобы дать больше контраст (а также появляется больше фона артефакты — сравните со следующим фото).




Другой стент в движении.

Стенторы имеют довольно сложную репродуктивную цикл. Здесь проходит разделение стента.

Пищевая вакуоль опорожняется.

Фильм о ресничках вокруг колокола стентор. Колокол — это больше, чем простая круглая форма.

Фильм, показывающий течение воды, производимое ресничками, и сократительная вакуоль усадка.

Технические подробности

Условия окружающей среды :
Температура воды : 23C
Глубина : собирается около на берегу, на глубине менее 6 дюймов
Видимость по Секки : 2 метра
Местоположение : карьер на Парк Уайтклифф, Крествуд, Миссури (широта: 38,5561, долгота: -90.3688 (NAD83 / WGS84)). В парке есть старый заброшенный карьер, который, вероятно, является одним из самых глубоких водоемов в площадь. Карьер обычно закрыт для публики, хотя город был достаточно любезен, чтобы дать мне доступ.

Микроскоп: Монокуляр Bausch & Lomb, окуляр 10x, Объективы с 4-кратным, 10-кратным и 40-кратным увеличением.
Подсветка: Luxeon K2 LED

Камера : Canon A540 (6 мегапикселей)

Программное обеспечение : Photoshop Elements, VirtualDub

использованная литература

Вэнс Тартар, Биология Стентор, Оксфорд, Нью-Йорк, Pergammon Press, 1961
Это классическая работа.Большая часть текста описывает исследования стентов нарезки и нарезки, а также наблюдение за их регенерация; хотя есть подробное освещение их анатомия и поведение, а также методы культивирования.

Комментарии к автору приветствуются.

Microscopy UK Front Page


Micscape Magazine
Библиотека статей

---

Microscopy UK или их участники.

Опубликовано в июле 2007 г. выпуск журнала Micscape.

Сообщайте о любых проблемах с Интернетом или предложите общие комментарии к Micscape Редактор,
через контакт в текущем индексе Micscape.

Micscape — это он-лайн ежемесячный журнал Microscopy UK web
на сайте http: // www.microscopy-uk.org.uk/

.